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2013-2014年季节性流行性感冒疫苗免疫血清针对我国流行株的抗体水平分析
目的 分析季节性流行性感冒(流感)疫苗免疫血清针对我国流行株的抗体水平及我国流行株与疫苗株的匹配性.方法 采集不同年龄组人群疫苗接种前后的血清,利用流感流行株和疫苗株作为病毒抗原,应用血凝抑制试验(HI)方法对血清进行检测.结果 三价流感疫苗对我国A(H1N1) Pdm09亚型流行株产生的抗体平均几何滴度(GMT)低于针对疫苗株病毒的GMT,血清抗体滴度＞40的比例为57.0％ ～63.3％;对我国A(H3N2)亚型流行株产生的GMT与针对疫苗株病毒的GMT类似,血清抗体滴度超过40的比例为57.6％ ～ 63.0％;对B型流行株产生的血清抗体GMT低于针对疫苗株的GMT,不过超过了疫苗株抗体GMT的50％.不同年龄组的血清抗体反应不同,成年组相对较高.结论 2013-2014年季节性流感疫苗与同期流行的A(H1N1) Pdm09亚型流感病毒和B型流行株Yamagata系流感病毒较为匹配;H3N2亚型疫苗与流行株的匹配性较低,有可能会导致疫苗的保护效果降低.
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柯萨奇病毒A组16型多克隆抗体的制备及其在检定中的应用
目的 评价CV A16 K168免疫血清对CV A16不同毒株的中和抗体效价,确定完全中和不同病毒量所需的低血清量,为CV A16疫苗毒种检定中的鉴别试验和病毒外源因子检查提供参考.方法 将CV-A16病毒抗原辅以弗氏佐剂以皮下多点注射方式免疫新西兰大白兔,多次免疫后取血清,采用微量细胞病变法进行中和抗体效价检测和对15株不同CV-A16毒株的中和效价检测,并用CV A16 4V和CV-A16-10R两个毒株分析中和不同量病毒所需的抗体量.结果 浓缩抗原作为免疫原获得的兔抗CV-A16血清中和抗体效价可达1∶2 048;该免疫血清对15株CV-A16不同毒株的几何平均滴度(genomic mean titer,GMT)为1∶3 118;完全中和7.5 lgCCID50/ml CV A16病毒所需的低血清量为128 U,当病毒量在4.0～7.0 lgCCID50/ml时,完全中和所需的低血清量为48 U,当病毒量低于4.0 lgCCID50/ml时,1U的血清即可完全中和本病毒.结论 CV-A16-K168株作为免疫原可获得高效价的抗血清;用不同毒株检测得到的抗体效价存在差异;完全中和病毒所需的低血清量与病毒量呈正相关;病毒量与测得的血清中和效价呈负相关.
关键词： 柯萨奇病毒A组16型 免疫血清 中和能力 疫苗检定 -
青田县狂犬病防制知识知晓率调查
狂犬病是一种致命性传染性疾病,一旦确诊就意味着死亡.然而,狂犬病可以预防,即使因感染动物咬、舔或抓伤而导致狂犬病毒暴露,仍然可以经合理的局部伤口处理和有效的疫苗接种预防疾病发作,同时应用狂犬免疫球蛋白或狂犬免疫血清[1].为了解青田县广大群众对狂犬病防制知识的知晓情况,以便为今后的防制工作提供科学依据,我们于 2006 年 12 月份组织专业人员对本县群众进行狂犬病防制知识知晓率调查.现将调查结果报告如下.
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肾综合征出血热病毒感染模型动物的实验研究
肾综合征出血热(HFRS)临床症状复杂、具有特殊经过.研究表明,该病发病机制与免疫病理有关,存在明显的免疫功能紊乱[1].我们建立成鼠动物模型,研究抗体对小鼠感染汉坦病毒(HV)过程的影响.发现小鼠感染HV前、后被动输入小剂量的免疫血清,增强了HV的感染力,导致小鼠早死,现报道如下.
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三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统的建立及评价
目的 建立三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统,并评价其在检测HPV九价疫苗免疫血清免疫原性的应用.方法 分别选取红色、绿色和蓝色荧光蛋白的质粒N31-MCHREEY、N31-EGFP和N31-mTagBFP构建HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒,利用双抗夹心法和病毒半数组织培养感染剂量法检测HPV假病毒浓度和感染滴度;利用单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒,检测HPV九价疫苗免疫小鼠血清的中和滴度,以验证三色混合荧光HPV假病毒系统的准确性;采用单色荧光和三色混合荧光HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒系统检测HPV九价疫苗免疫食蟹猴血清的中和滴度,判断其是否可应用于HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测.结果 含有绿色、红色和蓝色荧光质粒的HPV16型假病毒的浓度为5～6μg/ml,HPV6/11/18/31/33/45/52/58的三色混合荧光假病毒浓度为1～3μg/ml.获得了分别含有EGFP、Mcherry和mTagBFP报告基因的9个型别的HPV假病毒,且满足中和检测需要;9个型别单色荧光HPV假病毒的滴度值均在1×104～1×105之间,即它们具有相似的感染滴度.检测HPV九价疫苗免疫的小鼠血清时,单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒系统所得中和滴度值差异均无统计学意义(P值均>0.05);检测HPV九价疫苗免疫的食蟹猴血清时,单色荧光与三色混合荧光A、B和C组HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒所得中和滴度值差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论 成功地建立了三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统;验证其与单色荧光HPV假病毒系统具有一致性;证实其可应用于检测HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测中.
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疟原虫配子体蛋白Pys48核酸疫苗的构建与免疫活性观测
为探讨约氏疟原虫配子体蛋白Pys48核酸疫苗的免疫效果及其效应,以约氏疟原虫Pys48全基因序列克隆和真核表达载体pcDNA3.1+为基础获得核酸重组质粒,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中特异性抗体水平,并通过IFA检测疫苗的免疫活性以及免疫血清对有性阶段虫体发育的阻断效应.测序结果和酶切鉴定均证实构建的质粒为Pys48全基因插入质粒.ELISA结果显示疫苗免疫小鼠血清特异性抗体滴度明显高于对照组;IFA结果显示免疫血清能够明显阻断配子体向合子与动合子的发育,并且其传播阻断效应与免疫血清呈剂量依赖性关系.实验表明,真核表达载体pcDNA3.1+表达的Pys48核酸疫苗具有良好的免疫原性,其免疫血清可显著抑制有性阶段原虫的进一步发育.
关键词： 约氏疟原虫 Pys48 核酸疫苗 免疫血清 传播阻断 -
疟疾传播阻断疫苗Pys25重组蛋白免疫活性的实验研究
为探讨约氏疟原虫传播阻断疫苗Pys25重组蛋白的免疫效果及其效应,我们以酵母菌表达的Pys25重组蛋白皮下免疫DBA/2小鼠,采用ELISA检测免疫后不同时间小鼠血清中的特异性抗体水平,并通过IFA观察免疫血清对有性阶段虫体发育的阻断效应.初次免疫后2周,小鼠血清中特异性IgG抗体水平开始升高,并于加强免疫后2周达到峰值;感染血液与免疫血清共同培养后,配子体向合子和动合子的发育明显受阻,并且其传播阻断效应与免疫血清呈剂量依赖性.实验表明,酵母菌表达的Pys25重组蛋白具有良好的免疫原性,其免疫血清可显著抑制有性阶段原虫的进一步发育.
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SjAWMAg免疫血清和吡喹酮联用体内杀不同发育期血吸虫的实验研究
目的观察日本血吸虫成虫表膜抗原(SjAWMAg)免疫血清与吡喹酮合用对不同发育期血吸虫的杀虫效果,探讨体液免疫在吡喹酮杀虫中的作用. 方法提取SjAWMAg,并用SDS-PAGE对其进行鉴定,制备高滴度(1∶25 600)SjAWMAg抗血清,采用Western-blot分析该血清与肺期童虫、肝期童虫及成虫抗原的反应性;将SjAWMAg抗血清与吡喹酮合用治疗血吸虫感染后第2 d、第14 d和第35 d的小鼠,在感染后第49 d剖杀小鼠收获虫体,计算减虫率和减卵率.结果 Western-blot分析表明,SjAWMAg抗血清与肺期及肝期童虫抗原存在交叉反应; 联合用药的3个治疗组(感染2、14、35 d)与单用吡喹酮组比较杀虫作用均有显著提高,减虫率分别提高了38.79%、29.80%和46.82%,其中以感染35 d治疗组提高显著;减卵率分别提高了62.04%,42.78%和29.81%,以感染2 d治疗组更为显著.结论抗SjAWMAg多克隆抗体与吡喹酮联合使用,均可提高吡喹酮对不同发育期血吸虫的杀灭效果,揭示体液免疫在吡喹酮杀血吸虫过程中具有重要作用,同时提示这种联合用药可能解决单用吡喹酮治疗血吸虫早期感染效果不佳的难题.
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鼠疫免疫血清制备及抗体效价稳定性的研究
目的探讨鼠疫弱毒菌株免疫家兔制备高效价抗鼠疫免疫血清的方法,及免疫血清冷冻保存时间对其效价的影响.方法(1)用鼠疫弱毒菌株37℃48 h培养物制成10亿/ml菌悬液,以不同的免疫途径分别接种被试动物4～6次,放血分离血清.(2)分别测定冷冻保存1、3、6、12、18个月的抗血清菌凝效价,判断其效价稳定性.结果(1)静脉全程免疫获得的免疫血清菌凝效价,明显高于多途径免疫获得的免疫血清,平均高2个滴度.(2)免疫血清的效价随着保存时间的延长而有所下降.但1年内下降不超过2个滴度.结论鼠疫弱毒菌株的静脉全程免疫可获得高效价的免疫血清,鼠疫免疫血清保存1年菌凝效价相对稳定.
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回输转染饰胶蛋白聚糖基因的肾系膜细胞对大鼠抗thy-1血清性肾炎的拮抗作用
目的以转染饰胶蛋白聚糖(decorin)基因的肾系膜细胞(MsC)为载体,经肾动脉回输入抗thy-1血清性肾炎大鼠肾小球,观察其存活情况及对模型大鼠肾小球病变的影响及意义.方法用脂质体介导法将载有目的基因(decorin)片段转入正常MsC株而获得阳性表达之细胞克隆;经尾静脉注射兔抗大鼠thy-1血清(ATS)复制其抗thy-1系膜增生性肾炎模型;经左肾动脉将转基因MsC回输入thy-1肾炎大鼠肾小球,并经该鼠MsC原代培养、BrdU和decorin蛋白免疫组织化学染色结合图像分析观察其生存情况;应用转化生长因子β1(TGF-β1)、纤连蛋白和Ⅳ型胶原免疫组织化学结合图像分析研究对thy-1系膜增生性肾炎动物模型肾小球病变的影响.结果经制备兔抗大鼠ATS,将其从尾静脉注入大鼠体内成功复制thy-1系膜增生性肾炎模型.经左肾动脉直接注入转染decorin基因的MsC克隆(D-A6),经原代培养证实其生长活跃,用免疫组织化学法发现其细胞核和细胞质均可分别表达BrdU和decorin蛋白.与未经注射对侧肾相比,回输侧肾的肾小球TGF-β1、纤连蛋白和Ⅳ型胶原的表达均降低,分别为TGF-β1 4 d时P<0.05和纤连蛋白、Ⅳ型胶原1～2 d时P<0.01.结论通过肾动脉直接输入法将转染decorin基因的细胞克隆回输入大鼠抗thy-1血清性肾炎肾小球内,并观察到对病变肾小球的拮抗作用,这为肾小球肾炎动物模型的基因治疗提供实验依据.
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幽门螺杆菌免疫兔血清抗体特异性分析
对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)抗原、抗体的研究是Hp分型、检测及疫苗开发的基础.Hp免疫血清的制备已成为常规技术,但血清制备过程中的各种因素均可能影响免疫血清的抗体谱,从而引起同类研究间因所用Hp抗体不同导致的结果的差异.本研究对Hp全菌免疫的兔血清抗体谱加以分析,讨论坳免疫血清制备中存在的一些问题和应对方法.
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兔免疫血清特异性IgG的初步分离纯化的教学实验设计
目的 将血清特异性IgG的分离纯化与纯度鉴定实验用于医学院本科实验教学.方法 设计家兔特异性免疫血清经硫酸铵盐析,再通过Sephedex G-25凝胶过滤层析,将分离前后的样品分别配制成相同蛋白浓度,分别进行玻片凝集试验和试管凝集试验.结果 玻片凝集法分离后的样品凝集现象强于分离前;试管凝集法分离后的样品凝集效价大于分离前.结论 成功得到初步分离纯化的特异性IgG.实验操作较为简便,结果稳定,再现性好.通过本实验学生能更好地理解免疫球蛋白的制备、分离纯化的基本方法和过程.
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检测烟曲霉菌GM抗原生物素-亲和素-夹心酶联免疫吸附试验法的建立
本研究用重组烟曲霉半乳糖甘露聚糖(AFMP1),制备免疫血清,建立一种以生物素-亲和素(BA)系统为基础的夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,快速检测烟曲霉GM抗原[1].
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双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测粉尘螨2组变应原方法的建立
尘螨是常见、主要的过敏性疾病变应原[1].螨体中主要的致敏成分是1组和2组变应原(Der 1、Der 2).酶联免疫吸附测定(ELISA)是检测尘螨变应原含量应用广泛的方法,但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道.本研究用重组粉尘螨2组Der f 2(rDer f 2),制备免疫血清,建立一种以辣根过氧化物酶系统为基础的双抗体夹心ELISA,以快速检测Derf 2,现报告如下.
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幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB的表达和免疫学活性
目的:构建表达幽门螺杆菌(H pylori)融合蛋白HspA-UreB的重组表达质粒,并研究其免疫学活性.方法:定向克隆方法将郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA和ureB基因融合连接入原核表达载体pET30(a),构建重组表达质粒pET-HU27.该质粒转化大肠杆菌BL21后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析融合蛋白HspA-UreB表达情况.Ni2+柱亲和层析纯化融合蛋白,与小鼠免疫血清进行Western blot分析,检测融合蛋白的免疫反应性.结果:特异PCR法与质粒酶切鉴定证实重组表达质粒pETHU27构建成功.SDS-PAGE分析显示在82.1 KDa处出现特异蛋白带,占菌体总蛋白的21%,亲和层析法获得纯度为91%的纯化融合蛋白,经免疫小鼠制备的血清可以识别该融合蛋白.结论:成功构建表达H pylori HspA-UreB融合蛋白的重组表达质粒,表达的融合蛋白具有良好的免疫反应性.
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不同血清型空肠弯曲菌免疫大鼠的血清及单个核细胞转移诱发周围神经病变的比较研究
目的观察不同菌株空肠弯曲菌(CJ)免疫大鼠的血清及单个核细胞(PBMC)对周围神经致病力的差异,从而进一步明确CJ不同菌株与格林-巴利综合征(GBS)的关系.方法分别将CJ-Pen19、Pen43两种菌株免疫大鼠的血清及PBMC转移注射到健康大鼠坐骨神经外膜下,7 d后作神经原纤维分离及半薄切片甲苯氨蓝染色观察神经病变率及病理类型,对两组结果进行比较.结果 (1) 免疫血清组:CJ-Pen19免疫血清诱发100%的坐骨神经发生严重病变,其原纤维病变率高达87%(其中轴索变性75%,髓鞘脱失12%);而Pen43免疫血清组仅诱发50%坐骨神经病变,且病变程度较轻(原纤维病变率为27.1%,包括22.8%轴索变性和4.3%髓鞘脱失),病变率明显低于Pen19组(χ2=743.8, P<0.01);(2) PBMC组:CJ-Pen19和Pen43两组比较,在相应抗原刺激下的PBMC诱发的坐骨神经病变率依次为30%、20%(χ2=0.27, P>0.05),其轴索变性率为8.0%、8.2%(χ2=0.04, P>0.05),髓鞘脱失率为9.0%、11.8%(χ2=5.84, P<0.05);植物凝集素(PHA)刺激的PBMC诱发40%和30%的坐骨神经病变(χ2=0.22, P>0.05),其轴索变性率分别为21.0%、21.3%(χ2=0.02,P>0.05);髓鞘脱失率为38.3%、44.7%(χ2=6.33, P<0.05).结论 (1) CJ相关的周围神经病变发生与CJ菌株血清型有关;(2) CJ免疫血清诱发坐骨神经发生严重轴索变性,而PBMC则同时引起轴索变性和髓鞘脱失.
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卵巢癌患者血清与腹水HA含量检测的临床意义
目的:研究卵巢癌患者血清与腹水透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量变化及临床意义.方法:采用放射免疫法测定38例卵巢癌患者及42例对照组血清术前及术后HA含量,并测定其中22例恶性肿瘤腹水HA含量.结果:恶性卵巢癌组术前血清HA含量显著高于对照组及良性肿瘤组,P=0.003,术后明显下降,手术前后血清HA含量差异有统计学意义,P=0.004;卵巢癌患者低度分化组血清HA含量显著高于中度及高度分化组,P=0.006,腹水HA含量显著高于血清,P=0.008,两者之间呈显著正相关,r=0.82,P=0.030,淋巴结转移组血清HA含量显著高于无淋巴结转移组,P=0.002.结论:HA与肿瘤的生物学特性密切相关,其血清及腹水含量对于病情判断及监测具有重要的临床意义.
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润燥止痒胶囊联合甘草酸二铵治疗面部激素依赖性皮炎患者的疗效及相关免疫学分析
目的 探讨润燥止痒胶囊联合甘草酸二铵治疗方案对面部激素依赖性皮炎(facial corticosteroid addictive dermatitis)患者免疫水平的影响.方法 本研究组选择面部激素依赖性皮炎患者68例,采用润燥止痒胶囊口服(4片/次,3次/d)联合甘草酸二铵静脉滴注(150 mg/次,1次/d),在此基础上,3％硼酸溶液冷湿敷面部,每次15～30 min,连续治疗6周为1个疗程,治疗前、2周、4周后对机体免疫球蛋白水平进行检测,并对临床效果进行评估分析.结果 治疗1个疗程后,患者症状评分较治疗前明显降低(t=4.73,P＜0.01),临床总有效率为92.65％:治疗后血清白细胞介素(interleukin-4,IL-4)水平呈下降趋势,4周后与治疗前相比较明显降低(t=9.81,P＜0.05),血清总免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)水平明显降低(t=3.89,P＜0.05),IgG、IgA、IgM与治疗前相比较均具有统计学意义(P＜0.01).结论 润燥止瘁胶囊联合甘草酸二铵治疗面部激素依赖性皮炎,疗效满意,其机制可能与机体免疫调节有关.
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抗蛇毒免疫球蛋白药物研发的现状和策略
抗蛇毒免疫球蛋白被公认为是目前治疗毒蛇咬伤有效的药物.全世界绝大多数抗蛇毒免疫球蛋白来源的主要途径是高免马匹血浆中多克隆抗体的分离.本文就抗蛇毒免疫球蛋白药物研发的历史和现状进行归纳,并针对此类药物在生产及研发过程中的关键环节,如免疫球蛋白lgG及其片段分子特性的考虑,免疫原的选择和制备、免疫程序优化和蛋白分离纯化等方面进行简要综述,以期为抗蛇毒药物的研发和生产提供参考和借鉴.
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生物制品的历史回顾 --为2000年版中国药典出版
本文回顾六版中国药典收载生物制品品目,叙述了生物制品定义沿革、历程及其对人民健康事业的特殊意义,并对今后的发展提出了建议.
