首页 > 文献资料
-
钩端螺旋体不含兔血清培养基的应用研究
目前国内普遍使用兔血清培基(Tepckий、Korthof)培养钩体,国外普遍使用不含兔血清培养基(EMJH).将EMJH、Korthof、Tepckий各分装每管5ml,接种0.2ml(菌量2×108/ml)钩体,用Helber计算室活菌计数.
-
不同类型急性白血病患者骨髓间充质干细胞的病理学特征
骨髓间充质干细胞(MSC)具有在体内和体外支持造血的功能,因此联合MSC的造血干细胞移植有可能增强移植效果,近研究结果证实联合MSC的造血干细胞移植可以促进造血干细胞的植入和造血恢复[1,2].既往研究发现急性白血病患者骨髓造血微环境存在病理改变,包括细胞的组成和功能改变.但是,急性白血病患者骨髓MSC是否受到影响以及影响程度,尚不清楚.此外,MSC的来源有限,而且异基因MSC存在归巢效率低等问题.因此,本研究获取急性白血病患者自体的骨髓MSC,采用低血清培养基培养和扩增,观察其体外增殖能力、多向分化和支持造血功能,以明确其生物学性状并为自体MSC在临床中的进一步应用提供详尽的实验依据.
-
前列腺癌干细胞分离方法的对比及筛选
背景:前列腺癌干细胞是前列腺癌复发侵袭的重要原因,目前研究难点在于前列腺癌干细胞分离技术效率较低.目的:探索高效地从人前列腺癌PC-3及LNCap细胞株分离前列腺癌干细胞的方法.方法:采用含血清贴壁培养法及无血清悬浮培养法培养PC-3及LNCap细胞株,然后利用流式细胞表面标记CD133及CD44检测两种细胞在不同培养条件下可获取前列腺癌干细胞的比例,同时采用诱导分化实验初步鉴定前列腺癌干细胞特性.结果与结论:PC-3及LNCap细胞能在添加生长因子的无血清培养基中形成悬浮细胞球,接种在含血清培养基后可以诱导分化为贴壁细胞;无血清培养组的CD44+/CD133+细胞比例:PC-3为0.59%,LNCap为1.71%,含血清培养组中的CD44+/CD133+细胞比例:PC-3为0.32%,LNCap为0.73%,其中LNCap细胞采用两种方法所获的CD44+/CD133+细胞均高于PC-3所获的的细胞(P < 0.05),在两种细胞中无血清悬浮培养和含血清贴壁培养差异无显著性意义 (P > 0.05),但无血清悬浮培养周期长,获得细胞数相对较少,直接影响分选后肿瘤干细胞功能测定.因此可以证实含血清贴壁培养LNCap细胞较无血清悬浮培养法更能高效快捷的获取前列腺癌干细胞.
-
致泻性大肠埃希菌检测及耐药性分析
目前国际上将致泻性大肠埃希菌分为五类:产毒性大肠埃希菌(ETEC)、致泻性大肠埃希菌(EPEC)、侵入性大肠埃希菌(EIEC)、出血性大肠埃希菌(EHEC)和粘附聚集性大肠埃希菌(EAEC)[1,2].为了解致泻性大肠埃希菌检测率及耐药性,对本院1998年6月至2001年6月就诊的腹泻病人采集大便标本进行细菌学检测及药敏分析,现报道如下.材料与方法1 标本来源本院1998年6月至2001年6月就诊腹泻病人1848例大便.2 试剂及诊断血清培养基及药敏纸片购自浙江省军区后勤部卫生防疫所;志贺菌、沙门菌及致泻性大肠埃希菌诊断血清购自成都生物制品研究所,菌种鉴定板购自威自达医疗有限公司,以上试剂均在有效期内使用.
-
不同胎牛血清培养基对羊水细胞培养结果的影响
自70年代羊水细胞培养成功以来,染色体核型分析技术已经成为产前诊断胎儿染色体病的金标准.羊水细胞能否成功培养与孕周有关,通常培养的佳时间为孕19~21周.有研究认为孕24周以上的羊水细胞虽然比较容易衰老,但仍可能具有一定活力,关键是培养基的培养环境是否适合羊水细胞的生长.细胞培养失败多与培养基的品种和小牛血清的选择不当有关,优质的培养基培养可影响羊水染色体成功制备的全过程.为此,我们通过改变羊水培养基中胎牛血清所占比例与羊膜腔穿刺时间观察不同孕周羊水细胞的培养效果.现报告如下.
-
029 川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的影响
目的: 探讨川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的防治机制. 方法: 以高脂高胆固醇(Cho)膳食制备大白兔高脂高Cho血清. 贴块培养法进行VSMCs原代培养及传代. 原代培养到第9~12天, 组织块周围的细胞生长融合成片并铺满瓶底时, 进行VSMCs传代培养. 实验选用第3代传代培养的VSMCs. 实验分为正常组用含双抗和胎牛血清的RPMI1640培养液培养, 高脂组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液培养, 秋水仙碱组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液加入秋水仙碱培养, 川芎嗪低、中、高剂量组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液分别加入20、 200、 2000 μg/ml川芎嗪培养. 结果: 川芎嗪能明显减轻高脂血清诱导培养VSMCs之组织形态和超微结构改变, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs具有典型收缩表型的VSMCs形态和超微结构, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs为典型合成表型的VSMCs源性泡沫细胞形态和超微结构, 在含川芎嗪的高脂血清培养基中培养VSMCs的细胞形态界于泡沫细胞与VSMCs之间. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之迁移距离, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定的运动而具有一定的迁移距离, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的迁移距离增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs迁移距离降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之生长计数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能分裂增生而具有一定的生长计数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的生长计数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs的生长计数降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之分裂指数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定程度的分裂而具有一定的分裂指数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs生的分裂指数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs分裂指数降低. 结论: 川芎嗪能通过抑制的VSMCs表型转换, 迁移速率, 生长速度, 分裂指数, 荷脂过程和损伤过程等多个环节, 逆转高脂血清诱导培养VSMCs的粥样硬化样细胞病变.
-
FGF-2在心肌细胞钙离子调节作用的研究
目的:观察FGF-2对心肌细胞的[Ca2+]i是否有调节作用,并对FGF-2在心肌细胞促生长作用中的钙信号转导机制进行了初步的研究.方法:选择狗胚心肌细胞系作为研究模型,观察1、10、100和1 000 ng/mL重组FGF-2对细胞生长和细胞内钙离子的影响.细胞在含不同浓度FGF-2低血清培养基中生长5 d,测定细胞数量和分裂指数作为FGF-2对细胞生长的影响.细胞以Fluo-3/AM负载作为细胞内钙离子的指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子含量的变化,不同浓度FGF-2作用后的1、4和8 h时的细胞内钙离子含量的相对变化以Fluo-3荧光强度的变化作为指标.以连续扫描的方式,观察15 min之内细胞内钙离子动力曲线的变化,以反应FGF-2对细胞钙离子作用的短时效应.结果:1、10、100 ng/mL重组FGF-2可以促使培养的心肌细胞系细胞的增殖和分裂,1 000 ng/mL FGF-2则产生明显的抑制作用.该心肌细胞系细胞的Fluo-3/AM染色显示,静息时的细胞内钙离子浓度是很低的,FGF-2刺激后Fluo-3荧光染色明显上升,并呈现出不均一性,以细胞核区的深染为特点.细胞内钙动力曲线显示,1、10、100 ng/mL FGF-2可引起细胞内钙离子缓慢而持续的上升,1 ng/mL FGF-2组这种现象持续到4 h后消失,而10和100 ng/mL FGF-2组则持续到8 h后才逐渐下降接近正常水平.1 000 ng/mL FGF-2对细胞内钙离子的调节作用是双向的,在所观察的15 min之内,FGF-2使细胞内钙离子浓度下降,此后的1 h后开始上升,至8 h后还明显高于对照.结论:FGF-2对体外培养的心肌细胞系细胞的生长和对细胞内钙离子的影响具有双向性,并且这种促生长作用的剂量与促细胞[Ca2+]i的剂量是相平行的.对细胞内钙离子的调控,可能是FGF-2在心肌细胞中发挥其生物效应的一个重要途径.
-
染色体罗伯逊异位伴习惯性流产2例
[例1]女性,34岁.婚后自然流产4次.到我室要求作染色体检查.早孕期间无不良物质接触史,无病毒感染史.双方弓型虫检查为阴性;男方精液检查正常,无烟酒嗜好,无慢性病及不良物质接触史,非近亲婚配.双方兄弟姐妹均已生育,无流产史及畸胎史.夫妇双方按常规抽取外周血1mL,分别接种于F10+小牛血清培养基中,置于37℃温箱培养72h,收集细胞前3h加秋水仙素,使细胞生长终止在中期,然后低渗,固定,制片,G显带吉氏染色,显微镜下计算30个细胞,分析3个核型.结果为:45,xxt(15;22),(15qter→15q11::22p11→22qter).其丈夫核型为46,xy,家族其他成员拒绝作染色体检查.
-
Excel在肿瘤药敏实验数据处理中的应用
MTT法自1983年建立以来,被广泛应用,具有很好的临床价值。我院临床药学室于1997年应用MTT法检测实体瘤体外药物敏感性,因实验数据量大,计算重复、繁琐,且数据记录、保存十分麻烦,于是应用电子表格Excel软件对实验数据进行制表、数据处理,发现其方便快捷,准确性高,且适宜进一步做统计分析、制图,功能强大,故可结合不同药学实验特点,应用到多项药学实验中去[1]。1 实验部分1.1 实验过程[2,3]:取手术切除癌肿标本,机械粉碎法,用含血清培养基配成细胞悬液。加抗肿瘤药物,于37℃、5%CO2培养。加MTT染色,培养,存活细胞染色体与MTT形成紫色结晶物,加终止液溶解,于570nm处读取吸光度。加药组与对照组比较,以考察癌细胞对不同药物的敏感性。
-
保肝宁对HSC中NF-kB影响的实验研究
目的:研究中药复方保肝宁对肝星状细胞内NF-kB活性的影响.方法:给正常wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7d,制备含药血清,将10%的药物血清培养基加入体外培养的活化的肝星状细胞作用不同的时间,细胞增殖检测采用SRB法,细胞培养液中细胞因子的检测采用ELISA法,NF-kB、IkB含量采用Western Blot法检测.结果:复方保肝宁可显著抑制HSC的增值、降低IkB的磷酸化及NF-kB的表达,明显降低HSC分泌IL-6的水平(P<0.01).结论:中药复方保肝宁对体外培养HSC内NF-kB、IkB表达有抑制作用,可能是其抗肝纤维化的机制之一.