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戊型肝炎病毒结构区编码多肽检测相应抗体方法的建立及应用
利用多肽合成技术在戊型肝炎病毒(HEV)的结构区内的开放读码框(ORF)-2和ORF-3区合成了P1、P2二条具有明确抗原表位的合成多肽,作为EIA法抗-HEV诊断试剂的固相抗原测定抗-HEV.
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腺病毒六邻体蛋白型间线性化抗原位点的研究
目的对人类腺病毒(adenovirus,AdV)六邻体型间抗原位点的特性进行研究.方法通过计算机对腺病毒六邻体氨基酸序列进行比较分析,结合抗原性的预测结果和六邻体蛋白三维空间结构的肽段暴露状态,选定了保守性抗原位点进行多肽合成或通过构建重组质粒表达蛋白,将合成的六邻体肽段和表达纯化的蛋白抗原免疫动物后,用免疫印迹和间接免疫荧光方法检测抗血清的免疫特异性.结果免疫印迹分析显示,抗多肽抗体和抗重组蛋白抗体均与腺病毒的六邻体蛋白特异性识别.间接免疫荧光显示,腺病毒感染HeLa细胞核内荧光着色,并且抗血清有较好的腺病毒型间反应性.合成多肽抗体与含有相同肽段的重组蛋白抗原产生特异性结合.结论在腺病毒六邻体蛋白中存在有线性化的型间抗原位点,合成的六邻体多肽和表达重组蛋白可用于诊断价值抗体的研制.
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丙型肝炎病毒血清学分型应用的研究
为了探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性,对148份抗-HCV阳性标本进行血清分型和基因分型.血清分型应用EIA技术,采用HCV核心区第65~81氨基酸合成多肽,血清1型为RPKARRPEGTWAQPGY,血清2型为IPKDRRSTGKSWGKPGY,可将HCV分为血清1型和2型;基因分型应用型特异性PCR法,设计3条通用引物和4条分型引物,可将HCV分为基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型.
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多发性硬化T淋巴细胞系增殖反应性的研究
目的比较多发性硬化(MS)患者和正常人T淋巴细胞对碱性髓鞘蛋白(MBP)和蛋白脂质蛋白(PLP)及其合成多肽的增殖反应性. 方法选HLA-DR15亚型MS患者和正常人外周血单个核细胞,以人神经髓鞘为致敏原,采用二次致敏诱导法,经短期体外培养产生外周血T淋巴细胞系(TCL),用MBP、PLP及其合成多肽等11种抗原检测TCL的增殖反应. 结果 MS和对照组对神经髓鞘成分反应均显示多态性.MS组对7种,对照组对5种抗原有反应;比较两组总的平均阳性孔无差别(P=0.177);两组间对MBP、P30-49、P95-117、P178-191的增殖反应差异有统计学意义. 结论作为神经髓鞘主要成分的MBP和PLP免疫反应性高,可能在体内触发自身免疫反应过程发挥作用,而M87-106、P40-60、P95-117和P185-206等位点值得进一步研究.
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戊型肝炎病毒(HEV)蛋白抗原肽的化学合成及在血清学诊断中的应用
目的:为诊断戊型肝炎,寻找更好的诊断试剂盒.方法:根据戊型肝炎病毒(HEV)蛋白含有2个可能的抗原表位,从戊型肝炎病毒中国株蛋白的氨基酸序列中选取S30,NS33和S42 3段抗原肽,用固相合成法进行化学合成,所得目标肽段纯化后经质谱和氨基酸组成分析确证.结果:本文试剂盒与国外品进行比较,血清分析结果表明,前者质量与日本产品相当,明显优于美国Genelabs试剂盒.结论:以这3个合成的抗原肽作为包被抗原组装的戊型肝炎病毒血清抗体的ELISA诊断试剂盒有较好的灵敏性和专一性,可用于临床检测和流行病调查.
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合成多肽药物的合成工艺中关键问题分析
文中主要结合药品注册技术审评过程中遇到的常见问题对<合成多肽药物药学研究技术指导原则>中合成工艺部分中的一些关键问题进行归纳和分析,对本指导原则中的一些技术要求,如起始原料的要求、合成工艺申报资料的要求等进行深入和细化的阐述,同时对指导原则起草过程中存在争议的一些问题进行了说明.
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指导原则解读系列专题(十五) 合成多肽药物结构确证和质量研究
文中主要是结合药品注册技术审评过程中遇到的常见问题对<合成多肽药物药学研究技术指导原则>中结构确证、质量研究部分的一些关键问题进行归纳和分析,对指导原则中的一些技术要求,如有关物质研究方法的要求等进行深入和细化的阐述,同时对指导原则起草过程中存在争议的一些问题进行了说明.
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制备工艺和过程控制对合成多肽药物有关物质的影响
本文主要以相关指导原则和电子刊物为基础,结合QbD理念及多肽药物特点,探讨多肽制备工艺中起始物料、工艺研究优化、中间体控制等环节对产品有关物质的影响,实现对多肽药物有关物质的有效控制.
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浅谈欧洲抗生素的杂质控制问题
欧洲药品质量管理局(EDQM)于2006年9月21~22日在位于法国Strasbourg的欧洲议会总部召开了"欧洲药典对抗生素和合成多肽杂质控制要求"的研讨会,有关代表就抗生素有关杂质的审评与展望进行了全面的阐述[1],并从抗生素杂质的来源、杂质审评的总体要求以及杂质的验证等方面进行了深入地研讨.
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浅谈欧洲药典对抗生素杂质控制的新要求
欧洲药品质量管理局(EDQM)于2006年9月21日~22日在法国Strasbourg欧洲议会本部召开了"关于欧洲药典对抗生素和合成多肽杂质控制要求"的国际研讨会,会议就抗生素杂质控制审评法规、药典标准和生产企业如何考虑制订标准等方面进行了研讨.
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鳖甲活性多肽的合成及对肝星状细胞增殖的抑制作用
探讨鳖甲活性多肽的固相合成及对肝星状细胞(HSC-T6)增殖的抑制作用.根据鳖甲活性多肽的序列结构,采用固相方法对多肽进行全合成,并用MALDI-TOF MS质谱对合成多肽进行分析鉴定;肝星状细胞(HSC-T6)培养至对数生长期后,加入不同浓度合成多肽作用肝星状细胞株HSC-T6,采用MTS法分析HSC-T6生长的抑制作用;使用Annexin V-FITC/PI法检测HSC凋亡率.结果显示通过固相合成可以得到与原序列结构一致的鳖甲合成多肽;鳖甲合成多肽浓度依赖性地抑制肝星状细胞增殖,并能显著提高肝星状细胞早期凋亡率.因此,可以成功地合成鳖甲活性多肽,且对肝星状细胞增殖有明显的抑制作用.
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葡萄球菌肠毒素超抗原广谱抑制性多肽的设计及空间结构研究
目的:以SEs氨基酸高度保守序列作靶序列设计抑制性多肽,研究筛选出的多肽P72的空间结构。方法:用生物信息学软件“Vector NTI 10.3,InsightII 2000,Discovery Studio 1.7”等分析及预测多肽P72的空间结构。结果:P72在SEA、SEB和SEC的同源序列在空间结构具有高度的相似性,P72远离SEB的TCR和MHCⅡ结合位。结论:P72可能不是与MHCⅡ类分子及TCR结合而产生的抑制作用,其具体的抑制机制有待深入研究。
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抗MYCT-1单克隆抗体的制备及鉴定
MYCT-1(myc target 1)基因是我室克隆的新候选抑癌基因,GenBank登录号NM_025107[1],曾命名MTLC(myc target from laryngeal cancer cells).前期研究表明MYCT-1基因广泛表达于多种正常组织,在胃癌、喉癌、肝癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤组织中表达下调[2-5].为进一步研究MYCT-1基因的生物学功能及肿瘤发生、发展中的作用,本室利用体外合成多肽作为抗原,制备了抗MYCT-1单克隆抗体,并对其进行鉴定.
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神经髓鞘及脱脂神经髓鞘诱导MS-TCL增殖反应比较
目的比较神经髓鞘和脱脂神经髓鞘诱导多发性硬化(MS)T淋巴细胞系(TCL)对11种神经髓鞘成份的增殖反应.方法以2种人神经髓鞘在体外二次致敏,诱导MS-TCL和正常人TCL,用MBP、PLP及其合成多肽等抗原检测PTL的增殖反应.结果与非脱脂TCL相比,脱脂髓鞘使MS组的免疫反应性显著改变.尤其对PLP6种多肽反应性的改变有统计学差异, 总平均阳性孔比较P<0.001(3.41±4.83 vs 5.49±5.31).结论髓鞘脱脂使MS组增殖反应显著增加,二组的差别更明显.提示在髓鞘脱脂方面MS和正常人反应的异质性,此点对理解MS的病理机制可能很重要.
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多发性硬化患者T淋巴细胞对不同浓度神经髓鞘及其成分的增殖反应性关系探讨
为比较不同浓度神经髓鞘组织、神经髓鞘蛋白及其合成多肽作为抗原对多发性硬化(MS)和正常人的淋巴细胞诱发增殖反应的量效关系.用HLA-DR15亚型MS和正常对照外周血单个核细胞,体外培养并检测对不同浓度的人神经髓鞘、脱脂神经髓鞘、蛋白脂蛋白(PLP)、碱性髓鞘蛋白(MBP)、PLP178-191和MBP87-106多肽6种抗原的T淋巴细胞增殖反应性.结果发现神经髓鞘或脱脂神经髓鞘作为抗原刺激T淋巴细胞增殖反应的佳浓度为50~150μg/ml,PLP或MBP佳浓度为25~100μg/ml,多肽佳浓度为20~50 μg/ml.神经髓鞘抗原刺激T淋巴细胞增殖反应大于单一蛋白分子,后者又大于多肽.MS的T细胞对神经髓鞘类抗原有特异性异常增殖反应.
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丙型肝炎病毒NS5a区血清型特异性多肽的选择及应用
目的:从HCV非结构5a区(NS5a)选出基因型特异性多肽,并应用酶免疫法(EIA)进行HCV血清分型.方法:根据HCV NS5a高免疫源区(2 182~2 343)的氨基酸序列,设计并合成305个特异性多肽,应用已知基因1~6型的抗-HCV阳性血清.通过EIA法检测每个多肽的抗原性,并用基因型特异性多肽进行血清分型,同时将其与序列分析法基因分型结果进行比较.结果:不同基因型间NS5a区氨基酸的同源性较低,相同基因型不同区段氨基酸的同源性也很低.对305个特异性多肽抗原性检测结果表明,主要线性抗原区位于氨基酸残基R3、R7和R9区.18个来自保守区的多肽可与不同基因型抗-HCV阳性血清反应;12个多肽具基因型特异性.血清基因分型结果与基因分型的结果高度一致.结论:HCV NS5a高免疫源区存在主要的线性抗原;来自高度保守区的多肽抗原无基因型特异性,可用于HCV抗体检测;基因型特异性多肽可用于HCV基因分型,特别适用于HCV RNA阴性患者.
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以合成多肽抗原检测EB病毒抗体ELISA法的应用
流行病学调查显示,Epstein-Barr病毒(EB病毒)感染与鼻咽癌的病因密切关联,因此认为EB病毒是可能致癌的人类肿瘤病毒之一.
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用合成多肽分析细粒棘球蚴AgB抗原亚单位的反应性表位
目的 通过合成多肽分析细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4等3个亚单位抗原的主要反应性表位区域.方法 用ELISA法分析来源于细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4亚单位基因序列的5个人工合成多肽KK36、RK30、B4-1、B4-2和B4-3,及上述3个亚单位重组抗原在血清抗体检测中的反应性,共检测细粒棘球蚴病(115例)、多房棘球蚴病(54例)、囊尾蚴病(22例)患者和健康人(18例)血清209份.用受试者工作特征(ROC)曲线分析合成多肽和重组抗原在血清检测中的诊断效率.结果 多肽KK36和RK30诊断细粒棘球蚴病的敏感性分别为89.2%和85.0%,特异性为62.5%和59.4%,诊断效率分别为84.8%和80.4%,与AgB1 (84.5%)和AgB2 (81.2%)抗原诊断效率相近,拟合AgB1和AgB2重组抗原的ROC曲线.来源于AgB4抗原的3个多肽B4-1、B4-2和B4-3检测细粒棘球蚴病患者血清的诊断效率分别为49.4%、57.9%和77.4%.其中,B4-3的反应性佳,B4-2也有一定的反应性.结论 KK36和RK30完整地包含了AgB1和AgB2抗原的反应性表位区域.B4-2和B4-3多肽均含有AgB4抗原的部分表位区域,推测AgB4抗原的表位区域位于序列的中后段.
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模拟抗原表位基因测定及合成多肽的血吸虫病诊断价值的研究
目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎氨基酸序列选择2个噬菌体的展示肽段进行人工多肽合成.以合成的多肽为抗原,建立血吸虫病诊断方法,检测急、慢性血吸虫病人血清,观察方法的敏感性及特异性;同时检测治疗前及治愈后的血吸虫病人血清,观察该合成抗原的血吸虫病疗效考核价值.结果测定了14个噬菌体展示外源肽的基因序列,序列分析表明,其中有6个噬茵体的外源肽基因序列完全相同,其余8个噬菌体展示肽的基因序列不相同.分析演绎氨基酸序列,发现1个噬菌体展示肽中的3个连续的氨基酸(GVK)残基与血吸虫23 kDa分子氨基酸残基相同.合成多肽抗原检测急、慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为92.3%和91.1%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为7.5%,检测健康人血清,特异性为95.5%.检测治愈后0.5年的同一病人血清,阴转率为55.3%,治愈后1年的病人血清中IgG抗体的阴转率为63.2%.结论 9个具有血吸虫病诊断价值的噬菌体展示表位的基因序列被确定,并证明了合成多肽抗原有较好的血吸虫病诊断及疗效考核价值.
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免疫耐受治疗自身免疫性疾病的研究进展
神经系统自身免疫性疾病如多发性硬化、重症肌无力、多发性肌炎以及吉兰-巴雷综合征等,目前仍多采用免疫抑制剂治疗.长期应用免疫抑制剂治疗不但可使患者的全身免疫系统受到普遍性抑制,还可并发感染,甚至可诱发肿瘤和骨髓抑制,同时也不能有效地防止疾病的复发.近年来虽然在免疫学领域内寻找了一些治疗方法,如应用单克隆抗体或合成多肽等高科技手段,来阻断启动和发生免疫攻击的异常免疫细胞,但这方面的研究,在临床上尚未取得满意的结果[1].