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哈尔滨地区朝鲜族乡华支睾吸虫感染情况调查
哈尔滨市尚志县河东乡和五常县民乐乡位于黑龙江省南部,是较大的朝鲜族集居地区,两地朝鲜族人口3万左右.2000年5～8月对该两地华支睾吸虫感染情况做了调查.1.调查方法:用1∶4 000稀释的成虫抗原皮内注射0.03 ml,将皮试阳性者作为粪检对象.因当地条件所限,采用直接涂片法,1次送检每份查3片.
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华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原的免疫印迹分析
目的 寻找华支睾吸虫成虫抗原中具有特异性诊断价值的抗原组分.方法 应用SDS-PAGE和Western blot分析华支睾吸虫成虫未脱脂、脱脂的可溶性抗原蛋白组分的血清学反应特征. 结果未脱脂成虫抗原有14条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应,其中分子质量单位为180、170、100、67、41、37、35、32、26 ku是主带,180、170、37、35 ku条带还可与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应.脱脂成虫抗原有10条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应,其中分子质量单位为180、100、67、37、35、24、20 ku是主带,此外,180 ku带可与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应,78 ku带可以与血吸虫病病人血清发生交叉反应.结论 华支睾吸虫成虫抗原经脱脂处理后可减少与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清交叉反应的蛋白组分数量.华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原中主要的特异性抗原组分分别是100、67、41、32、26 ku和100、67、37、35、24、20 ku,这些组分抗原可用于华支睾吸虫病的免疫诊断.
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黑龙江省肇源县人群华支睾吸虫感染调查
肇源县地处黑龙江省西部,松花江和嫩江两江左岸.自然资源丰富,"水、草、田"三分天下.现有可养殖水面达55 400 m2,历史上曾是清王宝鳇鱼贡品的重要产地.现有鱼类品种6目11种39科,是全国商品鱼基地县.此次调查永利乡孟克里村和前?永利村,人口5 000人左右,人均收入1 500元,以水田养殖,种植高梁、玉米和水稻为主.1方法1.1 皮试采用1:40 000稀释的华支睾吸虫成虫抗原,皮内注
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螨成虫抗原间接荧光抗体试验检测肺螨病
肺螨病是某些螨类经呼吸道侵入人体寄生于肺部而引起的一种疾病,并在特定的人群中有较高的感染率和发病率[1],因该病无特殊的临床表现,加之痰检较为繁杂,技术要求高,故而诊断困难.为了寻找一种简便可靠的免疫学诊断方法,作者以粉尘螨成螨作抗原,应用间接荧光抗体试验,对58例肺螨病患者的血清进行了检测,现将结果报道如下.
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旋毛虫成虫抗原的免疫保护性研究进展
该文介绍了旋毛虫成虫抗原免疫保护性研究的进展.通过比较三期抗原的免疫保护性,表明旋毛虫成虫抗原具有较强的免疫保护作用,该抗原可能是研制旋毛虫病疫苗的重要候选抗原.利用DNA重组技术将保护性强的成虫抗原的基因克隆并在体外表达,将是获得旋毛虫病疫苗抗原的重要方法.
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美洲钩虫病患者血清优势抗体的检测分析
目的 检测钩虫成虫抗原对钩虫病患者血清的反应性,以分析钩虫病患者血清中识别抗原组分的优势特异抗体类或亚类.方法 以美洲钩虫成虫粗抗原为包被抗原,应用辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人抗体(不同类或亚类)作为检测试剂进行酶联免疫吸附试验(ELISA),分析比较钩虫病患者、健康人及其他寄生虫病患者的血清抗体的反应性.结果 ELISA法分析显示,98份钩虫病患者血清含有特异抗体IgM、IgD、IgE、IgG、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的比例分别为41.84％、2.04％、1.02％、92.93％、19.39％、25.51％、17.35％和88.78％;而健康人和其他寄生虫病患者血清未检测到相应抗体的比例分别为77.61％、97.01％、92.54％、79.10％、95.52％、92.53％、92.53％和92.53％;若分别以这些特异抗体为检测靶,其诊断效能分别为56.36％、40.61％、38.18％、87.88％、50.30％、52.73％、47.88％和90.30％.IgG4和IgG作为检测靶分子的检测敏感性远高于IgM、IgD、IgE及其他3种IgG亚类(P＜0.05).IgG4与IgG之间检测的敏感性差异无统计学意义(x2=1.61,P＞0.05),IgG4的特异性高于IgG(x2=4.97,P＜0.05).结论 IgG4抗体为美洲钩虫病患者(或感染者)血清中特异优势抗体.
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重组血吸虫诊断抗原研究进展
免疫学方法为诊断血吸虫病的重要手段,目前,用于血吸虫病免疫诊断的常用的抗原是成虫抗原和虫卵抗原.成虫抗原和虫卵抗原成分复杂,针对两种抗原的血清抗体在宿主体内长期存在,不能区别早期感染和既往感染,不能考核疗效,并且这两种抗原不易大量获得.现代生物技术的发展为解决上述问题提供了机遇.基因克隆技术能够帮助寻找刺激宿主产生短程抗体的某些抗原表位,通过检测短程抗体来评价治疗效果.同时依靠基因重组技术可以生产出相应的重组抗原分子,为现场推广应用所需大量的抗原材料提供了保证.本文主要就国内外研制基因重组抗原及其在血吸虫病诊断中的应用加以综述.
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鄱阳湖区血吸虫病人免疫状态研究Ⅰ血吸虫病人特异性同种型抗体特征分析
目的 了解鄱阳湖区血吸虫病人特异性同种型抗体反应水平及特征.方法 以可溶性虫卵抗原(SEA)和成虫抗原(AWA)为检测抗原,采用间接ELISA法检测血吸虫病流行区及非流行区人群血清中8种特异性同种型抗体(IgG、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgM、IgA)水平.结果 血吸虫病流行区粪检阳性人群特异性同种型抗体水平显著高于流行区粪检阴性人群和非流行区人群(P均＜ 0.001),流行区粪检阴性人群除SEA和AWA特异性IgG2、IgG4和抗AWA-IgE抗体外,其他同种型抗体水平均显著高于非流行区人群(P均＜ 0.05).流行区粪检阳性人群中,儿童SEA、AWA特异性IgM和SEA-IgG1水平显著高于成人,AWA特异性IgG水平则显著低于成人(F=6.136,P=0.014);男性除AWA特异性IgG(F=4.677,P=0.032)和IgG1(F=5.55,P=0.020)显著高于女性外,其他抗体同种型之间差异均无统计学意义(P均＞0.05).治疗3个月后,SEA抗原特异性IgG1、IgG3、IgG4抗体水平显著下降(P＜0.001,P=0.029,P=0.044);治疗12个月后,除SEA特异性IgE、IgM和AWA-IgG4、IgM外,其他抗体均显著低于治疗前水平(P均＜0.05).结论 血吸虫病流行区粪检阳性人群血吸虫特异性同种型抗体水平显著高于流行区粪检阴性人群和非流行区人群,治疗12个月后,大部分同种型抗体水平显著下降；流行区粪检阴性人群血吸虫特异性抗体水平高于非流行区人群.抗体诊断试剂盒研制应注意阴性参考血清的选择.
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重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断研究进展
目前,用于血吸虫病免疫诊断的常用的抗原是成虫抗原和虫卵抗原,由于这两种粗抗原的成分复杂,且与其他寄生虫感染血清存在着较严重的交叉反应,血吸虫病诊断的特异性不高,生产的试剂不宜标准化.
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日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验
目的分离日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)中的组分抗原,分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性.方法电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原,计算各组分抗原的分子量,并分析其免疫学活性.将各组分抗原分别免疫小鼠,攻击感染日本血吸虫尾蚴,感染后45d剖杀,观察各组分抗原的免疫保护效果.结果采用电泳层析法分离获得多个组分抗原,选择收集其中4个较纯的组分抗原,分子量分别为52kD、63kD、67kD和74kD;其中63kD和67kD抗原与感染血清有强的反应,而52kD和74kD抗原则反应弱;4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应.63kD抗原诱导的免疫保护力水平较52kD、67kD和74kD抗原好.结论电泳层析法分离的4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性,且63kD抗原有一定的免疫保护性.
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华支睾吸虫成虫抗原和排泄分泌产物对T细胞的作用研究
目的 观察华支睾吸虫成虫抗原(Crude antigen,CA)、排泄/分泌产物(excretory-secretory products,ESPs)对T细胞的作用.方法 体外分离小鼠骨髓细胞诱导分化为未成熟骨髓树突状细胞(immature DC,iDC);磁珠分选仪分选小鼠脾脏细胞的初始CD4+T细胞;流式细胞术检测DC、CD4+T细胞的纯度;抗原刺激DC细胞,实验分为PBS阴性对照组,LPS阳性对照组,CA和ESPs刺激组;负载抗原后的DC细胞与分选的CD4+T细胞共培养72 h;Real time-PCR检测T-bet、GATA3mRNA的相对表达量;ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-4细胞因子的表达量.结果 与PBS组相比,ESPs刺激组T-bet、GATA3 mRNA表达水平升高(P＜0.05),而CA刺激组T-bet、GATA3 mRNA表达水平差异不显著;与PBS组相比,ESPs刺激组细胞因子IFN-γ、IL-4的含量均升高(P＜0.05),CA刺激组仅IFN-γ的分泌增高(P＜0.05),IL-4无明显变化.结论 CA可能诱导宿主产生Th1型免疫应答,ESPs可能诱导宿主产生Th1型、Th2型免疫应答.
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致弱尾蚴感染血清对日本血吸虫尾蚴和成虫抗原免疫识别初步研究
众所周知,血吸虫减毒尾蚴可诱导宿主产生较高免疫保护力,但是,刺激宿主免疫系统的究竟是哪些目标抗原,目前仍未定论.血清被动转移实验证明减毒尾蚴多次免疫后血清可诱导宿主产生针对幼虫期的免疫保护,因此我们用多次免疫兔血清初步筛选日本血吸虫可溶性尾蚴中的保护性抗原,以期为血吸虫疫苗的研制提供一些新的线索.
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卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原
目的:寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析.结果:卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带,其中相对分子质量为53 000、31 000、25 000、16 000、11 000是主带;相对分子质量为53 000和34 000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应;108 000、94 000、65 000的条带可与血吸虫病患者血清反应;58 000、53 000、43 000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应.37 000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别,而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应.结论:卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37 000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原,可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查.
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广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原及其诊断价值分析
目的 对比分析广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原(LESA)与成虫抗原(AWA),探讨其诊断价值.方法 广州管圆线虫三期幼虫感染小鼠,21 d后取小鼠脑内幼虫进行体外培养,收集幼虫排泄分泌蛋白,并与广州管圆线虫成虫匀浆蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,分别用两种抗原建立LESA-ELISA和AWA-ELISA以检测小鼠血清和不同人群血清.结果 SDS-PAGE和Western blot显示幼虫排泄分泌蛋白条带和抗原反应带较成虫少；LESA与小鼠感染血清和广州管圆线虫病患者血清在M,40000和Mr26000处均出现强反应带；感染小鼠血清中抗LESA和AWA的IgG和IgM抗体自感染后开始上升,5d后达到高峰,第10天后开始下降；LESA-ELISA用于检测广州管圆线虫病疑似病人血清阳性率低于AWA-ELISA；检测血吸虫和华支睾吸虫感染病人血清的交叉阳性率明显低于AWA-ELISA；检测献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较AWA-ELISA少.结论 LESA的抗原反应带较AWA少,尽管对广州管圆线虫病疑似病例血清抗体阳性率略低于AWA,但其特异性高；具有潜在的广州管圆线虫病早期诊断和现症感染诊断价值.
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华支睾吸虫抗原纯化研究现况
随着华支睾吸虫防治工作的进展,其患病率及感染率逐步下降,而诊断的难度渐趋加大,原主要诊断方法--粪检固有的缺陷(工作量大,工作效率低,易漏检,群众不乐意接受)愈加突出,免疫诊断在临床辅助诊断和疫区流行病学调查中占据愈来愈重要的地位.诊断抗原的优劣决定着血清抗体检测、皮肤试验等免疫方法的诊断效果.目前所用的抗原主要为粗制成虫抗原,严重影响免疫诊断效果(1).因此,已有不少学者用不同方法对华支睾吸虫成虫粗抗原进行纯化研究.现按不同的研究方法综述如下.
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日本血吸虫可溶性成虫抗原和可溶性虫卵抗原对小鼠1型糖尿病的拮抗作用研究
目的：探讨日本血吸虫可溶性成虫抗原（SWA）和可溶性虫卵抗原（SEA）对小鼠1型糖尿病的拮抗作用。方法把24只成功建模的1型糖尿病小鼠随机分3组（A、B、C 组），每组8只小鼠。同时制备日本血吸虫 SWA 和 SEA。A 组模型鼠经腹部皮下多点注射日本血吸虫 SWA 进行免疫；B 组模型鼠经腹部皮下多点注射日本血吸虫 SEA 进行免疫；C 组模型鼠用 PBS 代替抗原腹部皮下免疫，1周免疫1次，共4次，4周后，颈椎脱臼处死各组小鼠，留取血清，采用 ELISA 双抗夹心法测定各组小鼠血清中 IL-4和 IFN-γ的水平，并取胰腺观察病理改变。结果免疫4周后，B 组小鼠血清 IL-4水平[（23．87±4．85）pg/mL]高于 C 组[（4．39±0．56）pg/mL]，差异有统计学意义（P ＜0．01），而 IFN-γ水平[（271．85±26．04）pg/mL]低于 C 组[（362．79±32．50）pg/mL]，差异也具有统计学意义（P ＜0．01）。但是 A 组小鼠 IL-4水平[（5．09±0．37）pg/mL]和 IFN-γ水平[（379．56±34．47）pg/mL]，与 C 组比较，差异无统计学意义（P ＞0．05）。B 组小鼠的胰岛结构虽没有保持完整，但淋巴细胞浸润较 C 组少，胰岛内部也未见大量淋巴细胞浸润。与 C 组小鼠胰腺相比，A 组小鼠胰腺未见明显变化，胰岛仍可见大量淋巴细胞浸润，残余胰岛细胞数量减少，并可见少数胰岛结构被破坏。结论日本血吸虫 SEA 对糖尿病1型小鼠具有一定拮抗作用，其作用机制可能是通过使 IL-4升高和 IFN-γ下降，调节 Th1/Th2免疫偏移，导致 Th1反应下调，Th2反应增强。
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日本血吸虫成虫抗原和虫卵抗原检测先天性感染仔兔血清抗体的动态变化
目的观察仔兔血清抗体动态变化,探讨家兔日本血吸虫病垂直传播的体液免疫反应规律.方法5只怀孕晚期母兔分别人工感染500条日本血吸虫尾蚴/只,仔兔出生后43 d起每隔2周采血收集血清,至仔兔发育成熟(约出生后113 d).分别运用日本血吸虫成虫抗原(AWA)和可溶性虫卵抗原(SEA),ELISA法检测血清中特异性IgG、IgM抗体,观察动态变化.结果仔兔先天性感染率为60%(12/20),其中5只双性感染,7只单性感染.20只仔兔,抗AWA-IgG、抗AWA-IgM抗体检测始终呈阴性;抗SEA-IgG检测,5只双性感染仔兔有4只于出生后57 d起陆续呈阳性,其余16只始终为阴性;20只仔兔抗SEA-IgM也始终呈阴性.结论先天性感染日本血吸虫病的仔兔呈低免疫应答状态,可能存在免疫耐受.
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旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原保护性免疫的比较研究
目的:比较旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原诱导小鼠产生保护性免疫效果的异同.方法:制备旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原,分组免疫小鼠,并于末次免疫后10 d用旋毛虫感染性幼虫对各组小鼠实施攻击感染,检测攻击感染后各组小鼠肠道成虫和肌肉幼虫数并计算减虫率,同时采用ELISA法检测各组小鼠血清IgG抗体水平.结果:成虫抗原免疫组小鼠和肌幼虫抗原免疫组小鼠检获的肠道成虫数和肌幼虫数均显著少于对照组(P＜0.05),其中以成虫抗原免疫组小鼠减虫率高(P＜0.01).成虫抗原免疫组和肌幼虫抗原免疫组小鼠于实施旋毛虫感染性幼虫进行攻击感染的当日所检测的血清IgG抗体水平与其免疫前相比均升高(P＜0.01,P＜0.05),与对照组相比亦升高(P＜0.01,P＜0.05),其中也以成虫抗原免疫组小鼠血清IgG抗体升高为显著(P＜0.01).结论:旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原均能激发小鼠产生保护性免疫,其中成虫抗原免疫组小鼠显示出更好的抗感染保护性.
