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从基因水平对IL-5与IL-10在日本血吸虫感染小鼠中作用的探讨
本研究对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL-5和IL-10 2种细胞因子从mRNA转录水平进行研究,以探索这2种细胞因子mRNA转录水平的动态变化与肉芽肿形成与调节的可能性.日本血吸虫尾蚴感染雄性BALB/C小鼠后,分别于感染后3周、5周、8周、10周和12周取小鼠脾脏,制备脾细胞单细胞悬液并于含ConA或SEA的培养基中培养后提取脾细胞总RNA.RT-PCR及凝胶分析法被用来分析总RNA样品中IL-5及IL-10mRNA转录水平. 研究结果显示,未感染和感染3周小鼠脾细胞均无IL-5和IL-10的表达,感染后第5周的小鼠脾细胞出现IL-5特异性条带,感染后第8周IL-5表达明显增强,感染后第10周IL-5mRNA 转录水平下降,感染后第12周未能检测到IL-5表达,表明IL-5表达的动态变化与肉芽肿的形成、发展及调节相平行.IL-10mRNA转录也于感染后第5周出现,但感染后第8周、第10周、第12周与第5周相比,IL-10的表达水平并无明显改变,显示IL-10mRNA转录水平并未随着肉芽肿的调节而变化.本研究结果提示IL-5可能在肉芽肿形成和调节过程中可能起重要作用;而IL-10可能并未直接参与肉芽肿的调节,但其转录可能与防止宿主过度肉芽肿炎症反应有关.
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日本血吸虫成虫及虫卵可溶性抗原的早期诊断分子筛选
为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子.以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清,用Western blot对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)和虫卵可溶性抗原(SEA)进行了全面的分析与筛选.SEA140kDa和AWA54kDa、21kDa、20kDa分子出现早,能被感染后2周兔血清所识别;SEA69kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA72kDa、45kDa、34kDa、15kDa相继能被感染后4周兔血清所识别;其中SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa与病人血清反应同6周兔血清反应效果相仿,均为免疫反应主带,且在SDS-PAGE上有对应的蛋白主带,具有潜在的早期诊断价值.进一步对SEA进行抗体类型的分析,发现SEA能刺激机体产生IgG、IgM和IgA反应,其中SEA50kDa、45kDa、38kDa三个抗原分子均能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别,且均为反应主带;SEA140kDa以IgM反应带深;SEA100 kDa反应带仅出现于病人血清,以IgM反应强,且其与IgM反应带在急性病人血清明显深于慢性病人血清,表明针对IgM的SEA 100kDa分子也具有一定的早期诊断和区分病程的价值.SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa和针对IgM的SEA100kDa分子是具有潜在早期诊断价值的优势靶抗原分子.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫小鼠CD11c+CD8α-DC对过敏性哮喘的抑制作用
[目的]研究日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫小鼠CD11c+ CD8α树突状细胞(DC)亚群对卵清白蛋白(OVA)诱发的过敏性哮喘的抑制作用.[方法]BALB/c小鼠经腹腔及足垫注射SEA 50 μg/只,每周1次,共4次.用抗体包被的免疫磁珠分离小鼠脾CD11c' CD8α+ DC与CD11c+ CD8α DC亚群.另取18只BAIB/c小鼠,随机分为4组,A组为健康对照组,B组为OVA致敏单纯哮喘组,C组为过继转移SEA免疫CD11c+ CD8α+ DC组,D组为过继转移SEA免疫CD1 1c+ CD8α-DC组.C、D组小鼠分别经尾静脉过继转移5×105个CD11c+ CD8α+DC和5×105个CD11c+CD8α-DC,1h后B、C、D组小鼠同时用OVA诱发哮喘,4周后剖杀,取肺组织,做病理切片,经苏木素伊红(HE)染色后,光镜下观察肺部炎症变化.[结果]A组小鼠肺组织无炎症反应；B组小鼠肺组织炎症反应广泛且严重,在支气管及肺泡周围有大量炎性细胞浸润;C组小鼠肺组织炎症反应仍较明显；D组小鼠肺组织炎症反应较B、C组显著减轻,仅有少量炎细胞浸润.4组小鼠按照Underwood标准进行病理评分,总分分别为0、14.00±1.00、12.33±0.58和7.20±1.30,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]日本血吸虫SEA免疫小鼠CD11c+ CD8α-DC亚群对过敏性哮喘有抑制作用.
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免疫耐受对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响
目的探讨免疫耐受对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响.方法分别用10、100、和1000μg的日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)腹腔注射1周龄小鼠,诱导其对虫卵抗原产生免疫耐受性.在感染日本血吸虫尾蚴后42、56、70和84d分批剖杀小鼠,取出肝脏作病理切片测量肉芽肿的大小.结果100～1 000μg SEA可诱导小鼠产生一定程度的免疫耐受性,使虫卵肉芽肿反应减轻.但是随着时间的延长,这种耐受性逐渐减弱或消失.结论SEA诱导的免疫耐受性可以减轻血吸虫感染早期的肝脏肉芽肿反应,但对慢性期的作用较弱.
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过继转移日本血吸虫可溶性虫卵抗原致敏鼠CD8α-树突状细胞抑制OVA诱导过敏性哮喘的研究
目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)致敏鼠CD8α树突状细胞(DCs)在抑制过敏性哮喘中的作用.方法 BALB/c小鼠腹腔注射SEA(PBS为对照组)致敏后,分离脾细胞,磁珠分选获得CD8α+ CD1 1c+-DCs和CD8α CD11c+-DCs.尾静脉注射法过继转移DCs,再用OVA诱发小鼠哮喘.取小鼠肺组织,HE染色观察病理改变;收集肺泡灌洗液(BALF),涂片染色后计数嗜酸性粒细胞,计算其百分比;ELISA法检测血清OVA特异性IgE及BALF和脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-10、TGF-β水平. 结果 SEA-CD8α DCs/OVA组较SEA-CD8α+-DCs/OVA、对照过继转移CD8a+-DCs、CD8α DCs组以及单纯OVA诱导组以及小鼠肺组织炎症显著减轻,病理评分更低,嗜酸性粒细胞百分比降低.肺组织病理评分结果分别为6.80±1.03,11.00±0.00,13.00±0.82,12.75±0.50,14.00±1.00;嗜酸性粒细胞百分比分别为6.50±0.79,10.17±1.61,11.84±2.31,12.60±1.60,20.00±1.70.血清OVA特异性IgE水平下降,BALF和脾细胞上清IL-4、IL-5表达量下降,IL-10、TGF-β表达量升高(均P＜0.05). 结论 SEA致敏鼠CD8α-DCs可抑制过敏性哮喘的发生,其有效成份有待进一步研究.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫小鼠DC亚群对哮喘的影响及对CCL-11和IL-13Rα2表达的抑制作用
目的 通过过继转移日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫的小鼠树突状细胞(DC)亚群,探讨SEA免疫的DC亚群在抑制过敏性哮喘中的作用及可能的作用机制. 方法 用CD8α和CD11c磁珠分离纯化日本血吸虫SEA免疫小鼠CD8α+ DC、CD8α-DC亚群.另取24只BALB/c小鼠,随机分为4组:正常对照组、单纯哮喘组、过继转移SEA免疫CD8α+ DC(SEA-CD8α+ DC)组和过继转移SEA免疫CD8α-DC(SEA-CD8α-DC)组.SEA-CD8α+ DC组、SEA-CD8α-DC组每只小鼠分别经尾静脉过继转移SEA免疫CD8α+ DC或CD8α-DC 5×105个.1h后单纯哮喘组、SEA-CD8α+ DC组、SEA-CD8α-DC组小鼠同时用卵白蛋白(OVA)诱发哮喘,4周后剖杀,取肺组织做病理切片和免疫组织化学染色,观察炎症变化,同时检测肺组织CCL-11和IL-13Rα2表达情况. 结果 与单纯哮喘组和SEA-CD8α+ DC组比较,SEA-CD8α-DC组小鼠肺部炎症显著减轻.免疫组化染色后小鼠肺组织CCL-11平均吸光度值分别为:正常对照组0.1496±0.0009,单纯哮喘组1.7121±0.4994,SEA-CD8α+ DC组0.9631±0.1201,SEA-CD8α-DC组0.3458±0.0543,SEA-CD8α-DC组与单纯哮喘组和SEA-CD8α+ DC比较差异有统计学意义(P＜0.05);小鼠肺组织IL-13Rα2平均吸光度值分别为:正常对照组0.1029±0.0103,单纯哮喘组0.3136±0.0174,SEA-CD8α+ DC组0.3263±0.0128,SEA-CD8α-DC组0.1859±0.0294,SEA-CD8α-DC组与单纯哮喘组和SEA-CD8α+ DC组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 日本血吸虫SEA免疫的DC亚群对过敏性哮喘有抑制作用,且CD8α-DC亚群起主要作用.
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日本血吸虫感染保护性细胞免疫应答机制的研究进展
近年来,人们在血吸虫感染的获得性免疫应答机制,以及寻找血吸虫保护性抗原分子等方面做了大量研究,其中大多数研究集中于体液免疫机制[1～4].研究结果证明,体液免疫机制在抗血吸虫感染的保护性免疫应答中有一定的局限性,主要体现在某些血吸虫抗原分子虽能诱导较强的体液免疫,但并不能诱导产生很好的保护性.例如,抗可溶性虫卵抗原抗体滴度在血吸虫感染宿主血清抗体成分中虽然很高,但对宿主再感染并不都具有保护性作用,其中的封闭抗体已被证明对再次入侵的童虫反而起保护作用[5].因此,细胞免疫机制在抗血吸虫感染的保护性免疫应答中可能占有更重要的地位[6],深入研究血吸虫感染诱导的细胞免疫机制就显得尤为重要.
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BALB/c小鼠感染日本血吸虫后生存状况的动态观察
目的 观察BALB/c小鼠感染日本血吸虫后生存状况的动态变化.方法 尾蚴感染BALB/c小鼠,于感染6周、9周、12周、18周分别处死小鼠,采血并分离血清,以血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)为检测抗原,采用ELISA法测定血清效价；同时,取肝脏和脾脏进行形态学观察并称重；在整个试验过程中观察小鼠的死亡情况.结果 小鼠感染日本血吸虫6周后,BALB/c小鼠体重显著降低；同时期感染小鼠的脾脏增大显著,脾脏指数是正常小鼠的5.75倍；肝脏也增大,肝脏指数是正常小鼠的1.7倍.小鼠感染日本血吸虫7～11周后,存活率下降明显；感染小鼠的血清效价大于16000,并且,随着感染时间延长,小鼠血清IgG值不断增高.感染12周后,血清IgG值与6周相比显著升高,同时,小鼠的生存状态也有所好转.结论 BALB/c小鼠感染血吸虫后6～9周,体重持续下降,进入急性感染期,9～12周体重趋于平稳,为急慢性感染的过渡时期,12周后小鼠体重开始缓慢增加,病程进入慢性感染期.血吸虫虫卵对整个病程的发展具有一定的调节作用.
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日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外IL-2转录水平的实验观察
应用RT-PCR方法对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL-2从mRNA转录水平进行研究,以探讨该细胞因子mRNA转录水平的动态变化及其在肉芽肿形成与调节过程中的作用.结果显示,未感染和感染3周小鼠脾细胞均无IL-2表达,感染后第5周的小鼠脾细胞出现IL-2特异性条带,感染后第8周IL-2表达明显增强,感染后第10、12周无论SEA或ConA都不能诱导IL-2 mRNA的转录.表明IL-2表达的动态变化与肉芽肿的形成、发展及调节相平行,提示IL-2可能在肉芽肿形成和调节过程中起重要作用.
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血吸虫病引起的肝纤维化有何新的逆转治疗方法
答:血吸虫病是一种免疫性疾病,持续发展的病理损伤是由成虫产卵后所致的以细胞免疫为主的迟发型免疫反应所引起.沉积在组织间的成熟卵中的毛蚴分泌可溶性虫卵抗原,致敏T淋巴细胞,当后者再接触抗原时,释放多种淋巴因子,在虫卵周围有大量嗜酸粒细胞浸润,巨噬细胞和淋巴细胞也参与其间,形成虫卵肉芽肿.此细胞群浸润的中央发生坏死则形成嗜酸性脓肿,围绕虫卵周围有抗原抗体复合物沉淀,这是血吸虫病的基本病变.
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可溶性虫卵抗原和成虫抗原刺激日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答
目的 研究可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性成虫抗原(SWA)刺激日本血吸虫(Sc histosoma japonicum)感染小鼠肠系膜淋巴结(MLN) Th17细胞的免疫应答. 方法 新西兰大白兔2只,经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(约1 000条/兔),45 d后收集成虫及虫卵,制备SWA和SEA.20只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为感染组和健康组(10只/组),感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴, (40±5)条/鼠,感染后5～6周ELISA检测血清中SEA和SWA特异性IgG抗体.分离两组小鼠MLN中的淋巴细胞,均给予4种不同条件刺激:无刺激组(A组),SEA(100 μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml) (B组),SWA(100 μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml) (C组),抗-CD3 mAb(1μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml) (D组).培养9h后,流式细胞仪检测Th17细胞;培养72 h后,ELISA检测细胞培养上清中的白细胞介素(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ).结果 ELISA检测结果显示,感染组小鼠血清SEA、SWA特异性IgG抗体的吸光度(A450值)分别为2.66±0.20和1.68±0.66,高于健康组的0.19±0.05和0.25±0.12 (P＜ 0.01).流式细胞术检测结果显示,B组刺激后,感染组淋巴细胞中CD4+IL-17+和CD4+IFN-γ+细胞分别占0.43％和0.56％,高于健康组的0.05％和0.20％ (P＜0.05);C组刺激后则分别占0.39％和0.76％,高于健康组的0.04％和0.19％ (P＜0.05).两组小鼠的淋巴细胞体外经SEA (B组)刺激后,感染组淋巴细胞产生的IFN-γ和IL-17分别为(49.13±14.71)和(41.73±2.42) pg/ml,高于健康组的(3.27±0.33)和(9.22±0.58) pg/ml (P＜0.01);经SWA(C组)刺激后则分别为(46.92±16.73)和(36.14±4.82) pg/ml,高于健康组的(3.38±0.34)和(8.78±0.93) pg/ml (P＜ 0.01).B组的IL-17含量高于C组(P＜0.05). 结论 SEA和SWA能体外诱导日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞分泌IL-17和IFN-γ,SEA刺激淋巴细胞产生IL-17的含量明显高于SWA;SEA和SWA均能诱导淋巴细胞分化为CD4+IL-17+细胞和CD4+IFN-γ+细胞.
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间质干细胞培养上清对日本血吸虫SEA诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7的抑制作用
目的 观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)培养上清对日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导活化的巨噬细胞的抑制作用.方法 用5、10、20和40 μg/ml SEA分别诱导巨噬细胞株RAW264.7 12 h,或用20 μg/ml SEA分别诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)4、8、12和24h后,用实时荧光定量PCR检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA水平,选择SEA的佳作用浓度和作用时间.将巨噬细胞分成5组,分别为阴性对照组、SEA组、SEA+MSC上清组(MSC组)、SEA+大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)上清组(NRK-52E组)和SEA+DMEM细胞培养基组(DMEM组).除阴性对照组外,其他各组给予20 μg/ml SEA诱导巨噬细胞活化12h后,MSC组、NRK-52E组和DMEM组换液撤SEA,分别给予MSC培养上清、NRK-52E细胞培养上清和DMEM培养液,继续培养.显微镜观察细胞上清培养12h后各组细胞形态.实时荧光定量PCR检测细胞上清培养12h和24h后TNF-αmRNA水平.蛋白质印迹(Western blotting)分析检测细胞上清培养12h后转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达水平.噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞上清培养24h和48 h后巨噬细胞增殖情况.结果 SEA活化巨噬细胞的佳浓度和时间分别为20 μg/ml和12h.镜下观察显示,MSC上清培养12h后,MSC组与SEA组、NRK-52E组和DMEM组相比,细胞变圆,体积明显较小,伪足较少.MSC上清作用12h和24h后,MSC组TNF-α mRNA水平分别为阴性对照组的(1.0±0.4)和(1.0±0.5)倍,显著低于NRK-52E组[分别为(10.4±3.9)和(16.5±5.0)倍(12h:P＜0.05; 24h:P＜0.01)]和DMEM组[分别为(6.0±2.1)和(2.4±0.7)倍(均P＜0.05)].MSC上清作用12h后,MSC组蛋白TGF-β1/GAPDH为0.3 1±0.10,显著低于NRK-52E组(0.88 ±0.10,P＜0.01)和DMEM组(0.58±0.06,P＜0.05).MSC上清作用48 h后,MSC组吸光度(A490值)为0.22±0.05,与NRK-52E组(0.53±0.02)和DMEM组(0.31±0.03)比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 MSC培养上清能抑制SEA诱导的巨噬细胞株RAW264.7活化.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原经两种免疫途径获得的鸡卵黄抗体IgY动态观察
目的 对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化. 方法 7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1 500/只)42 d后解剖收集虫卵,制备SEA.将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50 μg/(只·次).取两组免疫前,以及首次免疫后2～18周生产的鸡蛋,用水稀释法粗提IgY,ELISA检测每2周IgY的动态变化.IgY纯化试剂盒(EGGstract IgY Purifiction System)纯化静脉组首次免疫后8～18周的IgY,紫外吸收法检测抗体浓度,琼脂糖双扩散法和ELISA检测IgY峰值水平的抗体效价,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析比较免疫前后抗体特异性. 结果 静脉组和皮下组分别在首次免疫后8和12周IgY抗体水平达高峰,A492值分别为1.28和0.78,静脉组IgY水平至18周仍维持较高水平,皮下组抗体水平达到峰值后逐渐下降.纯化后IgY浓度约为6.5～9.0 mg/ml,琼脂糖双扩散法和ELISA测得静脉注射组峰值水平抗体效价分别为1 ∶ 16和1 ∶ 51 200.经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的IgY在相对分子质量(Mr)25 000和68 000处各有一条清晰条带,且免疫后IgY可与SEA发生特异性反应. 结论 静脉注射法比皮下注射法能获得更高水平的鸡抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体,且纯化后的IgY抗体具有较好的特异性.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原38 kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估
[目的]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)38 kDa分子诊断血吸虫病的应用价值.[方法]用SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原SEA 38 kDa,并经SDS-PAGE和Western blot鉴定;将SEA 38kDa分子和SEA用于ELISA法检测日本血吸虫病患者血清,急性期31例、慢性期31例,正常人60例,华支睾吸虫病患者血清30例,并殖吸虫病患者血清30例.[结果]SEA 38 kDa分子抗原和SEA所测得的阳性率分别为90.3%、90.3%、1.7%、0、0和90.3%、83.9%、3.3%、0、0.将SEA 38 kDa分子和SEA在ELISA中的P/N比值进行比较,经t检验,发现在检测急性血吸虫病患者,慢性血吸虫病患者和正常人血清时,两者间的P/N比值在3组间差异均有显著性意义(P值均＜0.001);SEA 38 kDa分子在检测患者血清时的P/N比值显著高于SEA,而检测正常人血清时的P/N比值显著低于SEA.[结论]纯化SEA 38 kDa具有较好的敏感性和特异性,具有诊断潜能.
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过碘酸钠氧化可溶性虫卵抗原ELISA诊断血吸虫病的研究
目的改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值.方法应用过碘酸钠(sodium periodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行比较.结果分别用两种方法检测患者血清,其中慢性血吸虫病64例、华支睾吸虫病34例、卫氏并殖吸虫病33例、囊尾蚴病36例,检测健康人血清119例.SP-SEA-ELISA特异性为99.2%,高于SEA-ELISA,敏感性为98.4%,与SEA-ELISA比较无明显降低.用SP-SEA-ELISA及SEA-ELISA检测治疗后12个月的慢性血吸虫病患者血清,阴性率为89.0%,明显优于SEA-ELISA(42.1%).结论过碘酸钠处理SEA,可提高免疫诊断特异性,降低交叉反应,有一定的疗效考核价值.
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日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导肝纤维化相关miRNA的变化
目的 研究与肝纤维化相关miRNA(miR)在日本血吸虫可溶性虫卵抗原刺激小鼠肝细胞(AML12)后的表达情况,为阐明血吸虫感染导致肝纤维化的机制奠定基础.方法 使用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Soluble egg antigens,SEA)刺激AML12后,采用定量PCR检测AML12中的miR-122、miR-182、miR-23b、miR-27b及KH型剪切调控蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KSRP)的mRNA水平,以Western blotting检测KSRP蛋白的表达变化;分别用anti-miR-27b、miR-27b precursor转染AML12后,以定量PCR和Western blotting检测AML12中KSRP的mRNA和蛋白水平.结果经SEA刺激后,AML12中miR-182、miR-23b及miR-27b mRNA水平下降(P均<0.05),而细胞中miR-122 mRNA与KSRP的mRNA水平及蛋白表达水平均上调(P均<0.05).此外,anti-miR-27b与miR-27b precursor转染组KSRP的mRNA水平均无明显变化,但anti-miR-27b组细胞中KSRP的蛋白表达增加,miR-27b precursor组KSRP的蛋白表达降低.结论SEA刺激AML12导致诸多与肝纤维化相关的miRNA及KSRP的表达发生变化,其中miR-27b可调控KSRP的表达,这为进一步研究血吸虫感染导致的肝纤维化的分子机制奠定了基础.
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日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)的研制与应用
目的 研制日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法).方法 按《药品生产质量管理规范》要求,研究日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)组成成份、制备方法及程序,并对研制的试剂盒进行诊断效果评价.结果 研制的日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)检测慢性血吸虫病患者敏感性为94.49％,检测健康人群特异性为97.14％,Youden指数为0.92;与并殖吸虫和旋毛虫病患者血清交叉反应率分别为15.00％和10.00％.与市售日本裂体吸虫抗体检测试剂盒(ELISA法)和日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)平行检测流行区居民血吸虫抗体的总体符合率分别为93.06％和92.25％.结论 日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)敏感性高、特异性强,适合疫区现场血吸虫病筛查,具有推广应用价值.
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日本血吸虫虫源性抗原诱导效应性B细胞分化的研究
目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性成虫抗原(SWAP)诱导小鼠效应性B细胞分化情况.方法 SEA、SWAP和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和脾脏CD19+B细胞,72 h后采用流式细胞术检测CD19+IL-6+及CD19+IFN-γ+细胞比例;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原刺激后脾脏B细胞培养上清中IL-6和IFN-γ水平.用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,每周1次,共3次,末次免疫后7 d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19+IL-6+及CD19+IFN-γ+细胞比例,用ELISA法检测培养上清中IL-6和IFN-γ水平.结果 SEA与LPS可以体外诱导脾脏单个核细胞和脾脏B细胞分化为CD19+IL-6+B细胞(F=5.099,P<0.05;F=6.951,P<0.05),并刺激脾脏B细胞分泌IL-6(F=55.184,P<0.01);SEA免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IL-6(F=19.244,P<0.01),并诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-6+B细胞(F=14.904,P<0.05).SWAP可以体外诱导脾脏单个核细胞分化为CD19+IFN-γ+B细胞(F=3.277,P<0.05),但不能单独诱导脾脏B细胞分化为IFN-γ+B细胞,也不能刺激脾脏B细胞分泌IFN-γ;SWAP免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IFN-γ(F=31.886,P<0.01),并诱导其分化为CD19+IFN-γ+B细胞(F=49.873,P<0.01).结论 日本血吸虫SEA可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-6+B细胞,而SWAP可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IFN-γ+B细胞,但依赖于其他免疫细胞的参与.
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日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原诱导调节性T细胞能力差异的比较
目的 观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)与可溶性虫卵抗原(SEA)诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞水平及其抑制能力的差异.方法 分别以PBS、SWA和SEA免疫小鼠,取小鼠脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组Treg细胞占CD4+T细胞的比例,以及Treg细胞中产IL-10、TGF-β的细胞比例.采用磁珠分选出各组小鼠的Treg细胞后,以3H-TdR掺入法检测其抑制靶细胞增殖的能力.结果 与SWA相比,SEA可诱导更多的Treg细胞(P＜0.05),刺激Treg细胞免疫抑制功能的能力也更强(P＜ 0.05)；SWA、SEA免疫小鼠后,SEA刺激Treg细胞产生IL-10、TGF-β的能力更强(P＜0.01).结论 SEA较SWA能更好地活化诱导Treg细胞发挥免疫抑制作用.
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日本血吸虫可溶性成虫抗原及虫卵抗原对CD4+T细胞分化的影响
目的 观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)及虫卵抗原(SEA)在诱导CD4+T细胞分化中的不同作用.方法 分别用SWA、SEA免疫C57BL/6小鼠后分离脾细胞,或用SWA、SEA体外刺激正常小鼠来源的脾细胞后,采用流式细胞术(FCM)检测脾细胞中产生IFN-γ及IL-4的细胞比例,以及CD4+T细胞中Th1、Th2细胞亚群的比例.结果 SWA比SEA更能优势诱导CD4+T细胞产生IFN-γ(P＜ 0.05),SEA比SWA更能优势诱导CD4+T淋巴细胞产生IL-4(P＜0.05).结论 SWA较SEA更能优势诱导Th1细胞分化,SEA较SWA更能优势诱导Th2细胞分化.
