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一例H7N9禽流感感染病例病毒载量、耐药性与抗体水平变化分析
目的 通过对北京市1例人感染H7N9禽流感病例连续检测H7N9病毒及血清抗体,掌握H7N9病毒载量、抗体、耐药性在病程发展中的变化.方法 以24h为间隔,共收集病例的下呼吸道盥洗液样本25份,血清样本23份.采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法监测病程发展中下呼吸道盥洗液样本中的H7N9病毒载量变化、神经氨酸酶(NA)基因上R294K耐药位点变化;采用血凝抑制实验监测病例病程发展中血清样本中H7 N9抗体水平变化.结果 随着病程进展和临床抗病毒治疗的进行,病例H7N9禽流感病毒载量逐渐降低,抗体水平逐渐升高.病程后期部分样本中发现少量NA基因R294K耐药突变.结论 real-time RT-PCR和血凝抑制试验可用于人感染H7N9禽流感患者的病毒载量、耐药性变化和抗体水平变化监测,为临床救治提供依据.
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浅谈拉米夫定对慢性肝炎患者的疗效
目前,对于慢性乙型肝炎患者重要的措施是抗病毒治疗,随着以拉米夫定为代表的新一代核苷类似物在我国慢性乙型肝炎患者中的广泛引用,核苷类似物(拉米夫定)耐药成为目前临床关注的焦点问题.通过对接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者300例纳入定期HBV DNA载量检测、耐药突变检测、肝功能检测,进而评估拉米夫定对慢性乙型肝炎患者的疗效.
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深圳口岸国际旅行人员中HIV-1感染者耐药基因型检测分析
目的 对深圳口岸1996-2008年已确诊的68例人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者进行耐药性突变分析,以了解深圳口岸国际旅行者HIV-1耐药性毒株的流行情况.方法 应用巢式RT-PCR扩增HIV-1聚合酶基因,对所获得的PCR产物直接测序,再将所获得的序列与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点.结果在68例HIV-1感染者中,经巢式RT-PCR扩增并获得聚合酶基因序列68份.耐药分析结果表明,本研究人群未检测到蛋白酶抑制剂(PI)原发耐药突变；11例感染者发生反转录酶抑制剂(RTI)耐药基因突变,基因突变率为16.17％；其中核苷类和非核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变率分别为7.35％(5/68)和8.82％(6/68).结论 本研究分析了深圳口岸国际旅行者HIV-1感染者耐药突变的流行情况,这对于我国的艾滋病预防和控制工作具有重要指导意义.
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乙型肝炎病毒耐药突变检测方法应用研究进展
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一项全球性公共卫生问题,其是引起慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的主要致病因素.目前,治疗HBV感染的药物主要分为两类:干扰素(interferon,IFN)和核苷/核苷酸类似物(nucleic acid,NA),其中后者通过作用于病毒基因活性区发挥抑制病毒增殖的功能,但在该类药物治疗中易致HBV基因组突变,从而使HBV产生耐药性,终降低疗效,甚至无治疗效果.尽管目前对HBV感染的治疗取得了一定进展,然而,如何能持久地抑制病毒复制,始终是临床面临的主要挑战.因此,对耐药突变进行早期、快速检测具有重要临床意义,这样可降低肝脏相关疾病发生和患者死亡风险,使慢性HBV感染的监测达到优化.理想的HBV耐药突变检测方法需具备灵敏度和准确度高、重复性好、易操作、高通量、能够检测出混合新突变株的特点.现将HBV耐药突变检测方法研究和临床应用进展阐述如下.
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重庆市男男性接触人群中HIV-1新近感染者耐药监测
目的 调查2006年重庆市男男性接触(MSM)人群的HIV感染率、估计该人群的发病率,并对新近感染的样本进行耐药检测.方法 通过同性爱者场所的业主、志愿者组织以"滚雪球"的方式招募未接受过抗病毒治疗的MSM进行横断面调查.用酶联免疫和蛋白印迹法进行HIV抗体检测,BED-酶联捕获试验(BED-CEIA)进行新近感染检测,并通过间接检测血清阳转后HIV-IgG抗体占总IgG的比例来检测HIV新近感染、估算HIV发病率.耐药检测采用Trugene HIV-1试剂盒扩增出靶HIV-1 pol区基因中288 bp的蛋白酶基因(PR)和630 bp的逆转录酶基因(RT)片段,所得片段进行序列分析,结果由Bayer公司基因型耐药突变解释规则[DR 3.7 IVD(2006/07/27)Guidelines 11.0(2005/12/15)]生成临床耐药报告和突变位点报告,同时序列提交Stanford HIVdb数据库进行判断,得到耐药评分结果.上述两种结果再与用Geno2pheno方法进行耐药性判定的结果比对.结果 重庆市MSM人群2006年HIV感染率为10.4%,估算发病率为7.98%.使用三种方法分析耐药情况,分别有1例、2例、1例出现逆转录酶区(PR)突变,导致其对蛋白酶类抑制剂(PI)产生耐药,得到的该人群流行毒株耐药率分别为4.55%、9.09%和4.55%.结论 重庆市MSM人群的发病率及感染率已处于较高水平,应予以密切关注,原发耐药水平目前尚处于较低水平.
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未经高效抗反转录病毒治疗的HIV-1感染者耐药性检测和分析
为了解上海部分地区未经高效抗反转录病毒治疗(HAABT)的HIV感染者HIV-1耐药突变的分子流行病学,笔者对14例在本中心就诊的HIV-1感染患者进行了基因型耐药检测和分析,现报告如下.
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平行等位基因特异性序列分析技术检测HIV-1感染者体内微量耐药病毒
高效抗病毒治疗(HAART)是目前治疗HIV感染者的首选方法,然而病毒准种中耐药突变的聚集终会导致治疗的失败[1-3].在我国,由于大规模的抗病毒治疗也导致了耐药的发生,并存在较高的逆转录酶抑制剂交叉耐药现象[4],因此,检测耐药突变,尤其是检测微量或少数的耐药突变病毒,对于了解多重耐药的发生机制,制定佳的治疗方案以及预测治疗效果起着重要的作用[5].
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河南省1922例艾滋病一线抗病毒治疗失败患者中HIV耐药基因突变情况分析
目的 分析河南省艾滋病一线抗病毒治疗失败患者中HIV耐药基因突变发生情况.方法 利用中国法定传染病监测信息网络直报系统子平台——艾滋病综合防治数据信息管理系统,收集2011年河南省9个地级市中接受一线艾滋病抗病毒治疗＞1年,病毒载量＞1 000拷贝/ml的患者的基本信息.删除基本信息缺失(40例)、病例以及耐药检测结果不完整(212例)者,共计1 922例艾滋病患者纳入本研究,并对其进行基因型耐药检测.采用多因素非条件logistic回归模型分析含HIV耐药毒株的艾滋病患者发生基因突变的影响因素.结果 1 922例发生一线抗病毒治疗失败的艾滋病患者中,男性1 039例,女性833例,年龄为(45.7±12.1)岁,已婚者占82.73％(1 590例),感染途径多为血液传播,占87.93％(1 690例).64.20％(1 234例)的患者存在有效的耐药基因突变,核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)和蛋白酶抑制剂(PI)类药物耐药基因突变的发生率分别为62.59％(1 203例),49.74％(956例)和0.94％(18例),同时发生NRTI和NNRTI耐药突变的患者占42.09％(809例).≥1TAM是发生率较高的NRTI耐药基因突变位点,占41.94％(806例),TAM-1和TAM-2的发生率分别是8.48％(163例)和4.24％(81例).存在K65R/N和Q151M耐药突变复合体患者分别为23和4例.K103N/S是发生率较高的NNRTI耐药基因突变位点,占34.32％(659例).多因素非条件logistic回归模型分析显示,母婴传播(OR=9.05,95％CI:1.14～72.12)、临床分期为Ⅳ期(OR=1.70,95％CI:1.09～2.66)和治疗5年(OR=1.59,95％CI:1.03～2.47)的患者耐药发生率高;治疗1年(OR=0.19,95％CI:0.13～0.27)的患者耐药发生率低.结论 河南省一线抗病毒治疗失败患者的耐药突变多样,模式较复杂,母婴传播、临床分期为Ⅳ期及治疗5年的患者发生耐药基因突变的风险高.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 抗病毒治疗 回顾性研究 耐药突变 -
2016年江苏省579例艾滋病抗病毒治疗失败患者HIV-1耐药突变状况及影响因素分析
目的 分析江苏省艾滋病抗病毒治疗失败患者HIV-1耐药突变状况及影响因素.方法 利用国家艾滋病综合防治数据信息系统,收集2016年江苏省内接受抗病毒治疗≥12个月,抗病毒治疗后病毒学治疗失败,年龄≥18岁者的基本信息,排除病例信息缺失者,终共纳入研究对象713例.提取其病毒RNA为模板进行扩增并测序,测序反馈后的序列进行编辑、拼接和校对后,获得pol基因区序列.使用美国斯坦福大学HIV耐药数据库在线进行基因型耐药突变和病毒亚型分析.采用多因素非条件logistic回归模型分析研究对象发生耐药基因突变的相关因素.结果 共成功扩增579例研究对象的样本,其中,男性占85.66%(496例),年龄中位数为39岁,感染途径主要是经性传播途径(553例,95.51%),共331例患者出现耐药基因突变,耐药基因突变发生率为57.18%.与基线CD4+T淋巴细胞计数>500个/μl的患者相比,基线CD4+T细胞计数在201~500和≤200个/μl者耐药基因突变的OR值分别为3.33和6.87;与治疗时间在24个月内的患者相比,治疗时间在25~48个月的患者耐药基因突变的OR值为1.88;与感染CRF07_BC亚型的患者相比,感染CRF01_AE和B亚型毒株的患者耐药基因突变OR值分别为2.22和3.32;以上P值均<0.05.579例患者对蛋白酶抑制剂(PI)、核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTI)和非核苷酸逆转录酶抑制剂(NNRTI)类耐药基因突变发生率分别为3.80% (22例)、33.16%(192例)和53.37%(309例),同时出现NRTI和NNRTI突变的发生率为31.95%.M184V/I和K103N/Q分别是NRTI和NNRTI耐药突变发生频率高的位点,分别占28.15%和22.28%.结论江苏省艾滋病抗病毒治疗失败患者中耐药突变状况复杂多样,基线CD4+T淋巴细胞计数低、治疗时间长、感染CRF01_AE和B亚型毒株者耐药突变率较高.
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流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物耐药现状及机制研究进展
流感病毒可引起急性呼吸道传染病,严重危害人们的身体健康.神经氨酸酶抑制剂(NAI)是以神经氨酸酶为靶点的药物,可以有效抑制甲型和乙型流感病毒复制,是目前流感预防和治疗的一线用药.然而由于NA或者HA的突变,导致病毒对该药耐药.不同亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的耐药情况也不同,不同的检测方法也对判断病毒是否耐药有影响.
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RNA干扰抗HIV-1的研究进展
艾滋病即获得性免疫缺陷综合征（ acquired immunodefi-ciency syndrome，AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（ human im-munodeficiency virus，HIV）感染导致CD4＋T淋巴细胞计数减少、机体免疫功能受损直至衰竭的慢性传染病。据联合国艾滋病规划署统计，2012年HIV感染及AIDS患者总人数已达3530万，对全人类的健康造成了极大的威胁。目前对于HIV／AIDS的治疗手段主要是高效抗逆转录病毒疗法（ HAART），该法可以有效降低HIV病毒载量，提高CD4＋T细胞，达到一定程度的免疫重建而减少机会性感染的发生，控制HIV进展并延长生存率，但HAART不能完全清除病毒，且存在依从性差、毒副作用大及耐药突变等缺点［1-2］。所以人们在寻找开发新的疗法， RNA干扰在基因研究、临床治疗中具备高效、稳定、简单、特异等优势和潜力，有许多研究者在AIDS的治疗和预防中尝试应用该技术，且已获得阶段性的进展，使其有望成为一种具有良好抗 HIV-1疗效的新方法。
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体外无药物选择压力条件下HIV-1耐药基因突变的演变
目的 分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法 采集15例服用拉米夫定+司他夫定+萘韦拉平(3TC+D4T+NVP)的HIV-1感染者的外周血单个核细胞(PBMC),用体外共培养的方法从中分离原代HIV-1毒株;RT-PCR扩增耐药毒株历代培养上清的HIV-1 pol区基因并测序,在Stanford HIV Drug Resistance Database数据库进行耐药性分析.结果 15例患者中病毒载量>1000拷贝/ml的有8例,均成功分离出稳定传代的原代毒株,其中2株为耐药毒株,所携带的主要耐药突变分别是K103N/K238T和M184V/K103N/Y181C/H221Y,分别对NVP和3TC/NVP高度耐药;无药物压力的体外培养过程中,M184V、K103N、Y181C和H221Y等耐药突变可以稳定传代,但是K238T发生了回复突变.结论 分离出2株稳定传代的HIV-1耐药毒株,无药物压力情况下,携带K103N突变的毒株具有较好的复制适应性,可稳定传代;携带M184V和K103N/Y181C/H221Y的毒株也能够稳定复制;本研究中发现K238T耐药突变在失去药物的条件下稳定性差,提示该位点易发生回复突变.
关键词： 原代HIV-1耐药毒株 耐药突变 复制动力学 -
拉米夫定抗乙型肝炎病毒治疗中耐药突变的后续治疗
拉米夫定(lamivudine)抗乙型肝炎病毒治疗中耐药突变发生率高,文献报道在拉米夫定治疗1,2,3,4,5 a时分别为14%,38%,49%,66%,69%.耐药突变可导致血清HBV DNA水平阳转或明显上升,肝功能严重受损,甚至病情恶化死亡.关于拉米夫定抗乙型肝炎病毒治疗中耐药突变的后续治疗目前国内外尚无统一用药方案,单药治疗(如:继续使用拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦)在临床使用中已经取得了一定疗效,联合抗病毒治疗和中医药治疗是今后研究的方向.
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乙型肝炎病毒基因变异及耐药突变研究进展
全球有近4亿人口感染乙型肝炎病毒(HBV),HBV持续感染是当前严重威胁人类健康的全球问题之一[1].我国是HBV感染的高发区,慢性乙型肝炎(CHB)是我国肝硬化、肝功能衰竭和原发性肝癌的主要危险因素.HBV变异给疾病的治疗、预防、诊断等方面带来了很多新的问题,同时随着核苷(酸)类似物广泛应用于CHB患者的治疗,产生的耐药问题已在一定程度上限制了其进一步应用.深入了解HBV的变异、耐药情况及解决途径对指导临床用药有重要意义.
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上海地区耐多药结核菌突变特点
快速诊断并阻断耐多药结核茵的传播对控制耐多药结核病疫情具有非常重要的意义.结核分枝杆菌生长缓慢,传统的基于固体培养的药物敏感试验非常耗时,新的基于耐药突变的分子诊断方法将是快速诊断的发展趋势.结核分枝杆菌耐药与基因组上特定基因的点突变有关.目前WHO审核通过了2个基于检测突变的快速诊断产品,但由于不同地区耐药突变特点不同,其在不同地区检测的敏感性和特异性有很大差异.我们观察了上海地区耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变特点,筛选出一套高敏感耐药突变位点用于耐药结核病的快速诊断.
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一例慢性乙型肝炎病人YMDD突变及阿德福韦耐药突变的动态变化
患者男,32岁,HBsAg阳性4年余.应用拉米夫定100mg/d治疗近3年时出现YMDD突变;直接转换到阿德福韦10 mg/d治疗,之后ALT、HBV DNA水平逐渐下降,但在阿德福韦治疗80周后出现病毒突破.不定期随访病人,采集的血清分别是拉米夫定转换为阿德福韦治疗的前2周,后12、24、60、80和84周.
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慢性乙型肝炎长期抗病毒治疗的耐药管理
慢性HBV感染目前仍然是全球重要的健康问题,全世界范围内HBV仍有很高的感染率,并且近年出现了抗病毒耐药突变.目前美国药品和食品管理局(FDA)批准的抗病毒药物如拉米夫定(LAM)、阿德福韦(ADV)和恩替卡韦(ETV)可抑制HBV复制.然而,HBV共价闭合环状DNA存在于感染细胞核中,需要延长治疗时间而达到防止停药后病毒复制反弹.伴随延长治疗时间出现的问题就是治疗中的选择性抗病毒药物耐药突变发生.随着核苷类抗病毒药物的应用,抗病毒药物耐药突变已经成为目前临床医师进行慢性乙型肝炎(CHB)治疗面临的主要问题,以下就目前关于CHB长期抗病毒治疗耐药管理相关问题做一简要回顾总结.
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核苷(酸)类药物相关乙型肝炎病毒逆转录酶区耐药突变的异质性分析
目的 分析慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者核苷(酸)类药物(NAs)HBV逆转录酶区相关耐药突变位点的异质性,为规范抗病毒治疗和耐药管理提供参考价值.方法 收集2011年4月至2018年3月宁波市第二医院及宁波市第四医院慢性HBV感染者NAs治疗发生病毒学突破或应答不佳2765例的血液标本,采用实时荧光定量PCR方法对血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序并分析测序结果.根据用药情况分为拉米夫定(LAM)单药耐药组(n=603)、替比夫定(LdT)单药耐药组(n=147)、阿德福韦酯(ADV)单药耐药组(n=68)、恩替卡韦(ETV)单药耐药组(n=10)和NAs序贯或联合耐药组(n=365),分析各组耐药突变位点及耐药模式(通路).采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析.结果 在2765例慢性HBV感染者的血液标本中,检测出NAs相关HBV-RT区耐药突变1193例,总突变率为43.15％.LAM单药耐药组的突变率为62.62％(603/963),共19种突变类型,以单位点突变rtM204I/V多见(40.30％,243/603).LdT单药耐药组的突变率为45.51％(147/323),共3种突变类型,以单位点突变rtM204I/V多见(59.86％,88/147).ADV单药耐药组的突变率为17.80％(68/382),主要为rtA181T单点突变(64.71％,44/68).ETV单药耐药组的突变率为4.06％(10/246),以rtT184A/G/S/I/L/F单点突变多见(80.00％,8/10).序贯或联合治疗耐药组的突变率为41.91％(365/871),其中LAM/LdT应答不佳或耐药序贯ADV组突变率为63.39％(142/224),以rtA181V/T多见(35.21％,50/142);LAM/LdT应答不佳或耐药联合ADV组突变率为42.19％(54/128),以rtA181V/T多见(46.30％,25/54);LAM/LdT应答不佳或耐药后序贯ETV 1.0 mg组突变率为44.66％(117/262),以rtL180M+M204I/V+S202G/I多见(31.62％,37/117);LAM/LdT应答不佳或耐药ETV联合ADV组突变率为7.14％(5/70),均为多位点突变;ADV应答不佳或耐药序贯ETV 0.5 mg组突变率为28.14％(47/167),均为多位点突变.rtV173L、rtL180M、rtV214A等次要(补偿)位点及rtV207I/L/G、rtS213T、rtN238T等尚未完全明确位点的单位点突变均被检测出.NAs单药治疗的耐药模式(通路)较为单一,NAs经治患者(序贯或联合治疗组)的耐药模式(通路)复杂多样,存在多个耐药模式(通路),并随着NAs种类的增加而增加.非一线NAs相关耐药模式(通路)的构成比基本呈总体下降趋势,而ETV相关耐药的构成比基本呈总体上升趋势.结论 NAs相关HBV耐药突变位点(模式)复杂多样,特别是多位点突变、难治性耐药突变、多药耐药突变和交叉耐药突变.因此,优选、优化抗病毒治疗策略和耐药管理观念需不断更新.
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绍兴市HIV-1毒株的耐药变异研究
目的 了解绍兴市1型艾滋病病毒(HIV-1)株的耐药变异情况.方法 分析2013-2014年绍兴地区新确认未经抗病毒治疗的130例HIV-1感染者,以及2014年前抗病毒治疗满一年且病毒未抑制的34例感染者样本,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和巢式聚合酶链式反应(Nested-PCR)方法扩增HIV-1的pol基因区全长,参照美国斯坦福大学HIV耐药数据库,确定HIV亚型及耐药突变位点.结果 34例新诊断HIV感染者及33例病毒未抑制感染者的样品检测到耐药突变,主要亚型为CRF01_AE和CRF07_BC.仅在病毒未抑制感染者中检测到针对核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)的耐药突变,主要类型有M184V(42.42％)、K70R(15.15％)、D67N(12.12％).在新确认感染者和病毒未抑制感染者两组人群中,均检测到针对非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药的突变,主要类型有V179D/E/T(10.00％和18.18％)、K103N(2.22％和21.21％);在病毒未抑制感染者中还有Y181CY(21.21％)、V90I(12.12％)、G190A(15.15％).在反转录酶(RT)区和整合酶(IN)区仅检测到少量次要耐药突变.结论 绍兴市HIV经抗病毒治疗后易产生耐药性,部分可在新感染人群中传播,应对HIV耐药变异加强监测.
关键词： 艾滋病病毒 耐药 耐药突变 高效抗反转录病毒治疗 -
长期ART的AIDS病人更换二线药物的效果及耐药情况
目的 分析接受一线抗病毒治疗(ART)时间较长的艾滋病(AIDS)病人,更换二线药物后的治疗效果及相关耐药位点的变化.方法 在河南和安徽采用随访观察的方法,比较更换二线药物前和换药10个月左右,AIDS病人病毒及免疫学指标的变化情况.结果 共调查68名AIDS病人,更换抗病毒药物前治疗时间中位数为77个月.病毒载量(VL)≥1 000拷贝/mL组,在换药后病毒抑制率为79.1％ (34/43),换药前后的耐药率分别为76.7％和9.3％ (P＜0.05);CD+T淋巴细胞中位数分别为186个/μL和320个/μL(P＜0.05).耐药组换药后的耐药率为11.4％(4/35),换药后病毒抑制率由换药前的5.7％上升到82.9％(P＜0.05);换药前后CD4+T淋巴细胞中位数分别为187个/μL和325个/μL (P＜0.05).换药前常见的耐药位点包括K103N、Y181C、TAMs、M184V和69位插入复合体,而换药后的蛋白酶抑制剂(PIs)突变位点为M46I.结论 对于长期接受一线ART且病毒载量≥1 000拷贝/mL或耐药的病人,更换二线药物后可取得较好的临床效果;而对于病毒载量＜1 000拷贝/mL或非耐药的病人,如何换药仍需进一步研究.
