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2011年北京市朝阳区儿童A组溶血性链球菌的emm基因分型及耐药性分析
目的 了解2011年北京市朝阳区儿童感染A组溶血性链球菌(GAS)的emm基因分型及对红霉素和克林霉素的耐药情况及耐药基因谱的特点.方法 从猩红热或咽峡炎及扁桃体炎儿童患者的咽拭子培养分离获得71株GAS,应用PCR扩增emm基因及红霉素耐药基因mefA、ermA、ermB和转座子基因Tn916;采用E-test法进行药敏试验并分析耐药情况.结果 北京市朝阳区儿童感染GAS的emm12.0基因型占87.4％,其次为emm1.0型(9.8％)、emm22.0型(1.4％)、emm75.0型(1.4％);GAS对红霉素和克林霉素的耐药率为100％和95.8％,两种药物的交叉耐药率为95.8％;耐药基因ermA、ermB、mefA和转座子基因Tn916的携带率分别为5.6％、90.1％、4.2％和90.1％.结论 北京市朝阳区2011年儿童感染GAS的主要流行株为emm12.0型,对红霉素普遍具有较高的耐药率且与克林霉素之间存在显著的交叉耐药;ermB基因是决定本地区2011年儿童感染GAS对红霉素耐药的重要基因;而Tn916转座子基因在GAS菌株间耐药基因扩散中起重要作用.
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2014年北京市儿童A组链球菌感染分离株超抗原基因谱分析
目的 分析2014年北京地区儿童A组链球菌(group A Streptococcus,GAS)超抗原基因谱,探讨其与GAS的emm型别和感染相关疾病的关系.方法 于2014年5-7月在北京市16个区(县)36家哨点医院被临床诊断为猩红热和咽扁桃体炎的儿童患者咽拭子样本中分离到259株GAS.采用Real-time PCR方法检测GAS超抗原基因(speA、speB、speC、speF、speG、speH、speI、speJ、speK、speL、spe、smeZ、ssa);PCR法扩增GAS菌株M蛋白N末端基因片段,产物经测序比对后确定GAS的emm型别.比较不同组间超抗原基因、emm型别分布的差异.结果 259株GAS中,13种超抗原基因的检出率分别为:speA 48.6％ (126株)、speB 99.2％ (257株)、speC 99.2％ (257株)、speF 98.8％ (256株)、speG98.5％ (255株)、speH 43.6％ (113株)、speI 46.3％ (120株)、speJ 49.0％ (127株)、smeZ 99.2％ (257株)、ssa98.5％ (255株),speK、speL、speM均未检出,共观察到11种超抗原基因谱(A～K).超抗原基因speA、speJ在emm1型GAS中检出率分别为94.2％ (113/120)、95.0％(114/120),高于在emm12型GAS中的检出率(均为5.6％,7/124),差异有统计学意义(x2值分别为191.20、194.80,P值均＜0.001);超抗原speH、speI在emm12型GAS中检出率分别为83.9％(104/124)、88.7％(110/124),高于emm1型GAS的检出率[3.3％(4/120)、4.2％(5/120)],差异有统计学意义(x2值分别为160.30、174.90,P值均＜0.001).致猩红热和致咽扁桃体炎病例GAS分离株的超抗原基因、emm型别分布差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 2014年北京市儿童来源GAS的超抗原基因speB、speC、speF、speG、smeZ和ssa的检出率较高,未检测到超抗原基因speK、speL、speM;超抗原基因分布与GAS的emm型别密切相关;未发现超抗原基因及emm型别在致咽扁桃体炎和致猩红热菌株间的分布差异.
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上海成人和儿童患者分离的A群链球菌分子流行病学分析
目的：研究和比较上海成人和儿童患者分离的A群链球菌（GAS）耐药、克隆分型、emm分型、生物膜形成及毒力因子携带等分子特征，为感染控制及治疗提供临床流行病学信息。方法39株成人（13株）和儿童（26株）患者分离的GAS ，用K‐B纸片法测定对9种常用抗菌药物的敏感性；采用多位点序列分型（MLST）方法进行克隆分型；采用编码M蛋白的emm基因序列分析进行基因分型；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法分析不同 emm型菌株的基因组特征；采用半定量生物膜形成试验分析其生物膜形成。聚合酶链反应（PCR）方法检测20个包括超抗原在内的GAS主要毒力基因。结果39株GAS主要基因型为emm12‐ST36（64．1％），emm1‐ST28（17．9％）；成人和儿童均以emm12‐ST36为主。儿童菌株对红霉素和克林霉素的耐药率显著高于成人（P＝0．0087）。相同emm分型‐克隆分型菌株在PFGE脉冲场带型中呈现高度聚集。生物膜形成与 emm1型菌株明显相关（P＝0．005），与红霉素和克林霉素耐药密切相关（P＝0．0003），儿童菌株的生物膜形成强于成人菌株（P＜0．0001）。毒力基因 speG、speB、sdaB、Mac全部阳性；speA、speJ、spd3与 emm1型菌株有明显相关（分别为 P＜0．0001、P＝0．0055、P＜0．0001）；speI、sic与emm12型菌株有明显相关（均为 P＜0．0001）；speH、ssa在emm12和 emm1型菌株中有明显分布差异（分别为 P＝0．0364、P＝0．0258）；20个毒力基因在成人和儿童emm12型菌株中均没有明显分布差异（均为 P＞0．05）。结论 emm分型与克隆分型、PFGE、毒力基因有很好相关性。成人和儿童菌株在耐药情况、生物膜形成中均存在差异。特定 emm型菌株与抗生素耐药和致病力密切相关，为感染控制提供依据。重要毒力基因将是未来研制新型疫苗降低GAS感染的新型靶标。
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儿童A族β溶血链球菌的主要毒力特征
目的 研究儿童A族β溶血链球菌(GAS)分离株超抗原、链球菌DNA酶(DNase)、纤维结合蛋白(FBP)基因的分布特征,分析其与感染儿童及主要emm流行型的关系.方法 收集2008年至2012年3所儿童医院临床分离的GAS 72株感染菌株,40株健康携带株.PCR扩增及测序对菌株进行emm分型;PCR检测12种超抗原(speA、speC、speH、speI、speG、speJ、ssa、smeZ、speL、speM、speK和speF)、5种DNase基因(sda、sdn、spdI、spd3和spd4)及磷脂酶A2基因sla和FBP基因(rtFl、prtF2 fba)的携带.结果 112株GAS分离株,共7种emm型,包括:enm1、emm12、emm22、emm4、emm77、emm86、stG485,以emm12型为主,占68.8％,感染株与非感染株emm型分布一致.112株GAS超抗原基因携带率分别为speA 13.4％,speC 95.5％,speF 85.7％,speG74.1％,speH 63.4％,speI 63.4c％,speJ 14.3c％,speK、speL、speM各占0.9％,ssa 74.1％,smeZ 93.8％;DNase基因:sda 66.96％,sdn 12.5％,spdI 94.64％,spd327.68％,spd40.89％,没有分离株携带sla;FBP基因:prtF1 69.6％,prtF2 79.5％,fba 30.4％,prtF1和rt F2同时阳性67.9％,三者都不携带的占3.6％.感染儿童分离株speJ、spd3的携带率明显高于健康儿童携带株,而ssa,speF,speG、prtF1、rt F2、同时携带prtF1/prtF2基因在健康儿童携带株更常见.在emm12型GAS中,speH、spe1、speG、sda、spd1、prtF1、prt F2、rtF1和rt F2同时阳性的携带率高于非emm12型,而speA、speJ、sdn、spd3 fba的携带率则低于非emm12型.结论 儿童GAS主要流行型为emm12型,其次为emm1、emm22型,与菌株来源无关;感染儿童分离株与健康儿童携带株有不同的毒力基因分布特征;emm12型的流行可能与特定毒力基因的高携带有关.
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儿童链球菌感染分离株emm分型及超抗原基因谱的变迁
目的 通过对1993-1994年和2005-2006年359株儿童A族溶血性链球菌(GAs)分离株进行emm分型及8种超抗原基因检测,探讨不同时期儿童GAS感染分离株emm分型及超抗原基因的变化.方法 采用PCR法对2个时期359株儿童GAS分离株进行emm分型及8种超抗原基因扩增.结果 emm1和emm12在不同时期均为主要流行型,其他型别不断变化.与1993-1994年比较,2005-2006年GAS菌株emm型较集中,emm1和emm12显著增多(P＜0.01).携带6种或6种以上超抗原基因的CAS分离株从46.53％(1993-1994年)增加到78.39％(2005-2006年),ssa,speH和speJ基因的携带率明显增加(P＜0.05),而speA基因的携带率显著下降(P＜0.05).超抗原emm基因谱与emm分型之间有密切关系,相同的emm型在不同的时期携带不同的超抗原基因,emm型的分布和超抗原基因谱与GAS感染性疾病之间无显著性联系.结论 儿童链球菌感染分离株emm分型及超抗原基因谱随年代变迁.此数据为制备符合我国GAS感染的疫苗提供依据.
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2016年北京市昌平区A组乙型溶血性链球菌及相关菌株检测和分析
目的 对2016年北京市昌平区猩红热病原学监测结果进行分析.方法 利用qPCR方法与传统划线分离方法检测病例携带A组乙型溶血性链球菌(GAS)的阳性率,对分离出的GAS进行emm分型.利用16S rRNA和梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对检测出的非GAS菌株进行鉴定.结果 2016年昌平区采集的132份病例样本中,通过平板划线分离检出GAS 13株(阳性率9.85％),通过qPCR检出GAS 19株(阳性率14.39％).分离出的GAS的emm型别为emm1和emm12.分离出可培养的非GAS菌种63株,分属于5个不同菌属,共计13种菌种.结论 昌平地区GAS的emm型别较为单一,利用qPCR方法比平板划线分离方法更敏感,检测出的阳性GAS率更高.通过分离咽拭子中其他菌株,同时使用16S rRNA方法和梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析鉴定,两者阳性率有差异, 16S rRNA方法更准确.
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重庆地区扁桃体炎患儿GAS分离株emm分型、红霉素耐药基因与超抗原基因关系研究
目的:分析重庆地区扁桃体炎患儿A族链球菌(Group A streptococcus,GAS)分离株emm分型、红霉素耐药基因和超抗原基因相关性. 方法:收集2007年重庆地区扁桃体炎患儿GAS分离株44株.对44株菌株进行emm分型,红霉素耐药基因ermB、ermTR和mefA以及8种超抗原基因(ssa、SMEZ、speA、speC、speG、speH、speI、speJ)检测. 结果:儿童扁桃体炎GAS分离株emm分型以emm12多见,共26株(占59.1%);其次为emm1,共7株(占15.9%);少见的emm型为emm22有2株,emm6有2株,emm3有2株,emm80、emm63、emm102、stG485和st1815分别各有1株.44株GAS菌株均检出耐药基因ermB(100%),33株检出耐药基因ermTR(75.0%),3株检出耐药基因mefA(6.8%).44株菌株均检出ssa、SMEZ和speH超抗原基因,其余5种超抗原基因检出率依次为speG37株(84.1%),speC36株(81.8%),speI28株(63.6%), speA22株(50%),speJ7株(15.9%).7株emm1菌株有6株检出speA基因(占85.7%),26株emm12菌株有7株检出speA基因(占26.9%),speA基因分布在emm1、emm12分布中的差异具有统计学意义(P=0.008,<0.05);耐药基因ermB、ermTR和mefA在不同的emm型中分布是随机的,emm分型和耐药基因之间未发现明显相关性.结论:重庆地区儿童扁桃体炎GAS分离株emm分型以emm12和emm1为主;对红霉素的耐药机制以ermB编码为主的23SrRNA甲基化酶致靶位改变为主;emm型与大环内酯类抗生素耐药基因分布无明显相关性;speA超抗原基因分布主要与emm1相关.
