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浅析免疫检测技术在食品检验中的应用
免疫检测技术的应用原理
免疫学是一门以抗原抗体的特异性识别与结合反应为基础的学科,其中,把能够对动物机体中的免疫系统产生刺激作用并使其产生免疫效应的物质叫做抗原,免疫效应的结果就是促进淋巴细胞和抗体地生成。对于抗原物质来说,应该具备的特性就是高分子量,异物性以及复杂的分子结构。食品或者食物中的酶,核酸,蛋白质,多糖等均属于优质的抗原,将像药物残留,真菌毒素,激素等小分子物质与蛋白质等大分子载体进行相互结合,就能够成功制成人工性质的抗原。由此看来,食品中近似所有的物质能够作为抗原来使用,当食品中的抗体与抗原产生特异性结合时,就能精确地对所需检测物进行定量定性的分析与测定。 -
《分子佐剂C3d增强hCG-β基因避孕疫苗Th2型体液免疫效应》通过专家鉴定
目前,hCG疫苗研制与应用已取得进展,但其免疫原性弱、体内存留时间短等问题仍待解决.复旦大学附属妇产科研究所于2000年6月~2002年12月,将分子佐剂C3d引入基因避孕疫苗,构建了pCMV4-hCG β-C3d和pCDNA3-hCG β-C3d表达质粒并转染了真核细胞,成功表达了hCG β-C3d融合蛋白.
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关于免疫接种的探讨
免疫接种用人工方法将免疫原或免疫效应物质输入到机体内,使机体通过人工自动免疫或人工被动免疫的方法获得预防某种传染病的能力.计划免疫工作是贯彻以预防为主的卫生工作方针,控制以致终消除一些相应传染病的根本措施,是我们整个卫生工作的一项重要任务,它既关系到物质文明建设,又关系到精神文明建设,在预防传染病的各种手段中,免疫预防是一种有效的手段,在免疫接种过程中,当机体接受疫苗刺激后可以产生一系列的免疫反应,如果剂量过小,则不足以调动机体的免疫反应,但剂量过大也可产生免疫麻痹,因此要获得满意的免疫力,必须要有足够的抗原刺激剂量,在适量的情况下,才可产生大量的抗体,预防接种时,应根据各年龄组所规定的剂量进行接种,任意减少或增加,剂量都会影响免疫效果.
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茯苓多糖的免疫效应和抗肿瘤作用研究进展
茯苓多糖抗肿瘤机制具有多靶点,多层次,多途径的优势,临床的开发和应用具有广阔的前景;茯苓多糖不但具有提高机体免疫监视清除功能,增强机体对肿瘤细胞的杀伤能力,还可以打破机体免疫耐受,逆转肿瘤细胞免疫逃逸,增强机体的抗肿瘤免疫效能;现对近几年的国内外关于茯苓多糖免疫效应和抗肿瘤方面的研究进行综述,深入研究其药理作用,为其成为临床抗肿瘤新药奠定理论基础。
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重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-TB10.4的免疫效应
目的 将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠,研究其免疫效应,为结核病新疫苗的研发提供依据.方法 将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒,以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组,构建重组结核病疫苗rBCG-12p70-TB10.4 (rBCG-IT).将此重组卡介苗免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后3、6、9和12周,用间接ELISA检测特异性抗体滴度水平,XTT检测脾细胞增值反应,流式细胞仪检测脾CD4+T、CD8+T细胞亚型的比例,ELISA试剂盒检测细胞因子的诱生.结果 在免疫后3~12周,rBCG-IT组脾细胞增殖反应均明显强于其他各组(P<0.01),该组IFN-γ诱生量及CD4+T细胞比例均显著高于rBCG-I组、rBCG-T组及BCG组(P<0.01).IgG2a/IgG1比值在免疫后各时间点的变化趋势提示rBCG-IT可诱导Th1型细胞免疫应答.结论 重组疫苗rBCG-IT可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的特异性细胞免疫应答,可对其免疫保护作用进行深入研究.
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二硝基氟苯修饰的肿瘤疫苗可增强外周血单个核细胞体外杀伤人乳腺癌细胞
抗肿瘤免疫治疗是一种重要的癌症辅助治疗手段,其特点是毒副反应较小,患者耐受性好,并能在相当程度上改善肿瘤的预后.本研究是应用一种小分子半抗原二硝基氟苯(1)NP)修饰细胞瘤苗(TCV),评价该瘤苗是否会增强人淋巴细胞对人乳腺痛(MCF7)和人肺癌(H23)细胞的杀伤效应.此外,我们还把DNP瘤苗修饰法与另一种临床常用的瘤苗修饰法,即应用新城疫病毒Ulster株(NDV Ulster.)的修饰法,进行了抗肿瘤免疫效应方面的比较.
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甲型肝炎灭活疫苗(L-8株)口服及腹腔注射Bal b/c小鼠的免疫反应评价
目的比较评价甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(L-8株)不同途径接种Bal b/c小鼠所诱导产生的免疫效应.方法将320EU/0.5ml的实验疫苗1次口服及腹腔注射免疫实验动物,于2周、4周时收集血液样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测抗体反应,同时动态检测免疫小鼠外周血T淋巴细胞亚群及肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ.结果不论是腹腔注射或是口服免疫均能诱导产生良好有效的体液免疫效应.腹腔免疫后CD+4T细胞百分比轻微下降,而CD+8T细胞百分比上升趋势及幅度明显,CD+4/CD+8比值明显下降;而口服免疫小鼠外周血CD+4T细胞百分比持续上升,CD+8T细胞百分比亦同步升高,两者上升幅度基本一致,CD+4/CD+8比值无明显改变.另外,两种途径免疫接种均可诱导产生高滴度的内源性IFN-γ.结论有必要对甲肝灭活疫苗口服免疫的机制及其开发利用作进一步的研究.
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肿瘤抗原活化T细胞体外模型的建立及其免疫效应研究
目的 建立体外肿瘤抗原活化 T 细胞模型,研究活化后 T细胞的功能特点与分化方向.方法 将肝癌 BEL-7402 细胞与健康人外周血单个核细胞(PBMC) 和协同刺激分子抗 CD3、CD28 单抗共培养 (初次刺激组),或与经肝癌细胞刺激的 PBMC 共培养 (再次刺激组),共培养时间分别为 24、48、72 h.另设靶细胞对照组和 PBMC 对照组.各组实验均设 6 孔.以流式细胞仪分析 PBMC 经肝癌细胞刺激后 CD45RO+T 细胞比例变化;MTT 法检测活化 T 细胞对肝癌细胞的杀伤率:双抗体夹心 ELISA 法检测活化 T 细胞 IFN-γ和 IL-4 分泌水平;流式细胞仪分析 T 细胞表面 Fas 配体表达和 T 细胞受体 (TCR)VB 亚家族表达水平,并比较初次刺激组与再次刺激组 T 细胞免疫效应的差异.结果 健康人 PBMC 在肿瘤抗原和协同刺激分子作用下,CD45RO+T 细胞比例逐渐上升,共培养 72 h 时为 (16.1±0.9)%,明显高于 PBMC 对照组[(2.4±0.3)%,P<0.05].活化 T 细胞对肝癌细胞的杀伤率随共培养时间的延长而增大[24h为(28.4±6.7)%、48h为(60.4±6.2)%、72h为 (78.0±9.3)%];IFN-γ分泌水平升高,共培养 48h 时为(932±117)ng/L,明显高于 PBMC 对照组[(157±30)ng/L,P<0.05];T 细胞表面 FasL 表达增加至 (8.1±1.8)%,明显高于 PBMC 对照组[(0.5±0.2)%,P<0.01];肿瘤抗原刺激后,TCR Vβ的表达水平与 PBMC 对照组相比有所增加.再次刺激组 CD45RO+T 细胞比例、对肝癌细胞的杀伤率、IFN-γ分泌水平及 FasL 表达水平均明显高于初次刺激组.结论 成功建立了体外肿瘤抗原活化 T 细胞模型.活化T细胞具有明显的免疫效应,并向 Th1 和 Tc1 方向分化:再次接触相同抗原时,其免疫效应更为迅速、强烈,表现出一定的记忆特性.
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基因工程抗体亲和力成熟研究进展
自 1975 年,Kohler 创建杂交瘤技术并成功制备单克隆抗体以来,人们已研制出数以千计的单克隆抗体.单克隆抗体因其高度的靶向特异性已经成为科学研究,疾病诊断,药物靶向治疗等不可或缺的工具.由于杂交瘤技术制备单克隆抗体为鼠源性,在人体应用时易发生免疫排斥反应,难以有效激发人体免疫效应,而人源的基因工程抗体很好地解决了这一问题.借助 DNA 重组和蛋白质工程技术,人们可以获得人源单克隆抗体,并可在基因水平对抗体进行拼接、修饰、重新组装成为一种新型抗体.
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E型沙眼衣原体主外膜蛋白DNA疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫诱导出的免疫效应
目的 研究沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)DNA疫苗和重组蛋白(rMOMP)疫苗联合免疫小鼠诱导出的免疫效应.方法 3~4周BALB/c雌鼠60只,分5组,每组12只,于第0、2、4周通过双侧股四头肌肌注免疫相应的疫苗.通过血清IgG抗体和IFN-γ含量、阴道冲洗液sIgA抗体含量、脾淋巴细胞增殖指数、迟发型超敏反应、阴道脱落细胞种植等指标进行小鼠免疫效应的测定.结果 DNA蛋白联合组小鼠血清IgG抗体水平A405值为0.629±0.052;sIgA,A450值为0.379±0.052;脾淋巴细胞增殖指数为5.682±0.484;淋巴细胞培养上清液中IFN-γ含量为(1265±128)ps/ml.DNA蛋白联合组小鼠的各项指标均好于EB阳性对照组除外的其他组(P<0.01).结论 沙眼衣原体DNA疫苗和蛋白疫苗联合免疫可以增强免疫保护效应.
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CD80作为分子佐剂增强HPV11 E7免疫效果的观察
构建的人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)11型E7基因DNA真核表达质粒,在真核细胞获得有效表达.为增强其作为尖锐湿疣治疗性疫苗的免疫效果,现将E7基因与协同刺激分子CD80(所-1)进行连接重组,构建HPV11E7-CD80嵌合DNA真核表达质粒,并将其免疫小鼠,研究其诱导的免疫效应.
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氩氦刀冻融的癌细胞激发骨髓树突状细胞的免疫效应
氩氦刀冻融可以杀灭肿瘤细胞,也是一种免疫治疗方法.抗原呈递能力强的树突状细胞(DCs)是机体免疫应答的重要启动和调节因素,经肿瘤抗原致敏的DCs通过细胞毒T淋巴细胞(CTLs)有效激发特异性抗瘤免疫.本实验通过体外观察氩氦刀冻融的肺癌细胞对人骨髓DCs诱生的免疫效应.
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光动力学疗法的免疫效应机制研究进展
光动力学疗法已经在临床上用于治疗许多肿瘤性和非肿瘤性疾病.目前的研究结果表明光动力效应与炎症和免疫反应密切相关,它在疾病的长期控制中发挥着重要作用.该效应对免疫系统的影响非常复杂,它既能促进又能抑制免疫反应,其优势效应的产生与许多因素有关.本文阐述了光动力学疗法对免疫系统的影响,并探讨了它在疾病治疗中的重要意义.
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热消融治疗肝细胞性肝癌的抗肿瘤免疫效应问题
1971年,Goldenberg等[1]对人结肠癌小鼠皮下种植模型进行局部热消融,发现肿瘤被破坏后远处的转移灶缩小甚至消失,热消融这种除了直接杀瘤效果之外伴发的所谓"异位效应"启发人们关注到热消融治疗和宿主免疫反应之间的关系.近年来随着影像引导热消融治疗肝细胞性肝癌(HCC)的广泛开展,越来越多的研究在探讨热消融能否诱导抗肿瘤免疫反应.这一课题研究极具科学意义和临床价值,因为众所周知,迄今为止对HCC不论采用什么治疗方法都无法避免不断复发的倾向,对这一治疗上大的难题,有希望突破困境的很可能就是免疫治疗.
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慢性HBV感染者、健康人树突状细胞经HBsAg活化后的免疫效应差异
目的:研究慢性HBV感染者、健康人外周血树突状细胞(dendritic cells,DC)经HBsAg活化后的免疫功能的差异.方法:从慢性HBV感染者、健康人外周血中培养扩增DC和CIK,在DC成熟前加入纯的HBsAg刺激,并再与同一来源的CIK共同培养.用流式细胞仪检测DC、CIK表型,用ELISA法检测DC、CIK共培养上清液中的IL-12浓度,用CCK-8比色法测定DC诱导CIK对HepG2.2.15细胞的杀伤活性.结果:未经HBsAg致敏的健康人DC表面标志CDla、CD80及CD83明显高于慢性HBV感染者(P<0.05);经HBsAg致敏的健康人DC表面标志均高于慢性HBV感染者,差异具有统计学意义(P<0.01);慢性HBV感染者经HBsAg致敏的DC表面标志与未经HBsAg致敏无显著性差异.CIK细胞CD3、CD8、CD3、CD56的双阳性表达率,健康人HBsAg致敏者明显高于慢性HBV感染者及未经HBsAg致敏的健康人(P<0.01,P<0.05);慢性HBV感染组HBsAg致敏与未经HBsAg致敏者比较无显著性差异(P>0.05).HBsAg致敏DC诱导CIK对HepG2.2.15细胞的杀伤率,健康人显著高于慢性HBV感染者(P<0.01).健康人HBsAg致敏DC、CIK共培养上清液中的IL-12浓度显著高于慢性HBV感染者(P<0.001);慢性HBV感染者HBsAg致敏与未经HBsAg致敏IL-12含量差异不显著(P>0.05).结论:慢性HBV感染者、健康人DC经HBsAg活化后对Hep G2.2.15细胞的免疫效应存在显著差异:健康人高于慢性HBV感染者.
关键词: 慢性乙型肝炎病毒感染者 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 免疫效应 -
HBcAg生物学特性研究进展
HBcAg存在于Dane颗粒的核心,是HBV的结构蛋白即病毒核壳蛋白,具有重要的生物学特性和临床病理意义.HBcAg由HBV基因组的C开放读码区(ORF)编码,具有高度免疫原性,对HBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要作用.血清HBcAg阳性可提供肝内HBV合成的信息,是病毒存在的直接标志.HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞,肝细胞溶解后HBcAg可直接释放入血,故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度.检测肝组织HBcAg有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向,推测慢性乙型肝炎的预后.血清和肝组织HBcAg检测具有多种实用价值,值得推荐.
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食管癌细胞RNA致敏树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫
目的:观察人食管癌细胞株RNA致敏的树突状细胞(DC)所诱导的特异性抗肿瘤免疫效应,探讨肿瘤细胞RNA直接致敏DC进行食管癌生物治疗的可能性.方法:食管癌细胞株T.Tn体外培养,提取RNA;正常人外周血,进行体外DC的培养扩增;食管癌RNA直接致敏DC,MTT法检测食管癌RNA活化DC所诱生的淋巴细胞对食管癌T.Tn、视网膜母细胞瘤SoRb-70的体外杀伤效应.结果:正常人外周血来源的DC,经食管癌T.Tn细胞株RNA直接致敏后,成功诱导特异性抗肿瘤免疫反应,T.Tn RNA组CTL在靶效比为20:1时对T.Tn,SoRb-70的杀伤率分别为85.8%、1.9%,而对照组对这两种细胞的杀伤率分别为1.0%和0.5%.结论:肿瘤RNA致敏DC可以诱导特异性抗肿瘤免疫,是一种有前景的食管癌治疗手段,有进一步研究的价值.
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实体肿瘤消融的免疫效应及联合免疫治疗的临床研究现状
随着医学的不断进步,消融作为一种实体肿瘤微创治疗技术,而大量应用于临床并获得较好疗效.肿瘤消融亦可对肿瘤微环境产生影响,从而为肿瘤特异性免疫识别提供一个良好的环境,而联合免疫治疗可进一步增强其抗肿瘤免疫效应,改善长期疗效.关于肿瘤消融对机体免疫功能的影响以及免疫联合治疗近年来成为研究的热点,在临床病例中的应用逐渐增加,本文重点针对实体肿瘤消融的免疫效应及联合免疫治疗的临床研究文献进行总结,分析其临床应用现状.
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抗炎因子白细胞介素-37与心血管疾病相关研究进展
白细胞介素-37(IL-37)也称IL-1F7。近年有很多关于IL-37的新发现,主要集中在其对免疫的调节作用和作用机制。IL-37一方面可抑制树突状细胞、TOLL样受体的作用,另一方面IL-37抑制炎症反应信号级联放大通路及重要炎症介质IL-18的作用,缓解炎症因子的释放,调节免疫效应。总而言之,发现IL-37的生物学作用研究结论较一致,但目前国内外对IL-37与心血管疾病的相关研究较少,缺乏动物实验报道,且现有的研究结果尚存重大分歧。本文对近年来新发现的抗炎因子白细胞介素-37(IL-37)的生物学功能和其与心血管疾病的相关研究进行的综述。
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恶性和结核性胸腔积液中CC趋化因子22与17的水平及其意义
胸腔积液是临床上常见的疾病或并发症,其免疫学机制尚未完全明了,炎性介质可能为其中的重要环节,CC趋化因子(CCL)22和17为细胞源性趋化介质,通过受体-配体途径动员表达相应趋化因子受体(CCR)的免疫细胞迁移,到达病变局部以发挥免疫效应.我们对恶性和结核性胸腔积液患者的胸腔积液及血清中CCL22和CCL17水平进行检测,以探讨其在胸腔积液发生中的免疫学意义.