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戊型肝炎病毒结构区编码多肽检测相应抗体方法的建立及应用
利用多肽合成技术在戊型肝炎病毒(HEV)的结构区内的开放读码框(ORF)-2和ORF-3区合成了P1、P2二条具有明确抗原表位的合成多肽,作为EIA法抗-HEV诊断试剂的固相抗原测定抗-HEV.
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酶母表达的重组HEV ORF2蛋白在戊型肝炎诊断中的初步应用
戊型肝炎是经消化道途径传播的传染病,对人民健康影响很大,疫苗和诊断抗原的研制和开发是预防和控制其流行和传播的重要手段。戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)结构区蛋白ORF2存在多个抗原性决定簇并可能具有中和抗体的结合位点,因此戊型肝炎病毒基因工程重组蛋白的研制主要集中于ORF2。我们应用巴氏毕赤酵母(pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎病毒结构区蛋白ORF2,制备了新型重组HEV ORF2,将其作为抗原建立酶联免疫吸附试验(简称P-ELISA),检测正常人群及戊型肝炎患者血清中抗HEV-IgG和HEV-IgM抗体,同时以原核细胞表达的重组HEV ORF2建立的ELISA(简称E-ELISA)作为对照,旨在进一步研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性,探讨其作为诊断抗原在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值。
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酵母表达的重组戊型肝炎病毒ORF2蛋白在实验感染恒河猴血清抗体检测中的应用
诊断试剂的研制和开发亦是戊型肝炎研究的重要内容,以E.Coli及昆虫细胞表达的重组戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白作为抗原建立的免疫学检测方法已应用临床戊型肝炎的诊断、实验感染灵长类动物抗戊型肝炎病毒(HEV)抗体的检测以及HEV特异性抗原的检测.这些方法包括:Western blot,IFA,ELISA等.研究证实,重组HEV ORF2蛋白具有较好的抗原性[1-3].我们应用巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎结构区蛋白ORF2,制备了新型重组HEV ORF2[4],将其作为抗原建立ELISA应用于实验感染恒河猴血清抗-HEV抗体的检测,旨在研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性,以进一步探讨该重组蛋白在戊型肝炎诊断上的价值.
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血清HIV抗体阴性静脉药瘾者肝组织HIV DNA测定
为评估HIV抗体阴性HIV感染高危人群潜在的HIV传播性,本研究对来自德国的38例HIV抗体阴性的静脉药瘾者肝组织样品进行常规DNA抽提,用HIV不同结构区(gag,pol,env)6对引物同时扩增HIV DNA。结果发现38例肝组织中有30例在HIV gag区(M667/sk03c,M661/sk01c)发生特异性扩增。10例对HIV env区(env526/C02,envC01/571K)发生特异性扩增。进一步分析发现38例中有3例同时在gag、pol、env 3个区域产生特异性扩增,12例分别对HIVgag和pol区或gag、env区产生特异性扩增,17例产生单一gag或pol或env特异性扩增,6例在gag、pol、env区均阴性。对env阳性的部分标本经荧光标记自动测序仪测序并与国际HIV标准株比较,其感染HIV株与欧美B亚型同源性为86%。此研究提示,抗HIV阴性的静脉药瘾者为潜在HIV感染的高危人群,加强对这类人群“窗口期”的监测,对预防HIV的传播有重要意义。
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乙型肝炎病毒基因组高变区界定的初步研究
目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组是否存在高保守区或高变区,并探讨前-前-S基因和前-X基因的存在方式.方法:自GenBank中按血清型搜索符合要求的HBV全基因组序列,并应用Vector 6.0版软件进行核苷酸序列同源性的分析和比较.结果:GenBank中搜索出28个adr血清型和22个adw血清型HBV病毒株全基因组,比较后发现2种血清型的核苷酸序列总一致率分别为76.6%和73.9%;adr血清型病毒株存有高度变异区和高度变异区,一致率分别为54.5%和92.1%;adw血清型基因组内部含有高度保守区,一致率为85.0%,不含有高度变异区.前-前-S区的存在是较为普遍的现象,而前-X区的编码具有adr血清型特异性特点,在某些病毒基因组中,因为存在A2608→C/T和C/A2733→T替换突变,导致其前-X基因编码区起始密码子突变,因此部分HBV基因组无前-X基因结构区.结论:HBV基因组内部可能存在高度保守区,前-前-S区的存在是一个重要的现象,而前-X编码区具有adr血清型特异性的特点.
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延髓内脏带与内脏器官功能障碍关系的研究进展
下丘脑作为一个重要的应激反应调控中枢,普遍得到人们的重视.近年来有研究发现,在大鼠延髓中尾段的横切面上,存在一条从背内侧至腹外侧的带状区,称之为延髓内脏带(medullary visceral zone,MVZ)[1].MVZ作为一重要的功能结构区,参与躯体性、内脏性感觉和内脏活动的调节,如呼吸、心跳、血压、胃肠蠕动、内分泌以及免疫反应等,是另一重要的应激反应调控中枢.长期以来,延髓作为重要的生命中枢,国内外学者多局限于研究其中某一核团的病理、生理功能,而忽略了延髓对机体生命的整体调节.目前MVZ在国内神经解剖学领域已逐步被认识,而神经内科领域对其了解的甚少.本文就MVZ的形态学特点,在各种应激情况下MVZ的病理、生理改变特点,阐述与内脏器官功能障碍的关系.
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Ⅲ型中国株HCV E2/NS1基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建
E2/NS1基因被认为是丙型肝炎病毒 (HCV)基因组的结构区基因,具有较大的变异性[1],而且在不同的HCV基因型中,E2/NS1区域的核苷酸同源性也有很大的差别[2].在我国,Ⅲ型HCV 株是流行的两种主要基因型之一,为此,本研究扩增出我国基因型Ⅲ型 HCV株的 E2/NS1基因片段,并构建出插入该基因片段的真核表达质粒.
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肿瘤抑制基因MRP-1/CD9和KAI1/CD82在消化系统恶性肿瘤中的研究现状
众所周知,早期诊断与早期治疗对于降低恶性肿瘤患者的病死率有着重要意义.因此,确定和发现一种能够预测肿瘤生物学行为的标志物就显得十分重要.MRP-1/CD9、KAI1/CD82同属于跨膜4超家族(TM4SF家族),其结构为细胞膜糖蛋白,具有4个高度保守的穿膜结构区,广泛分布于多种细胞.近研究发现,两者对多种肿瘤的转移具有抑制作用,MRP-1/CD9和KAI1/CD82在恶性肿瘤组织中的表达有助于判断疾病的进展与预后.本文就MRP-1/CD9和KAI1/CD82的结构、功能及其在消化系统恶性肿瘤中的研究现状做一综述.
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正确认识食用盐与工业用盐
盐按用途可以分为食用盐、工业用盐和其他用盐.1.食用盐与工业用盐的区别结构区别:食用盐是较纯净的氯化钠;工业用盐中除含有氯化钠之外,还有亚硝酸钠等.性质区别:食用盐性质较稳定,水溶液呈中性;工业用盐中含有的亚硝酸钠在干燥条件下较为稳定,但能缓慢吸收氧而氧化成硝酸钠,水溶液呈碱性.外观区别:食用盐含碘,质白,呈细沙状,水分极少,用手揉捏时不会有凝结感,特殊情况下也可能显黄色或淡蓝色;工业用盐不含碘,色泽灰暗,外形多为颗粒状,水分含量大,亚硝酸钠也可能微显淡黄色.
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层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在正常绒毛膜组织中的表达
层粘连蛋白和纤维粘连蛋白是细胞外基质的重要成分,在正常组织中有广泛分布. 目前认为层粘连蛋白有10条不同源的多肽链,构成11种不同的蛋白分子.纤维粘连蛋白的结构具有多形性,主要由ED-A、ED-B、Ⅲ CS三个结构区不同的拼接方式所决定.层粘连蛋白和纤维粘连蛋白不仅在支持、连接和维持组织形态,调节细胞的粘附、生长、分化、增殖等方面起重要作用,而且与胚泡着床及胎盘的形成也有密切关系.
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慢性乙型肝炎抗病毒药物耐药株的监测方法
长期服用拉米夫定后,乙型肝炎病毒(HBV)迅速形成的耐药性突变已严重地影响其治疗效果[1].此耐药突变的发生率高达16%~43%以上[2],而耐药突变相关点位主要集中在HBV DNA聚合酶YMDD结构区的Met539Val和Met539Ile,并伴随Met539Val上游24个氨基酸的Leu515Met突变[3].
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HCV结构区蛋白的免疫与疫苗研究进展
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一单股、正链RNA病毒,属人类黄病毒属.基因组全长约9400nt,由5'末端、3'末端及位于其间的单一开放读码框(open reading frame,ORF)组成.ORF长约9030nt,几乎跨越整个HCV基因组,编码约3010个氨基酸(Amino acid,aa)组成的病毒多蛋白前体(Precursor polyprotein).根据病毒基因所编码蛋白结构与功能的不同,将ORF分为结构基因(Structural gene)和非结构基因(Nonstructural gene).结构基因又分为核心区(Core region)和包膜基因区(Enyelope gene),分别编码病毒的核心蛋白C及包膜蛋白E1、E2/NS1,组成病毒颗粒.
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丙型肝炎病毒结构区基因变异的研究
目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)结构区变异在HCV感染慢性化中的作用。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HCV的C、E1及E2/NS1区核苷酸片断(1 kb),扩增产物进行克隆,以单链构象多态性(SSCP)/异质性双体分析(HDA)方法对每份血清中30个克隆的C/E1和E2/NS1区准种(Quasispecies )进行优化筛选,分析HCV急性感染者和持续性感染者血清准种复杂性。结果 HCV的C/E1区和E2/NS1区扩增片段形成的SSCP条带间差异明显,但E2区形成的异质性双体与同源双体之间差距更显著,准确地反映结构区准种的复杂性;HCV持续性感染者比急性感染者血清的E2区准种复杂性明显增加。结论 HCV结构区准种复杂性的增加与病毒持续性感染有关。
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案例:低结构材料的魅力
上学期末,我们班级收集了许多卷纸筒,孩子们会将纸筒以金字塔方式进行垒高、比较,所以这学期设置低结构区时就投放了卷纸筒材料.以下为笔者的游戏观察及反思.一、案例观察案例一 观察:佳妮佳琪二人将纸筒一个接一个地垒高靠在墙壁上,然后在垒高纸筒前叠出“金字塔式”,后用纸筒摆满地垫周围.佳琪抱着腿坐在里面,小脑袋趴在膝盖上,佳妮看着她笑了笑.我问:“你们在干嘛?”“这是我们的家”佳琪说.“这是我们的城堡”佳妮说.