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人博卡病毒2基因组扩增及序列分析
为获得人博卡病毒2 (Human bocavirus 2,HBoV2)基因组序列,以2010年HBoV2单阳粪便标本为材料,PCR方法扩增HBoV2基因组不同区域,经序列拼接后得到5444bp的全基因组序列(HBoV2-NC).系统进化分析显示,HBoV2-NC与兰州株HBoV2亲缘关系近;DINAMelt末端回文结构预测证实,HBoV2-NC 5'末端存在反向互补序列,具有典型的细小病毒末端的茎环样结构;接头法PCR扩增得到HBoV2-NC部分末端侧翼序列.
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EGFR是晚期食管腺癌患者预后的独立预测因子
食管腺癌是西方国家中发病率增加快的恶性肿瘤之一,患者的5年生存率低于20%。以铂类药物为基础的新辅助化疗是治疗晚期食管腺癌的标准方案,虽然新辅助化疗能够延长部分化疗有效病人的生存期,但是仍有许多患者死于肿瘤复发。 EGFR(表皮生长因子受体)是肿瘤细胞增殖信号通路中重要的调节因子,参与调控细胞增殖,转移和组织再生。研究发现EGFR高表达和EGFR基因组扩增与直接接受手术治疗的晚期食管腺癌患者预后不良有关,然而,对于接受过新辅助化疗的患者,EGFR的表达水平与其预后的关系仍不清楚。
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表达胞壁结合型贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白的重组卡介苗构建
构建能够表达胞壁结合型贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白的重组卡介苗.用PCR技术从卡介苗(BCG)基因组扩增分支杆菌19kDa抗原的细胞壁结合区基因和从贝氏柯克斯体基因组扩增27kDa外膜蛋白基因,将它们分别插入大肠杆菌-分支杆菌穿梭质粒(pSMT3)的XbaⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/HindⅢ位点.将重组的穿梭质粒转化大肠杆菌和从大肠杆菌提取重组穿梭质粒转化卡介苗.从含潮霉素的培养基筛选到具有该抗生素抗性重组卡介苗菌落,用免疫印迹分析重组质粒转化的卡介苗,发现一约27kD的蛋白带与贝氏柯克斯体27kD重组蛋白免疫兔血清特异反应,用27kD重组蛋白免疫兔血清做间接免疫荧光检测重组卡介苗,结果为阳性.重组卡介苗能表达贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白,表达的27kDa外膜蛋白存在卡介苗菌体表面,卡介苗菌体表面的27kD抗原可能有效地诱导特异性的抗Q热免疫应答.