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旋毛虫Ts87重组蛋白诱导的小鼠黏膜免疫保护性研究
本实验探讨旋毛虫Ts87重组蛋白灌胃免疫小鼠诱导的黏膜免疫保护性作用.实验分对照组、佐剂组(霍乱毒素B亚单位组,CTB)和免疫组(CTB+Ts87重组蛋白),灌胃免疫,间隔1周共免疫3次.末次免疫后第7天用400条旋毛虫感染期幼虫攻击,比较3组小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力和肌幼虫数.且于末次免疫后第7天刮取肠黏液、取血检测特异性sIgA、IgG抗体水平.结果显示免疫组小鼠成虫减虫率、新生蚴减虫率、肌幼虫减虫率分别是81.34%、67.02%、84.49%;小鼠肠黏液sIgA水平及血清IgG水平显著高于对照组和佐剂组.结果表明Ts87重组蛋白黏膜免疫能够诱导小鼠产生抗旋毛虫的保护性免疫.灌胃免疫能显著提高肠黏液特异性sIgA水平,对促进肠道成虫的排出有明显作用.
关键词： 旋毛虫 黏膜免疫 重组蛋白 霍乱毒素B亚单位(CTB) IgA -
乳酸和乙酸对重组霍乱毒素B亚单位工程菌表达的影响
霍乱毒素B亚单位(CTB)是口服霍乱疫苗的重要抗原之一.工程菌MM2是一株表达CTB的大肠杆菌,产物CTB能分泌到培养液中[1].重组质粒 pMM-CTB来源于pUC19,ctxB基因位于lac 启动子的下游.lac启动子是一个化学诱导型启动子,无诱导物IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)存在时,其下游基因则不能表达.但是我们的研究结果[2,3]表明,在不用IPTG 诱导的情况下CTB仍可得到表达,而加入IPTG对CTB的表达几乎没有影响.此外,在培养基中加入乳酸或乙酸还可促进CTB表达,这一点与多数工程菌的表达特点不同.为此,我们对乳酸和乙酸对工程菌MM2表达CTB的影响进行了研究.
关键词： 霍乱毒素B亚单位(CTB) 大肠杆菌 乳酸 乙酸 -
霍乱毒素B亚单位的研究进展
目的介绍霍乱毒素B亚单位新研究进展.方法从霍乱毒素B亚单位的基因表达、作为载体蛋白与免疫佐剂的应用、与免疫原的不同使用方法和不同的免疫途径对其免疫佐剂作用的影响等方面进行介绍.结果霍乱毒素B亚单位是有较好应用前景的载体蛋白,具有较强的佐剂活性,可以增强细菌、病毒以及其他抗原的免疫原性.结论霍乱毒素B亚单位有良好的研究应用价值.
关键词： 霍乱毒素B亚单位(CTB) 载体蛋白 免疫佐剂 疫苗 -
植物细胞表达人胰岛素的载体构建
目的构建人胰岛素的植物细胞表达载体.方法设计多对引物,通过PCR反应合成霍乱毒素B亚单位(CTB)基因和不带C肽的人胰岛素基因.将霍乱毒素B亚单位(CTB)基因与这种不带C肽的人胰岛素基因融合后,插入克隆载体,然后用BamH Ⅰ和Sac Ⅰ进行酶切,并将酶切的融合基因片段连接在植物表达载体pBI121上,后用BamH Ⅰ和Sac Ⅰ进行酶切鉴定.结果测序结果表明,PCR扩增的目的基因顺序与设计完全一致,并构建了克隆载体和植物表达载体.植物表达载体经酶切后鉴定,所含基因片段大小与预期相符.结论已成功地构建了人胰岛素基因的植物细胞表达载体.
关键词： 人胰岛素基因 霍乱毒素B亚单位(CTB) 植物表达载体 -
霍乱毒素B亚单位植物细胞表达载体的构建及其在人参细胞中的表达
目的 构建霍乱毒素B亚单位(CTB)植物细胞表达载体,并在人参细胞中进行表达.方法 根据人参偏爱密码子,采用引物延伸PCR法合成CTB基因,连入pBI121质粒,构建植物细胞表达载体,转化人参细胞后.采用PCR、RT-PCR和Western blot进行鉴定.结果 测序结果表明,PCR法合成的目的基因序列与设计完全一致,构建的植物细胞表达载体经双酶切鉴定显示,所含基因片段大小与预期相符.提取转基因人参细胞基因组DNA和mRNA,分别进行PCR和RT-PCR鉴定,均可见约400 bp的特异性片段.Western blot分析可见相对分子质量约12 000的特异性条带.结论 已成功构建了含霍乱毒素B亚单位的植物细胞表达载体,并在人参细胞中获得表达.
关键词： 霍乱毒素B亚单位(CTB) 植物细胞表达载体 人参细胞 转基因 -
CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件优化及鉴定
目的 探索融合基因CTB-Aβ42在大肠杆菌中表达的适条件,并纯化得融合蛋白.方法 设置不同的诱导温度、诱导时间、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度,在大肠杆菌中表达融合基因CTB-Aβ42,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定表达产物,GST亲和色谱柱纯化目的蛋白,Western blot鉴定目的蛋白免疫原性.结果 SDS-PAGE结果显示,GST-CTB-Aβ42融合蛋白分子质量约为45 kD,与预期结果一致;Western blot结果表明,纯化得到的目的蛋白具有免疫原性.在诱导条件为30℃,0.1 mmol/L IPTG诱导2h表达的可溶性蛋白所占比例高;在37℃,0.1mmol/L IPTG诱导4h表达的融合蛋白总量高,小部分可溶性表达,大部分以包涵体的形式存在.结论 本实验对CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件进行了优化,经GST亲和色谱柱纯化获得具有免疫原性的融合蛋白.
关键词： 霍乱毒素B亚单位(CTB) β-淀粉样蛋白 可溶性表达 胞内表达
