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C3d3与hCGβ基因融合质粒对不同品系小鼠DNA免疫增强抗hCGβ体液免疫效应
目的 通过分子佐剂C3d3增强人绒毛膜促性腺激素(hCG)β基因疫苗在不同品系小鼠的体液免疫效应. 方法 分别用pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-hCGβ+pCMV4-C3d3联合免疫以辅助性T细胞(Th)2型优势的BALB/c小鼠和Th1型优势的C57BL/6小鼠,免疫剂量分别为5、10、50、100和500 pmol,同一剂量免疫两次、间隔3周.初次及加强免疫后每周采血,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清抗hCGβ抗体水平.硫氰酸钠洗脱法ELISA分析抗hCGβ抗血清亲和力. 结果 两种品系小鼠pCMV4-hCGβ-C3d3免疫产生抗hCGβ抗体的时间和效价均显著早(高)于pCMV4-hCGβ和联合免疫组.在50 pmol免疫剂量时,C3d3在两种品系小鼠呈现出强的佐剂活性,分别使hCGβ的免疫原性增强了400倍(BALB/c)和251倍(C57BL/6). pCMV4-hCGβ-C3d3组两个品系小鼠亲和力成熟较快. 结论 在Th2型及Th1型免疫优势的不同品系小鼠,分子佐剂C3d3均能增强hCGβ基因疫苗体液免疫效应.
关键词： 分子佐剂 C3d3 人绒毛膜促性腺激素β 基因疫苗 体液免疫 -
《分子佐剂C3d增强hCG-β基因避孕疫苗Th2型体液免疫效应》通过专家鉴定
目前,hCG疫苗研制与应用已取得进展,但其免疫原性弱、体内存留时间短等问题仍待解决.复旦大学附属妇产科研究所于2000年6月～2002年12月,将分子佐剂C3d引入基因避孕疫苗,构建了pCMV4-hCG β-C3d和pCDNA3-hCG β-C3d表达质粒并转染了真核细胞,成功表达了hCG β-C3d融合蛋白.
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CD80作为分子佐剂增强HPV11 E7免疫效果的观察
构建的人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)11型E7基因DNA真核表达质粒,在真核细胞获得有效表达.为增强其作为尖锐湿疣治疗性疫苗的免疫效果,现将E7基因与协同刺激分子CD80(所-1)进行连接重组,构建HPV11E7-CD80嵌合DNA真核表达质粒,并将其免疫小鼠,研究其诱导的免疫效应.
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IL-17作为分子佐剂增强HIV DNA疫苗细胞免疫应答的研究
目的 为了进一步增强HIV DNA疫苗的免疫反应,本研究将IL-17作为HIV DNA疫苗的分子佐剂免疫小鼠,旨在探讨IL-17对HIVDNA疫苗诱导体液和细胞免疫应答的影响.方法 将小鼠IL-17构建到真核表达载体,与HW-1膜蛋白DNA疫苗pGX-Env联合免疫BALB/c小鼠;分别在第0、2周进行免疫,在第4周检测T淋巴细胞增殖指数、抗-Env IgG、细胞因子表达水平和体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标.结果 IL-17能够增强HIV DNA疫苗的特定免疫反应.与单注射疫苗组相比,IL-17作为佐剂组的T细胞增殖、抗体水平和CD4~+T细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17的表达均无明显增强,但对CD8~+T细胞分泌IFN-γ的表达和体内CTL的效果影响明显(P<0.05).结论 IL-17作为分子佐剂不足以影响Th细胞分化,然而却能够增强特异性CD8~+T细胞中IFN-γ的表达,尤其是增强体内CTL反应.此结果为增强艾滋病DNA疫苗CD8~+T细胞活性和用于艾滋病的治疗提供了一个新的思路.
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补体C3d作为分子佐剂的研究进展
补体系统由30余种可溶性蛋白分子组成,是天然免疫系统的一部分.补体C3分子的裂解片段C3b、iC3b和C3d是连接天然免疫和获得性免疫的重要蛋白质分子[1].
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分子佐剂修饰的血管内皮生长因子融合蛋白疫苗抗肿瘤活性研究
目的 研究两段重复的热休克蛋白70(mHSP70) 407-426序列(2mHSP70407-426,M2)能否增强血管内皮生长因子(VEGF)融合蛋白疫苗抗肿瘤活性.方法 以加端PCR方式,将M2以柔性肽连接于hVEGF121突变体1的C末端,得到hVEGF121突变体2蛋白.用H22肝癌细胞构建荷瘤肝癌小鼠模型.24只小鼠按照体重随机分为3组:模型组,实验1组(hVEGF121突变体1蛋白80 μg)及实验2组(hVEGF121突变体2蛋白80μg).以酶联免疫吸附法检测免疫小鼠血清中的抗体水平,以脾淋巴细胞增殖实验检测免疫小鼠细胞免疫应答水平,以皮内肿瘤血管模型考察蛋白疫苗抗血管生成活性.结果 实验1组与实验2组的瘤重分别为(1.58±0.28),(1.17±0.25)g,与实验1组比较,实验2组差异有统计学意义(P＜0.05).实验1组与实验2组的小鼠免疫血清中抗-VEGF抗体分别为0.54±0.09,0.74±0.1,与实验1组比较,实验2组小鼠免疫血清中检测到更高滴度的抗-VEGF抗体,差异有统计学意义(P＜0.01).实验1组与实验2组的刺激脾淋巴细胞的增殖活性分别为0.26±0.03,0.36±0.04,与实验1组比较,实验2组疫苗免疫能够更有效地刺激脾淋巴细胞的增殖,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 M2作为分子佐剂可以有效增强VEGF融合蛋白疫苗的抗肿瘤活性.
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分子佐剂在DNA疫苗中的应用
如何增强和提高DNA疫苗的免疫效果是新一代DNA疫苗分子设计和研究的关键问题,其中之一就是应用分子佐剂来优化DNA疫苗.分子佐剂可将以基因方式传递的免疫刺激分子与DNA疫苗共免疫,在体内表达相应的蛋白,增强T、B细胞对疫苗成分的体液及细胞免疫应答.目前研究较多的分子佐剂有:细胞因子如干扰素(IFN)、白细胞介素2(IL-2)、IL-12、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等;共刺激分子如B7-2、CD40L等;补体佐剂如C3;免疫刺激序列如CpG、寡核苷酸(ODN)等.分子佐剂在体内与疫苗基因共表达,改善抗原的周边微环境,提高疫苗的免疫效果.因此,分子佐剂是目前DNA疫苗研究中的热点问题之一.
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分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗的体液免疫效应
目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性.方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ,在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化.分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALB/c与C57BL/6小鼠进行免疫,共免疫两次,间隔4周,ELISA测定血清中的抗体滴度,比较各组的免疫效果.结果:无论是BALB/c小鼠还是C57BL/6小鼠,hCGβ-C3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组.在BALB/c小鼠,初次和再次免疫结果显示,C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1 995倍.C57BL/6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALB/c小鼠,但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1 259倍.结论:通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性,在个性差异很大的不同品系小鼠,C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力.
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IL-18基因佐剂协同HSV-1 gB DNA疫苗免疫诱导的特异性免疫应答
目的:研究IL-18 cDNA协同单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B(gB)核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响.方法:利用pcDNA3载体分别构建HSV-1 gB和IL-18的真核表达质粒pgB和pIL-18,分pcDNA3、pgB和pgB+pIL-18三组,肌肉注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用ELISA检测特异性抗体滴度;利用3H-TdR掺入法进行T细胞特异性抗原刺激实验;耳廓肿胀实验检测迟发型超敏(DTH)反应.结果:与pgB单独免疫组相比,pIL-18的协同免疫可以显著增强ELISA特异性抗体滴度、T细胞增殖反应和DTH反应.结论:IL-18 cDNA的协同免疫可以显著提高pgB DNA疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫水平,增强核酸疫苗对机体的免疫保护作用.
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白细胞介素-18在DNA疫苗免疫中的佐剂效应
白细胞介素-18(IL-18)作为分子佐剂,可促进DNA疫苗的免疫效应.本文就近年来IL-18作为分子佐剂,应用于多种感染性疾病和肿瘤DNA疫苗的免疫研究进展作一综述.
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DNA疫苗和细胞凋亡
DNA疫苗的效力一直是免疫学家想要解决的问题,诱导细胞凋亡可以增强DNA疫苗的免疫原性,而抑制细胞凋亡则可以改进DNA疫苗的功能,此外,分子佐剂和细胞因子也可以增强对接种物的免疫应答.
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白细胞介素12在DNA疫苗中的分子佐剂效应
白细胞介素12(IL-12)作为分子佐剂,可促进或抑制DNA疫苗的免疫效果.本文就近年来IL-12作为分子佐剂应用于多种传染病和肿瘤DNA疫苗的研究进展作一综述.
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生殖器疱疹DNA疫苗加分子佐剂研究进展
DNA疫苗由于具有多种优点而受到人们高度重视,但在诱导免疫效应上还未尽如人意,因而妨碍了它们的实际应用.研究者一直探索应用分子佐剂来优化DNA疫苗.本文就近年来在生殖器疱疹DNA疫苗加分子佐剂方面的研究进展进行了综述.
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新型分子佐剂C3d
C3d片段是补体C3分子不能被蛋白酶再裂解但仍保持与抗原共价连接的小片段,除具有促进B细胞活化、增进抗体亲和性成熟、维持免疫记忆等功能外,近来发现C3d分子还具备增强B细胞的抗原递呈能力、降低B细胞的活化阈等分子佐剂作用,本文介绍了C3d分子的分子特征、生物学功能,并对C3d分子作为分子佐剂的机制及存在问题作一探讨.
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DNA免疫--研究工具还是实用方法?
2004年2月在伦敦肯辛顿召开了一次有关DNA疫苗的国际会议.来自科学界、工业界及管理层的代表出席了这次有益的论坛,此次会议不仅展望了DNA免疫的前景、探讨了目前的现状,而且还介绍了新的DNA接种技术、利用分子佐剂增强免疫应答的技术(如细菌毒素、细胞因子融合体、序列修饰、表位修饰等)以及采用初免-加强策略后获得的一些临床资料.此外,会议还讨论了裸DNA接种、DNA疫苗生产技术和经济方面的问题.
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DNA疫苗免疫增强效应研究进展
DNA疫苗技术近年来迅速发展,但当被实际应用于人体试验时免疫原性不足仍是其大的弱点.国内外科研工作者尝试了多种策略来解决这一问题,包括重组质粒载体的构建及编码抗原的基因优化,电穿孔疫苗免疫、接种方案优化、与能增强转染基因表达和疫苗诱导免疫的分子佐剂共免疫等.熟悉DNA疫苗的作用机制能更好地利用宿主天然免疫应答以增强疫苗的免疫原性.该综述总结了DNA疫苗免疫效应增强技术的新进展,以及这些进展对DNA疫苗未来发展方向可能产生的影响.
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免疫分子佐剂ctxB在pVAX1中的初步应用
目的 构建霍乱毒素B亚单位编码基因(ctxB)的真核表达质粒pVAX1-ctxB,并观察其在真核细胞中的蛋白表达情况.方法 利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1 -ctxB,通过脂质将其转染至CHO细胞中诱导蛋白表达,GM1 -ELISA法检测其蛋白表达产物.结果 重组质粒pVAX1-ctxB经酶切可得到与ctxB大小相同的片段,GM1 -ELISA法证实经转染的CHO细胞可分泌霍乱毒素B亚单位(ctxB)蛋白.结论 成功构建重组表达质粒pVAX1- ctxB,其蛋白表达产物具有ctxB蛋白活性,为下一步加强基因防龋疫苗效价奠定了基础.
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分子佐剂IL-17与IL-2对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI免疫效果的影响
目的 探讨分子佐剂IL-17、IL-2对铜绿假单胞菌(Pa)外膜蛋白OprI免疫效果的影响.方法 分别以IL-17、IL-2作为分子佐剂用Pa外膜蛋白OprI于第0、2、4周免疫雌性C57BL/6小鼠,同时设立单独的佐剂与蛋白对照组.末次免疫2周后,ELISA检测各组小鼠血清IgG、IgA以及IgG亚类水平;ELISA法检测小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17以及Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平;MTT法检测IL-17、IL-2分子佐剂对小鼠脾细胞增殖情况的影响,并以ConA作为阳性对照;末次免疫2周后Pa鼻内感染小鼠,感染后10d计算各组小鼠死亡率并取小鼠肺组织检测菌体载量.结果 ELISA结果显示,OprI-IL-17、OprI-IL-2组小鼠血清中IgG、IgA以及IgG亚类水平均显著高于各对照组(P＜0.05),且其中各实验组IgG2a/IgG1的比值均大于1;IL-17、IL-2佐剂能够显著提高小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17水平(P＜0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平则无显著差异(P＞0.05);此外,OprI-IL-17、OprI-IL-2组的淋巴细胞增殖为显著(P＜0.05);相较于各对照组,OprI-IL-17、OprI-IL-2组能够显著降低小鼠肺组织菌体载量以及小鼠死亡率(P＜0.05),保护效果显著提高.结论 IL-17、IL-2佐剂均能有效增强Pa外膜蛋白OprI的体液、细胞免疫水平以及抗感染保护作用.
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DNA疫苗的分子佐剂研究进展及其在鱼用疫苗中应用
DNA疫苗是一种能诱生机体产生免疫应答的新型疫苗,近年来成为一种新的研究热点,但存在免疫效果低的缺点,为优化DNA疫苗的免疫效果,人们开始研究一类新型的DNA疫苗分子佐剂.本文简述了当前DNA疫苗中几种常用的分子佐剂如细胞因子、CpG-ODN及其在鱼用疫苗中的应用.
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分子佐剂小鼠补体C3d基因的克隆与序列分析
目的构建C3d的真核表达质粒,以期将其作为分子佐剂,提高核酸疫苗的免疫效能.方法采用PCR技术扩增小鼠补体C3d基因(897 bp),并将其克隆至pGEM-T载体上; 经鉴定其DNA序列正确;再将其亚克隆至真核表达载体pVAX1上.结果经DNA测序证实了该克隆片段为小鼠补体C3d基因,可进一步用于基因表达和基因治疗的研究.结论构建了C3d真核表达质粒,为高效核酸疫苗的研究打下了良好的基础.
