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幽门螺杆菌的根除治疗方案选择
幽门螺杆菌是一种微需氧型螺旋弯曲杆菌.环境氧要求5%~8%,幽门螺杆菌到达胃黏膜表面后,通过黏附素,与胃上皮细胞连接在一起,避免被胃排空,并分泌过氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶,保护其不受中性粒细胞杀伤,HP富含尿素酶水解尿素产氨,在菌体周围形成保护层,以抵抗胃酸的杀菌作用.有文献报道,慢性胃炎、胃溃疡等疾病与感染幽门螺杆菌的菌株毒力有关.表达CagA和VacA为高毒力株,其中Ⅰ型菌50%~60%,含CagA基因,有较强毒性,使胃上皮细胞出现空泡、坏死、溃疡等病变引起相关疾病,并与一些胃肠外疾病相关如不明原因缺铁性贫血,特发性血小板减少性紫癜等.Ⅱ型菌40%~50%,不含CagA,不表达CagA和VacA蛋白,不产细胞毒素,不引起相关疾病.故虽然根除幽门螺杆菌相当重要,但并不是所有的幽门螺杆菌感染都要治疗,否则只会增加耐药.
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HLA-DR抗原在不同中医证候幽门螺杆菌感染胃痛患者胃上皮中的表达
目的:探讨胃痛患者幽门螺杆菌(Hp)感染、胃上皮细胞HLA-DR抗原表达以及中医证候之间的关系.方法:对57例脾胃湿热证、24例肝气犯胃证和19例脾胃虚寒证患者,采用免疫组化方法分析胃窦上皮细胞HLA-DR抗原的表达,用改良Giemsa染色法确定Hp感染程度.结果:HLA-DR抗原表达在Hp~-组与Hp~+组中差异显著(P=0.00;P<0.01);脾胃湿热和肝气犯胃证组Hp定植密度与HLA-DR抗原表达呈正相关性(r=0.33,P=0.01;r=0.45,P=0.03;P均<0.05),但脾胃虚寒证组两者未有统计学意义的相关性(r=0.46,P=0.05).Hp定植密度和HLA-DR抗原的表达在3种中医证候组无显著性差异.结论:Hp感染增加了HLA-DR抗原的表达,Hp感染程度和HLA-DR抗原表达与中医证候的形成相关性不大.
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EBV感染人胃上皮细胞GES-1中c-myc基因的表达
目的 研究Epstein-Barr virus(EBV)感染的人胃上皮细胞系GES-1 c-myc基因表达状况,探讨c-myc基因在EBV相关胃癌发生中的作用. 方法 采用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV 产生细胞系Akata 1061以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,经有限稀释法克隆和G418筛选获得感染和转染细胞克隆,用pcDNA3空载体质粒转染的人胃上皮细胞系GES-1细胞作对照,采用免疫细胞化学染色(ICC)法测定EBNA1和c-myc蛋白以鉴定EBV感染细胞克隆及c-myc基因的表达. 结果 EBV感染的细胞克隆经Icc法检测EBNAI阳性,c-myc蛋白阳性;对照细胞均为阴性. 结论 EBV感染可使人胃上皮细胞c-myc蛋白表达增高,EBV对人胃上皮细胞的转化作用可能与c-myc基因的过度表达有关.
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整合素β1亚基对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响
目的 分析幽门螺杆菌感染胃上皮细胞过程中整合素β1亚基表达的变化,观察整合素β1对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响.方法 将幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养,采用流式细胞术检测整合素β1的表达量变化;应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1中β1亚基的表达;幽门螺杆菌感染胃上皮细胞及iRNA降低β1的表达后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡,采用CCK-8法检测细胞增殖情况.结果 幽门螺杆菌感染胃上皮细胞12、24、48h后空白对照组凋亡率分别为(10.80±0.71)%、(12.23±0.06)%和(12.30±2.12)%,Hp感染组凋亡率分别为(24.20±0.14)%、(30.05±2.47)%和(26.40±1.91)%,差异均有统计学意义(t值分别为-26.28、-7.701和-12.855,P<0.05);与幽门螺杆菌共培养6、24、48 h胃上皮细胞增殖受到抑制,抑制率分别为(35.00±3.22)%、(40.96±2.45)%和(8.00±3.33)%;幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养24、48 h流式细胞术检测整合素β1表达,空白对照组平均荧光强度(MFI)分别为(1616.33±24.70)和(1834.67±17.01),Hp感染组为(1484.00±60.89)和(1376.00±14.11),差异有统计学意义(t值分别为3.488和35.95,P<0.05);应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基表达24、48 h,对照组凋亡率分别为(18.75±3.59)%和(39.75±3.68)%,iRNA组凋亡率分别为(26.25±4.11)%和(55.30±5.57)%,差异有统计学意义(t值为-2.746和-4.656,P<0.05);胃上皮细胞中β1亚基的表达降低后细胞增殖受到抑制,24、36、48、72 h抑制率分别为(6.16±1.07)%、(17.15±2.76)%、(10.84±1.34)%和(21.87±1.72)%.结论 幽门螺杆菌能降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基的表达,而且可能通过降低整合素β1亚基的表达促进上皮细胞GES-1的凋亡并抑制其增殖.
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旋毛虫幼虫侵入胃上皮细胞后虫体与细胞蛋白变化的研究
目的 观察旋毛虫幼虫对胃上皮细胞的侵入及侵入前后虫体与细胞蛋白的变化,筛选幼虫侵入相关蛋白.方法 将旋毛虫感染性幼虫接种至胃上皮细胞(SGC-7901)单层,37℃5%CO2条件下培养不同时间后在倒置显微镜下观察幼虫侵入情况;培养18 h后分别提取虫体与细胞蛋白,进行SDS-PAGE与Western blot分析. 结果 旋毛虫幼虫培养6 h时已侵入细胞单层,18 h在幼虫头端与尾端可见鞘的形成.SDS-PAGE结果表明,幼虫与细胞共培养后比仅在培养基中培养的幼虫增加了3条蛋白带,减少了4条蛋白带;细胞与幼虫共培养后细胞蛋白增加了3条蛋白带,减少了2条蛋白带.Western blot分析显示,幼虫与细胞共培养后虫体蛋白多了3条被旋毛虫感染鼠血清识别的反应带(58、21、18 ku),少了3条反应带(98、86、31 ku);细胞与幼虫共培养后细胞蛋白多了6条被旋毛虫感染鼠血清识别的反应带(96、62、40、34、29、22 ku),少了2条反应带(98、15 ku). 结论 旋毛虫幼虫可侵入体外培养的胃上皮细胞单层;幼虫与细胞共培养后增加的被感染鼠血清识别的虫体与细胞蛋白可能是幼虫分泌的侵入相关蛋白.
关键词: 旋毛虫 侵入相关蛋白 胃上皮细胞 SDS-PAGE Western blot -
幽门螺杆菌cagE基因在不同胃肠疾病中的分布及其临床意义
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)的cag致病岛(cag pathogenecity island, cag PAI)被认为是主要的疾病相关毒力因子,与胃上皮细胞IL-8的分泌相关.研究表明,cagE基因位于cag PAI的下游,是cag PAI存在的标志,与H.pylori感染后胃黏膜细胞因子IL-8的合成释放及严重的胃黏膜炎症相关[1].cagE基因在我国患者中的分布特点及与胃肠道疾病的关系尚未完全明确,我们应用两对不同引物扩增临床分离菌株cagE片段并观测胃黏膜的炎症程度,初步评价该基因与不同H.pylori相关胃肠道疾病的关系.
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不同幽门螺杆菌培养滤液对胃上皮细胞端粒酶活性的影响
虽然有动物实验[1]显示幽门螺杆菌(H.pylori或Hp)感染可诱导蒙古沙土鼠腺胃癌的发生,但是人类感染Hp后的临床转归多种多样,不同的临床转归除宿主、环境因素外,Hp菌株的不同是不可忽略的因素.近年来发现端粒酶的激活在恶性肿瘤中是普遍存在的.为此本研究分析不同Hp的毒性产物对胃上皮细胞端粒酶活性的影响,以阐明Hp与胃癌的发病机制.
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胃癌及癌前病变中PCNA、p53表达及其与H pylori感染的关系
目的:探讨胃癌及癌前病变胃上皮细胞的增殖与幽门螺杆菌(H pylori)感染的关系及H pylori感染致癌的可能机制.方法:应用快速尿素酶试验与W-S银染色法将各种病变分为H pylori感染阳性组和阴性组,应用免疫组化SP法对各种病变胃上皮细胞增殖相关基因蛋白PCNA、p53的表达进行检测.结果:PCNA、p53表达随病变进展逐渐增加,慢性浅表性胃炎组明显低于肠化生、不典型增生、胃癌组.且在浅表胃炎、肠化生组H pylori阳性者PCNA表达明显高于H pylori阴性者(68.7% vs 28.5%,93.8% vs 52%,P<0.05).结论:H pylori感染可能通过促进PCNA、p53基因蛋白的过度表达而促进细胞增殖和恶性转化,且这种影响主要发生在胃黏膜癌变的早期阶段.
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cagA基因对胃黏膜上皮细胞增生的影响
目的:观察不同基因型Hp感染对胃上皮细胞增生的影响,进而探讨Hp增加胃癌发生危险性的机制.方法:研究对象为11例Hp阴性的慢性胃炎和55例Hp阳性的慢性胃炎患者.应用流式细胞技术评价胃幽门窦上皮细胞增生,应用聚合酶链反应(PCR)技术检测Hp的cagA基因.结果:Hp阳性患者的增生指数(PI)显著高于Hp阴性者(17±4对7.3±3.3,P<0.01).cagA+Hp患者(n=39)的PI明显高于cagA-Hp患者(n=16)(18.6±5.8对13.8±4.2,P<0.05),而cagA-Hp患者的PI也显著高于Hp-患者,cagA+Hp感染时胃黏膜萎缩、肠化生、不典型增生的发生率分别为23.1%、15.4%及10.26%,显著高于cagA-Hp感染时萎缩、肠化生、不典型增生的发生率18.8%、12.5%及6.3%.结论:Hp感染诱导胃上皮细胞过度增生,cagA+Hp具更强的促增生作用会增加胃癌发生的危险性.
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幽门螺杆菌感染与慢性胃炎胃黏膜组织中COX-2、iNOS表达的相关性研究
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)感染对曼性胃炎胃黏膜环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)表达以及对胃上皮细胞增生与凋亡的影响,阐明Hpylori可能的致癌机制.方法:22例经胃镜及病理确诊为慢性浅表性胃炎患者,采用快速尿素酶及改良Giemsa染色法检测Hpylori;采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测胃黏膜中COX-1、COX-2和iNOS的表达;以染色法原位检测胃上皮细胞的凋亡;以免疫组化法检测胃上皮细胞的增生.结果:与正常对照组相比,Hpylori相关性胃炎胃黏膜组织COX-2和iNOS表达明显增高,增生、凋亡指数差异显著;Hpylori感染导致的COX-2和iNOS表达程度与胃黏膜上皮细胞增生、凋亡呈正相关(r=0.716,0.603,P<0.01;r=0.665,0.572,P<0.01).结论:Hpylori感染导致胃黏膜COX-2和iNOS的高表达,与胃上皮细胞的增生与凋亡失衡有关,从而参与致癌.
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细胞外信号调节激酶在胃癌组织中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系
目的:研究胃癌组织中细胞外信号调节激酶(ERK)的表达与幽门螺杆菌(H.pylon)的感染情况,探讨胃癌组织中ERK的表达与H.pylori感染的关系.方法:ERK的表达采用免疫组化S-P法,用改良Giemsa染色、快速尿素酶试验和H.pylori-IgG检测胃癌组织中H.pylori感染情况.结果:ERK1、ERK2在胃癌组织的细胞质和/或细胞核中表达,ERK1、ERK2在胃癌组织中表达的阳性率分别为82.5%和77.5%,在高-中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和未分化癌中表达的阳性率均无显著性差异(P>0.05).ERK1、ERK2的表达与胃癌的分期无关(P>0.05).H.pylori阳性胃癌患者ERK1、ERK2的表达阳性率均明显高于H.pylori阴性患者(P<0.05).结论:人胃癌组织中ERK1、ERK2的表达与H.pylori感染有关,H.pylori感染可能通过ERK信号传导途径诱导胃上皮细胞的增生,与胃癌发生有关.
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胃癌相关蛋白GCRG213在胃癌细胞中特异性表达
目的:观察来源于胃癌高表达基因GCRG213抗体在两种不同细胞的表达情况,评价GCRG213抗体的肿瘤特异性.方法:应用免疫印迹方法对GCRG21 3抗体在胃癌细胞SGC-7901和胃上皮细胞HFE-145的表达进行比较分析.结果:GCRG213抗体与胃癌SGC-7901细胞蛋白免疫结合后在相应大小位置有一清晰的特异性条带,而与胃上皮H FE-145细胞蛋白免疫结合后则无特异性条带出现,GCRG213抗体与两种细胞蛋白的结合存在明显差异.结论:GCRG213抗体具有很强的肿瘤特异性.
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幽门螺杆菌对胃上皮细胞形态与生长的影响
目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)活菌对体外培养的胃上皮细胞形态与生长的影响.方法采用Hp与细胞体外共培养技术,结合细胞计数、MTT检测及Ki-67抗原的免疫组化分析,观察Hp活菌对人胃腺癌细胞系SGC-7901生长增殖的影响,同时参照病毒的致细胞病变效应实验计算Hp引起50%细胞空泡变性所需的低浓度.结果①细胞毒效应实验表明,3.26×106 CFU/mL的Hp能使50%的细胞出现空泡变性;②细胞计数结果显示,在培养的细胞中加入3.2×104 CFU/mL Hp时,72 h内SGC-7901细胞的数量与未加Hp的对照组基本一样;当Hp浓度增加到1.6×105CFU/mL时,细胞数量较对照组显著增多;但是Hp浓度继续增加5倍后,细胞增殖受到抑制,且随Hp浓度进一步加大,抑制效应愈大,差异有显著性(P<0.01).③MTT检测结果与细胞计数结果十分相似,当终浓度为1.6×105CFU/mL的Hp与细胞共培养时,可显著促进细胞生长(P<0.01);但是Hp浓度5倍增加(8×105 CFU/mL)以后,细胞的增殖减少(P<0.05);当Hp浓度达2×107 CFU/mL和1×108 CFU/mL时,细胞的生长明显被抑制(P<0.01).④Ki-67抗原的免疫组化分析显示,阳性细胞的胞核呈棕黄色着色,低浓度的Hp(3.2×104 CFU/mL和1.6×105 CFU/mL)作用后,SGC-7901细胞内Ki-67抗原阳性率较对照明显增高(P<0.01);相反,较高浓度Hp(4×106 CFU/mL和2× 107CFU/mL)作用后,细胞内Ki-67抗原阳性率较对照显著减少(P值分别为0.05与0.01).结论较低浓度的Hp不仅对细胞未显示明显的毒性,反而对细胞的生长增殖有一定的促进作用;而较高浓度的Hp却明显抑制细胞增殖,且浓度越大,抑制作用越显著.Hp对细胞增殖的双向效应可能与其同时具有促进和抑制细胞增殖两类因素有关.本实验结果可用以部分解释人体感染Hp后所表现的不同结局.
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幽门螺杆菌和非甾体消炎药对胃上皮细胞动力学的影响
目的:观察幽门螺杆菌(Hpylori)和非甾体消炎药(NSAID)对胃上皮细胞增生凋亡的影响.方法:胃癌细胞株AGS与H pylori和/或消炎痛,阿司匹林体外共培养,通过MTT比色法,增生细胞核抗原(PCNA)的Western Blotting检测技术,观察细胞增生青况,FITCAnnexin-V/PI双染色流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳,透射电镜方法等检测细胞凋亡.结果:MTT比色法和蛋白质印迹检测细胞PCNA表达结果表明细胞毒素相关基因A(CagA)阳性的H pylori菌株NCTC11637能够促进细胞增生,此外,低密度(3.2×107-4×109CFU/L)NCTC11637能促进细胞的增生,而高浓度(>2×1010CFU/L)则抑制细胞的增生.消炎痛和阿司匹林能抑制细胞的活力.当AGS细胞与H pylori和NSAID共同孵育时,细胞的生长亦明显受到抑制.FITC-AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测表明消炎痛和阿司匹林可诱导细胞凋亡明显增强,而Hpylori组则未见凋亡的增强,当二者共同作用于AGS细胞时,细胞凋亡率明显升高,但与非甾体消炎药单独作用组相比,则有所下降.透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳进一步证实了FITC-Annexin-V/PI双染色流式细胞仪检测的结果.结论:CagA阳性的Hpylori更加容易促进胃上皮细胞的增生.H pylori对细胞生长的影响与H pylori的密度有关.Hpylori和NSAID间的作用是相互拮抗的.
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老年胃食管反流病的流行病学及诊断新概念
1老年胃食管反流病的流行病学特征胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)可发生于所有年龄的人,以中老年人常就医.其并发症的发生率因性别、种族不同而有差异,与非白种人相比,白种人Barrett食管和食管癌的发病率高出数倍.男性食管炎的发病率要比女性高1倍,Barrett食管(食管鳞状上皮细胞被胃上皮细胞取代)高10倍以上.
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利用多聚腺苷酸信号缺陷逆转录病毒转化人胃上皮细胞GES-1
目的通过人工改变多聚腺苷酸化信号的重组逆转录病毒感染人胃上皮细胞GES-1,检测病毒转录能否产生病毒-宿主融合转录产物及其是否具有转化胃上皮细胞GES-1的能力.方法 使用人工定点突变多聚腺苷酸化信号的小鼠逆转录病毒载体,应用PA317病毒包装细胞获得多聚腺苷酸信号缺陷的重组逆转录病毒;用该病毒感染人胃上皮细胞GES-1,并用G418筛选抗性细胞.通过Northern blot方法检查通读RNA的表达;通过细胞形态、软琼脂集落形成实验检测细胞的转化.结果多聚腺苷酸化信号缺陷病毒可以在PA317病毒包装细胞形成病毒颗粒;用该病毒感染人胃上皮细胞GES-1,可捕获下游宿主细胞序列;多聚腺苷酸化信号缺陷病毒感染的GES-1混合细胞中的部分细胞集聚能力增强,个别克隆细胞形态发生改变,在软琼脂中集落形成率高于pLRD感染GES-1细胞和正常GES-1细胞.结论多聚腺苷酸信号缺陷病毒感染GES-1细胞后可通过表达病毒-宿主通读RNA,激活下游宿主序列使细胞发生转化,为进一步应用多聚腺苷酸信号缺陷逆转录病毒发现胃癌相关基因奠定了基础.
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关于撤消"幽门螺杆菌慢性感染诱导胃上皮细胞产生凋亡耐受"论文的声明
关键词: 撤消 幽门螺杆菌 感染诱导 胃上皮细胞 凋亡耐受 论文 声明 the article epithelial cells -
幽门螺杆菌感染导致胃癌的机制研究
有观点认为,幽门螺杆菌(Hp)感染导致胃癌与乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒诱导肝癌类似,主要途径有2种:间接作用,Hp导致胃上皮细胞炎症反应;直接作用,Hp导致上皮细胞蛋白调节和基因突变.这两种作用互相协同促发胃癌.
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幽门螺杆菌专题系列讲座(三)Hp的致病因子及遗传多态性(中)
1.3与炎症和免疫损伤有关的致病因子1.3.1尿素酶:尿素酶是一种大分子,具有抗原性.Hp能刺激人中性粒细胞的氧化爆发(oxidative burst),产生H2O2,氧化氧氯离子,进而与尿素酶水解尿素时释放的氨发生反应,形成毒性更强的单氯胺,参与损伤过程.同时,尿素酶可以作为白细胞的趋化因子,吸引炎症反应细胞,引起胃黏膜局部的炎症,造成对胃上皮细胞的间接损伤.
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DEC205在幽门螺杆菌感染胃上皮细胞中的表达
目的:探讨幽门螺杆菌及其热休克蛋白60(H.pylori-HSP60)感染与胃上皮细胞表面DEC205受体的关系.方法:分别用H.pylori、H.pylori-HSP60及E.coli LPS刺激胃上皮细胞KATOⅢ,利用免疫荧光染色技术观察KATOⅢ细胞表面DEC205蛋白的表达变化,再利用RT-PCR技术,观察细胞中DEC205 mRNA对上述抗原刺激后的变化.结果:H.pylori、H.pylori-HSP60及E.coli LPS的刺激明显引起细胞表面DEC205蛋白的表达以及细胞内DEC205 mRNA的产生.结论:H.pylori感染与胃上皮细胞表面的胞吞受体DEC205有着密切的关系.