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C3d在人体正常肝Glisson囊的表达:一种非免疫性/渗透性沉积
目的 探讨正常人肝汇管区Glisson囊中C3d沉积形成的原因和意义.方法 采用免疫组织化学方法对60例人体各年龄段的正常人肝组织标本进行补体与抗体标记,同时对部分标本进行C3d胶体金免疫电镜染色,其他器官及组织95例的C3d染色作为对照观察.结果 60例正常肝组织中50例(50/60,83.3%)见C3d沉积,主要见于Glisson囊,其次小动脉内膜、肝静脉外膜也有不同程度C3d沉积.C3d表达于20岁以上正常人较多,20岁及以下正常人次之,3岁及以下正常人无表达.免疫电镜显示C3d胶体金颗粒疏密不均地沉积于Glisson囊胶原纤维之间,无免疫沉积物伴随.40例脾脏组织中30例(30/40,75.0%)见C3d沉积,为脾包膜纤维层、脾小梁纤维鞘、小梁动脉和中央动脉的内膜.结论 C3d沉积于>3岁正常人的肝Glisson囊、脾小梁纤维鞘及肝脾小动脉内膜,是一种非免疫性、血浆渗出性沉积,属于正常的生理现象.应避免将这种沉积视为免疫复合物沉积或者体液免疫反应现象.
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C3d-P28增强乙型肝炎病毒特异性基因免疫效果的研究
目的观察补体C3d-P28对基因免疫的调节作用及其不同拷贝数对调节作用的影响,为增强基因免疫效果寻求新方法. 方法 PCR法获得补体C3d-P28编码基因并以头尾串连方式将1～4拷贝C3d-P28编码基因克隆至pVAON33,构建pVAON33-P28.[1～4]重组质粒,然后将HBV-preS2/S编码基因分别插入pVAON33和pVAON33-P28.[1～4]质粒获得pVAON33-S2/S和pVAON33-S2/S-P28.[1～4]重组质粒.肌肉注射各重组质粒DNA(每只100μg/100μl)初次免疫小鼠,并以pVAON33为对照;12周后皮下注射HBsAg蛋白加强免疫各组小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗-HBs-IgG. 结果 pVAON33-S2/S重组质粒免疫小鼠可诱导产生特异性抗-HBs-IgG,含不同拷贝C3d-P28编码基因的重组质粒可诱导更高的特异性抗体,其中pVAON33-S2/S-P28.4重组质粒诱导的抗体水平高(P＜0.01).蛋白加强免疫后,含C3d-P28编码基因重组质粒免疫组抗-HBs-IgG迅速上升,并明显高于pVAON33-S2/S重组质粒免疫组(P＜0.05),pVAON33-S2/S-P28.4重组质粒诱导的抗体仍维持高水平. 结论不同拷贝的C3d-P28能不同程度地增强HBV-preS2/S基因免疫诱导的特异性体液免疫及其蛋白加强后的回忆反应,其中4拷贝C3d-P28的增强作用较为显著.
关键词： 基因免疫 免疫调节 补体C3d 乙型肝炎病毒表面抗原 -
C3d-P28对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用
目的:观察补体C3d-P28对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用,为增强基因免疫效果寻求新方法.方法:将质粒pVAON33-S2/S质粒(仅含HBV-preS2/S编码基因)和pVAON33-S2/S-P28.4质粒(含HBV-preS2/S和4拷贝C3d-P28的编码基因)以肌肉注射法对BALB/C小鼠实施基因免疫(100 μg/100 μl/只),并以空载质粒为对照.定期采集免疫小鼠血清、ELISA法检测其中特异性抗HBs-IgG及其亚型的水平;免疫小鼠脾细胞经特异性抗原(HBsAg)刺激后,采用3H-TdR掺入法、半定量RT-PCR法、同位素释放法分别检测其特异性淋巴细胞增殖活性、IL-4和IFN-γ基因表达的水平、CTL杀伤活性.结果:pVAON33-S2/S-P28.4质粒基因免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性、抗HBs-IgG水平以及特异性CTL杀伤活性均明显高于pVAON33-S2/S质粒;C3d-P28未改变基因免疫诱导的抗HBs-IgG各亚型水平的格局,同时增强IgG1、IgG2a、IgG2b的水平;pVAON33-S2/S-P28.4质粒诱导的IL-4和IFN-γ的基因表达水平均明显高于pVAON33-S2/S质粒.结论:C3d-P28可在提高体液免疫应答的同时增强基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答.
关键词： 基因免疫 免疫调节 补体C3d 乙型肝炎病毒表面抗原 -
新型分子佐剂C3d
C3d片段是补体C3分子不能被蛋白酶再裂解但仍保持与抗原共价连接的小片段,除具有促进B细胞活化、增进抗体亲和性成熟、维持免疫记忆等功能外,近来发现C3d分子还具备增强B细胞的抗原递呈能力、降低B细胞的活化阈等分子佐剂作用,本文介绍了C3d分子的分子特征、生物学功能,并对C3d分子作为分子佐剂的机制及存在问题作一探讨.
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小儿肾病患者C3d与荷C3d-IC的测定
研究表明,各种急慢性肾病常存在有补体功能的异常.一方面补体系统可参与对免疫复合物的清除;另一方面还可通过形成膜攻击复合物,释放生物活性介质,诱发组织损伤[1.2].C3分子作为补体传统途径与替代途径的交汇点,在补体活化过程中起重要作用,其分解的小分子片段C3d共价结合到免疫复合物(immune complex,IC)分子上,被认为是炎症时活化补体的直接证据.本文对各类肾病患儿血清与尿液中的C3d与荷C3d-IC进行了测定,以探其在该类疾病发病中的意义,现报告如下.
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用石蜡切片行C3d、C4d免疫组化染色辅助诊断大疱性类天疱疮的意义
目的 探讨C3d、C4d免疫组化染色在石蜡包埋组织切片中辅助诊断大疱性类天疱疮的价值.方法 通过免疫组织化学SP法检测20例大疱性类天疱疮患者石蜡包埋组织切片中C3d、C4d的表达,并与家族性良性天疱疮、大疱性表皮松解症患者及正常皮肤进行对照.结果 20例大疱性类天疱疮患者石蜡包埋切片C3d、C4d真表皮交界基底膜处沉积率为95％(19/20),9例大疱性表皮松解症患者中真表皮交界基底膜处C3d、C4d阳性率0％(0/9),4例家族性慢性良性天疱疮患者基底膜带均为阴性.结论 石蜡包埋组织切片中,C3d、C4d免疫组化染色可以作为辅助诊断大疱性类天疱疮的方法之一.
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分子佐剂小鼠补体C3d基因的克隆与序列分析
目的构建C3d的真核表达质粒,以期将其作为分子佐剂,提高核酸疫苗的免疫效能.方法采用PCR技术扩增小鼠补体C3d基因(897 bp),并将其克隆至pGEM-T载体上; 经鉴定其DNA序列正确;再将其亚克隆至真核表达载体pVAX1上.结果经DNA测序证实了该克隆片段为小鼠补体C3d基因,可进一步用于基因表达和基因治疗的研究.结论构建了C3d真核表达质粒,为高效核酸疫苗的研究打下了良好的基础.
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C3d-P28增强乙肝病毒基因免疫诱导的特异性细胞免疫应答
目的: 研究补体C3d中P28分子对HBV基因免疫诱导的细胞免疫应答的调节作用, 为增强基因疫苗细胞免疫的效果寻求新方法.方法: 分别分离获取C3d-P28和HBV-preS2/S编码基因, 并克隆入真核表达载体pVAON33中, 构建相应重组质粒pVAON33-S2/S(仅含HBV-preS2/S编码基因)和pVAON33-S2/S-P28.4(含HBV-preS2/S和4拷贝C3d-P28的编码基因), 并以PCR、酶切和DNA序列测定进行鉴定. 以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施3次基因免疫(100 μg/100 μL*只), 间隔3 wk, 并以空质粒免疫小鼠作为对照.免疫小鼠脾细胞体外经HBsAg刺激后, 用3H-TdR掺入法和同位素释放法, 分别检测特异性淋巴细胞增殖和CTL杀伤活性.结果: pVAON33-S2/S和pVAON33-S2/S-P28.4免疫小鼠的脾细胞, 均显示较强的特异性增殖活性和CTL杀伤活性, 但后者显著强于前者(P<0.05). 结论: C3d-P28可增强HBV-preS2/S基因免疫诱导的特异性细胞免疫应答.
关键词： 基因免疫 细胞免疫应答 补体C3d 乙型肝炎病毒表面抗原 -
微柱凝胶技术在直接抗球蛋白试验中的应用
目的 通过微柱特异性凝胶和传统试管法在直接抗球蛋白试验中的比较,探讨确认微柱凝胶技术直接抗人球蛋白试验的可靠准确性.方法 采用试管法和微柱特异性胶试剂对56例血液标本进行直接抗球蛋白试验,微柱法阳性32例,试管法阳性30例.结果 微柱法直接抗球蛋白试验阳性:抗-IgG13例;抗-IgG,抗-IgA同时存在1例;抗-IgG,抗-IgA,抗-IgM同时存在2例;抗-IgG,C3d同时存在10例;C3d 6例;C3c 0例.试管法直接抗球蛋白试验阳性:抗-IgG 14例,抗-IgG,C3d同时存在10例;C3d 6例.结论 微柱法操作简便结果可靠,值得在临床推广应用.
