首页 > 文献资料
-
日本血吸虫成虫及虫卵可溶性抗原的早期诊断分子筛选
为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子.以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清,用Western blot对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)和虫卵可溶性抗原(SEA)进行了全面的分析与筛选.SEA140kDa和AWA54kDa、21kDa、20kDa分子出现早,能被感染后2周兔血清所识别;SEA69kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA72kDa、45kDa、34kDa、15kDa相继能被感染后4周兔血清所识别;其中SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa与病人血清反应同6周兔血清反应效果相仿,均为免疫反应主带,且在SDS-PAGE上有对应的蛋白主带,具有潜在的早期诊断价值.进一步对SEA进行抗体类型的分析,发现SEA能刺激机体产生IgG、IgM和IgA反应,其中SEA50kDa、45kDa、38kDa三个抗原分子均能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别,且均为反应主带;SEA140kDa以IgM反应带深;SEA100 kDa反应带仅出现于病人血清,以IgM反应强,且其与IgM反应带在急性病人血清明显深于慢性病人血清,表明针对IgM的SEA 100kDa分子也具有一定的早期诊断和区分病程的价值.SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa和针对IgM的SEA100kDa分子是具有潜在早期诊断价值的优势靶抗原分子.
-
可溶性虫卵抗原和成虫抗原刺激日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答
目的 研究可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性成虫抗原(SWA)刺激日本血吸虫(Sc histosoma japonicum)感染小鼠肠系膜淋巴结(MLN) Th17细胞的免疫应答. 方法 新西兰大白兔2只,经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(约1 000条/兔),45 d后收集成虫及虫卵,制备SWA和SEA.20只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为感染组和健康组(10只/组),感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴, (40±5)条/鼠,感染后5～6周ELISA检测血清中SEA和SWA特异性IgG抗体.分离两组小鼠MLN中的淋巴细胞,均给予4种不同条件刺激:无刺激组(A组),SEA(100 μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml) (B组),SWA(100 μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml) (C组),抗-CD3 mAb(1μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml) (D组).培养9h后,流式细胞仪检测Th17细胞;培养72 h后,ELISA检测细胞培养上清中的白细胞介素(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ).结果 ELISA检测结果显示,感染组小鼠血清SEA、SWA特异性IgG抗体的吸光度(A450值)分别为2.66±0.20和1.68±0.66,高于健康组的0.19±0.05和0.25±0.12 (P＜ 0.01).流式细胞术检测结果显示,B组刺激后,感染组淋巴细胞中CD4+IL-17+和CD4+IFN-γ+细胞分别占0.43％和0.56％,高于健康组的0.05％和0.20％ (P＜0.05);C组刺激后则分别占0.39％和0.76％,高于健康组的0.04％和0.19％ (P＜0.05).两组小鼠的淋巴细胞体外经SEA (B组)刺激后,感染组淋巴细胞产生的IFN-γ和IL-17分别为(49.13±14.71)和(41.73±2.42) pg/ml,高于健康组的(3.27±0.33)和(9.22±0.58) pg/ml (P＜0.01);经SWA(C组)刺激后则分别为(46.92±16.73)和(36.14±4.82) pg/ml,高于健康组的(3.38±0.34)和(8.78±0.93) pg/ml (P＜ 0.01).B组的IL-17含量高于C组(P＜0.05). 结论 SEA和SWA能体外诱导日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞分泌IL-17和IFN-γ,SEA刺激淋巴细胞产生IL-17的含量明显高于SWA;SEA和SWA均能诱导淋巴细胞分化为CD4+IL-17+细胞和CD4+IFN-γ+细胞.
-
日本血吸虫虫源性抗原诱导效应性B细胞分化的研究
目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性成虫抗原(SWAP)诱导小鼠效应性B细胞分化情况.方法 SEA、SWAP和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和脾脏CD19+B细胞,72 h后采用流式细胞术检测CD19+IL-6+及CD19+IFN-γ+细胞比例;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原刺激后脾脏B细胞培养上清中IL-6和IFN-γ水平.用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,每周1次,共3次,末次免疫后7 d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19+IL-6+及CD19+IFN-γ+细胞比例,用ELISA法检测培养上清中IL-6和IFN-γ水平.结果 SEA与LPS可以体外诱导脾脏单个核细胞和脾脏B细胞分化为CD19+IL-6+B细胞(F=5.099,P<0.05;F=6.951,P<0.05),并刺激脾脏B细胞分泌IL-6(F=55.184,P<0.01);SEA免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IL-6(F=19.244,P<0.01),并诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-6+B细胞(F=14.904,P<0.05).SWAP可以体外诱导脾脏单个核细胞分化为CD19+IFN-γ+B细胞(F=3.277,P<0.05),但不能单独诱导脾脏B细胞分化为IFN-γ+B细胞,也不能刺激脾脏B细胞分泌IFN-γ;SWAP免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IFN-γ(F=31.886,P<0.01),并诱导其分化为CD19+IFN-γ+B细胞(F=49.873,P<0.01).结论 日本血吸虫SEA可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-6+B细胞,而SWAP可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IFN-γ+B细胞,但依赖于其他免疫细胞的参与.
-
日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原诱导调节性T细胞能力差异的比较
目的 观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)与可溶性虫卵抗原(SEA)诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞水平及其抑制能力的差异.方法 分别以PBS、SWA和SEA免疫小鼠,取小鼠脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组Treg细胞占CD4+T细胞的比例,以及Treg细胞中产IL-10、TGF-β的细胞比例.采用磁珠分选出各组小鼠的Treg细胞后,以3H-TdR掺入法检测其抑制靶细胞增殖的能力.结果 与SWA相比,SEA可诱导更多的Treg细胞(P＜0.05),刺激Treg细胞免疫抑制功能的能力也更强(P＜ 0.05)；SWA、SEA免疫小鼠后,SEA刺激Treg细胞产生IL-10、TGF-β的能力更强(P＜0.01).结论 SEA较SWA能更好地活化诱导Treg细胞发挥免疫抑制作用.
-
日本血吸虫可溶性成虫抗原及虫卵抗原对CD4+T细胞分化的影响
目的 观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)及虫卵抗原(SEA)在诱导CD4+T细胞分化中的不同作用.方法 分别用SWA、SEA免疫C57BL/6小鼠后分离脾细胞,或用SWA、SEA体外刺激正常小鼠来源的脾细胞后,采用流式细胞术(FCM)检测脾细胞中产生IFN-γ及IL-4的细胞比例,以及CD4+T细胞中Th1、Th2细胞亚群的比例.结果 SWA比SEA更能优势诱导CD4+T细胞产生IFN-γ(P＜ 0.05),SEA比SWA更能优势诱导CD4+T淋巴细胞产生IL-4(P＜0.05).结论 SWA较SEA更能优势诱导Th1细胞分化,SEA较SWA更能优势诱导Th2细胞分化.
-
日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原对CD4~+T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响
目的 观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)、可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠CD4~+T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响.方法 以免疫磁珠分选正常小鼠脾细胞中的CD4~+T淋巴细胞后,与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的抗原递呈细胞共培养,并分别以PBS、SWA、SEA刺激.36 h后以流式细胞术(FCM)结合caspase-3荧光抗体标记技术检测CD4~+T淋巴细胞的凋亡水平;96 h后以碘化丙锭染色结合FCM分析CD4~+T淋巴细胞周期分布情况.结果 凋亡分析结果显示,经SEA和SWA刺激后,外周CD4~+T细胞的凋亡百分比分别为(1.24±0.29)%和(1.52±0.38)%,两者差异无统计学意义(P>0.05).细胞周期分析表明,SWA组处于G1期、S期和G2/M期的细胞百分比分别为(78.91±2.98)%、(7.39±t0.85%)和(10.69±1.05)%;与之相比,SEA组G1期细胞百分比[(59.42±1.32)%]显著降低,s期[(21.07±0.88)%]和G2/M期[(18.88±1.21)%]显著增加,差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 SWA、SEA均可诱导CD4~+T淋巴细胞凋亡,SEA促进CD4~+T淋巴细胞进入分裂周期的作用更明显.
-
筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原的研究
目的筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原及其表位.方法制备日本血吸虫可溶性童虫抗原(SSA),经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot后分别与日本血吸虫感染后10、21、42天兔血清进行酶联免疫印迹试验(EITB),筛选出能被早期感染血清所识别的抗原组分.用日本血吸虫感染后21天血清从噬菌体12随机肽库中筛选、富集、纯化、扩增与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆,经动物实验初步评估其对日本血吸虫感染的早期诊断效果.结果SDS-PAGE显示SSA的总条带数多于可溶性成虫抗原(SAWA),但大多为共同抗原.EITB结果显示SSA共出现12条早期反应抗原带,其中97 kDa和47 kDa抗原分子只能被感染后10天兔血清特异性识别;SAWA仅出现7条反应带,未显示只能被感染后10天兔血清识别的期特异性抗原分子.挑选出3个与感染后21天兔血清具有高亲和力的单克隆噬菌体,混合后分别用于检测感染日本血吸虫10、21 d鼠血清中IgG特异性抗体,阳性检出率分别为48.8%和64.4%.结论SSA中的97 kDa和44 kDa抗原分子及3个噬菌体随机12肽抗原模拟表位可能具有日本血吸虫感染早期诊断价值.
-
日本血吸虫尾蚴成虫及虫卵的早期诊断组分抗原分析
目的寻找具有血吸虫病早期诊断价值的组分抗原.方法以感染后不同时间的兔血清,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blotting)方法,对日本血吸虫尾蚴、成虫和虫卵中的可溶性抗原的成分进行免疫分析.结果可溶性尾蚴抗原(SCA)94、48、41、40 kDa和38 kDa组分抗原早出现免疫印迹反应,能被感染后2周兔血清所识别,可被感染后3周兔血清识别的SCA 71、23 kDa组分抗原反应强.可溶性成虫抗原(AWA)早出现反应的组分抗原是71、58 kDa,能被感染后3周兔血清所识别.可溶性虫卵抗原(SEA)早出现反应的组分抗原是270、151、73、69、50 kDa和24 kDa,能被感染后4周兔血清所识别.结论 SCA 94、71、48、41、40、38、23 kDa,AWA 71、58 kDa和SEA 270、151、73、69、50、24 kDa能被急性感染兔血清所识别,是具有潜在早期诊断价值的组分抗原.
-
日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究
目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.
-
日本血吸虫成虫抗原合并蚯蚓抗原对小鼠胸腺淋巴细胞及亚群的影响
BALB/c小鼠经可溶性日本血吸虫成虫抗原(SWAP)或/和可溶性蚯蚓抗原(SEWP)免疫后,观察、计数其胸腺T细胞总数、活性T细胞、L3T4细胞以及Lyt2细胞.结果显示,SWAP免疫组L3T4细胞明显增加(P＜0.05);SEWP免疫组4个指标则均无明显变化(P＞0.05);SWAP与SEWP混合制剂免疫组T细胞总数、活性T细胞以及L3T4细胞均显增加(P＜0.05).相关分析表明:CD+4T细胞(即L3T4细胞)在SWAP所诱导的保护性免疫力中可能起重要作用,而SEWP存在细胞免疫以外的其它可能保护性免疫机制,但SEWP与SWAP有明显的协同作用.
