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"扶正培本"法减少肺癌化疗后毒副反应的观察
肺癌是严重威胁人类生命的一种恶性疾病.近数十年来其发病率急剧上升,且病死率甚高.目前临床上对肺癌患者进行的化学药物治疗,是较先进的有效治疗手段之一.近年来由于加强了细胞动力学理论研究,新的化疗药物层出不穷,治疗效果也随之不断提高.但与此同时,化疗药物对正常机体所造成的毒副作用这一矛盾也相当突出,有时甚至不得不中途中断化疗,这就直接影响了治疗效果.如何有效地减少毒副反应,保证化疗的顺利进行,根据本人的临床体验,中医"扶正培本"法在这方面起到了不可低估的作用.具体实例报道如下.
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原癌基因c-fos在幽门螺杆菌感染蒙古沙土鼠致胃癌前病变中的表达
从细胞动力学角度探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌发生的关系已成为近年的研究热点.我们采用蒙古沙土鼠制备Hp长期感染动物模型,观察与细胞增殖凋亡密切相关的原癌基因c-fos在Hp长期感染动物模型的变化规律,探讨Hp可能的致癌机制.
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胃癌及癌前病变中胃黏膜上皮细胞增生及凋亡相关基因蛋白表达
目的:探讨胃癌演变过程中胃上皮细胞动力学变化.方法:应用免疫组化SP法对各种病变胃上皮细胞增生相关蛋白(PCNA、P53)和凋亡相关蛋白(Fas、Bcl-2、Bax)的表达进行检测.结果:PCNA、P53表达随病变进展逐渐增加,慢性浅表性胃炎(CSG)组明显低于肠化生(IM)、不典型增生(Dys)、胃癌(GC)组(PCNA 53.3%vs75.6%、93.3%、86.4%,P53 3.3%vs24.4%、36.7%、81.8%).Fas、Bax表达随病变进展逐渐减少,Dys、GC组明显低于CSG组(Fas 30%、27.3%vs60%,Bax 43.3%、40.9%vs70%,P<0.05).Bcl-2表达随病变进展而逐渐增加,Dys(633%)、GC(72.7%)组明显高于CSG(20%)、IM(32.2%)组(P<0.01).结论:对不同胃黏膜上皮细胞增生相关蛋白(PCNA、P53)及凋亡相关蛋白(Fas、Bcl-2、Bax)检测表明,在胃癌演变过程中存在着胃上皮细胞增生和凋亡的失衡,即增生过快凋亡受抑.PCNA、P53、Fas、Bcl-2、Bax通过在不同病变阶段被激活或抑制而在胃癌及癌前病变形成过程中起作用.
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生长抑素对肝星状细胞的影响机制
目的:研究生长抑素(somatostatin,SST)与大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增生、凋亡的关系.方法:分离、培养的原代大鼠HSC,经不同浓度SST(10-6-10-10mol/L)处理72 h后,以吖啶橙(acridineorange,AO)/溴乙啶(ethidium bromide,EB)荧光染色法、末端核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷原位缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)、透射电镜及流式细胞术检测其凋亡率的改变.SST作用120 h后,以甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测HSC增生率的变化.并通过对细胞动力学的观察,探讨SST的作用机制.结果:SST可通过剂量依赖方式抑制HSC增生,提高HSC凋亡率.浓度为10-6mo1/L或10-7mol/L时效果尤为显著.Go/G1期阻滞是SST发挥作用的重要途径.结论:低剂量SST即可抑制HSC增生,并促进其凋亡,提示SST在抗肝纤维化方面具有潜在价值.
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永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
目的:建立永生性大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系.方法:采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏,经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC.然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养.结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成等表型特征.结果:分离获得的HSC约为2X107细胞/只大鼠,细胞成活率>95%,纯度>90%,培养2 wk后几乎所有HSC均已活化.在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞,倍增时间约75 h,可表达结蛋白、α-SMA以及除Ⅳ型胶原外的多种ECM成分(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等),且传代过程中增生、ECM表达等特性均保持稳定.该细胞系已在体外培养32代(1 a以上),提示其具有永生性.结论:已成功建立永生性大鼠HSC系,该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似.
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幽门螺杆菌cagA基因与胃上皮细胞凋亡、增生的关系
幽门螺杆菌(H pylori)是人类胃癌的Ⅰ类致癌原.H pylori分为cagA阳性菌株与cagA阴性菌株.近年来的研究指出,cagA阳性菌株感染具有更强毒力和危险性.cagA阳性菌株与癌前病变及胃癌的关系更为密切.从细胞动力学角度探讨H pylori感染和胃癌的关系已成为研究的热点之一.H pyloricagA感染与胃黏膜上皮细胞增生和凋亡关系的研究,为探讨H pylori损伤胃黏膜机制以及与胃癌发生的关系提供了新的思路.
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幽门螺杆菌感染对胃病细胞动力学的影响
目的观察Hp感染在正常粘膜演变为胃癌过程中对细胞增殖动力学的影响,以探讨Hp的致癌机制.方法研究对象为正常胃粘膜的消化不良患者(NS,n=14)及慢性浅表性胃炎(CSG,n=56)、慢性萎缩性胃炎(CAG,n=20)、慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生(CAGIM,n=16)、不典型增生(Dys,n=18)、胃癌(GC,n=17)Hp阳性与阴性患者.应用Ki-67免疫组化技术评价胃幽门窦上皮细胞增生,并用标记指数百分率(LI%)来表示.结果 Hp阳性患者(n=75)的Ki-67 LI%为17±5,Hp阴性患者(n=52)的Ki-67 LI%为13±6,差异有显著性(P<0.05);伴有Hp感染的CSG与NS或Hp阴性的CSG患者相比LI%增加(P<0.01);CAG,CAGIM,Dys,GC的Hp阳性与阴性患者的LI%相比无显著差异;五种胃病无论Hp阳性或阴性患者与正常者相比,LI%明显增加(P<0.01).LI%与胃粘膜炎症程度无关.结论 Hp感染促进胃上皮细胞过度增殖主要发生在胃粘膜病变的早期,并不影响在癌前病变或胃癌患者中所见到的上皮细胞增生增加.这进一步证明Hp感染可能是胃癌发生过程中的始动步骤.
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幽门螺杆菌和非甾体消炎药对胃上皮细胞动力学的影响
目的:观察幽门螺杆菌(Hpylori)和非甾体消炎药(NSAID)对胃上皮细胞增生凋亡的影响.方法:胃癌细胞株AGS与H pylori和/或消炎痛,阿司匹林体外共培养,通过MTT比色法,增生细胞核抗原(PCNA)的Western Blotting检测技术,观察细胞增生青况,FITCAnnexin-V/PI双染色流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳,透射电镜方法等检测细胞凋亡.结果:MTT比色法和蛋白质印迹检测细胞PCNA表达结果表明细胞毒素相关基因A(CagA)阳性的H pylori菌株NCTC11637能够促进细胞增生,此外,低密度(3.2×107-4×109CFU/L)NCTC11637能促进细胞的增生,而高浓度(>2×1010CFU/L)则抑制细胞的增生.消炎痛和阿司匹林能抑制细胞的活力.当AGS细胞与H pylori和NSAID共同孵育时,细胞的生长亦明显受到抑制.FITC-AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测表明消炎痛和阿司匹林可诱导细胞凋亡明显增强,而Hpylori组则未见凋亡的增强,当二者共同作用于AGS细胞时,细胞凋亡率明显升高,但与非甾体消炎药单独作用组相比,则有所下降.透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳进一步证实了FITC-Annexin-V/PI双染色流式细胞仪检测的结果.结论:CagA阳性的Hpylori更加容易促进胃上皮细胞的增生.H pylori对细胞生长的影响与H pylori的密度有关.Hpylori和NSAID间的作用是相互拮抗的.
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外科手术对肿瘤患者血细胞凋亡和增殖活性的影响
目的:探讨外科手术对恶性肿瘤患者外周血细胞动力学的影响.方法:用流式细胞术对221例手术前和287例手术后恶性肿瘤患者外周血细胞凋亡水平和增殖活性进行了对比分析.结果:手术后恶性肿瘤患者血细胞的细胞凋亡水平明显低于手术前患者(P<0.01);手术后患者血细胞S期细胞比率显著高于手术前患者(P<0.01).结论:外科手术能引起恶性肿瘤患者外周血细胞动力学发生明显改变.这些结果对判断肿瘤发展情况可提供一定的客观参考依据.
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运动状态下的线粒体与细胞凋亡
细胞凋亡(Apoptosis)是在组织细胞动力学方面有广泛作用的一种基本生理现象,1972年由Kerr等[1]首先提出,又称程序化细胞死亡(Programmed Cell Death,PCD),是机体细胞主动死亡的过程,用于描述发生在发育、成熟、衰老过程中,对不同有害刺激或疾病中的一种特殊的细胞自杀行为.这些刺激包括病毒攻击、自由基、辐射造成的DNA损伤等.这种自杀行为不对周围组织产生副作用.通常,细胞凋亡对机体是有利的,这是完全不同于细胞坏死的一种死亡途径.
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细胞因子在放射诱导的正常组织急性反应中的作用
正常组织的放射损伤按出现症状的时间划分为:急性反应、亚急性反应和晚期迟发反应。急性反应与晚期反应的关系一直不明确,有人认为,急性反应中发生的事件在晚期放射损伤的发病机理中起着重要的作用,提出正常组织放射损伤应按照引发损伤的原始事件、正常组织的病理生理反应和组织细胞动力学划分为:原始事件、修复稳定期和缓慢进展期[1]。因此,研究急性反应发生机理,采取针对性的措施来减轻或延缓晚期损伤的出现就显得很有必要。 1.一般炎症过程中细胞因子的作用。在炎症反应过程中,介导淋巴细胞穿过毛细血管进入组织的分子机理已经有了深入了解,在这一过程中,表达在淋巴细胞和毛细血管内皮细胞上的细胞粘附分子起着关键性的作用。淋巴细胞穿过毛细血管迁移到组织中是炎症反应中不可缺少的一个步骤。在穿过毛细血管之前,淋巴细胞在促炎性细胞因子的作用下,从血流中心开始靠近毛细血管的边缘,经过在毛细血管内皮细胞表面滚动、俘获等过程与毛细血管内皮细胞结合,然后,通过毛细血管内皮间隙穿过毛细血管达到组织中,这一过程需要许多细胞因子的参与,如淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte function-associated antigen-1,LFA-1)、选择素(包括P-选择素、E-选择素、L-选择素)、整合素、细胞粘附分子(CAMs)等。细胞粘附分子包括细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1,CD54)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、血小板-内皮细胞粘附分子-1(platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1,CD31)。
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1例小细胞肺癌化疗所致粒细胞缺乏症的护理体会
骨髓抑制是化疗时常见的毒性反应,临床表现主要是对造血干细胞动力学的影响,其中对粒细胞和血小板的影响明显.我科于2000年10月收治1例化疗后骨髓抑制患者,现将护理体会报告如下.
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低剂量氢醌诱导hPARP-1蛋白正常及缺陷细胞适应性反应研究
目的观察人胚胎肺成纤维细胞(HLF)正常及缺陷细胞在低剂量氢醌(hydroquinone,HQ)处理后能否诱导适应性反应,探讨PARP-1蛋白缺陷与正常细胞诱导适应性反应与微核形成及细胞周期变化的关系,进一步阐明适应性反应形成机制.方法用低剂量HQ预处理细胞后,观察细胞和DNA对大剂量HQ攻击的适应性反应,从微核率及核异常率、细胞周期等方面测定细胞变化情况.结果在细胞整体活力水平,0.001~0.050 μmol/L HQ预处理可以提高细胞对攻击剂量80.0μmol/L的耐受性;HLF、转染绿色荧光蛋白真核表达载体的HLF(HLFC)和转染hPARP-1基因反义RNA真核表达载体的HLF(HLFP)细胞经HQ低剂量预处理及大剂量攻击后,各剂量组不同程度出现含微核和核异常细胞,G1、G2、S期细胞数分布均不相同.与同种细胞仅大剂量攻击比较,0~0.050 μmol/L HQ预处理的HLF、HLFC及HLFP细胞微核率及核异常率差异均有统计学意义(P<0.05).HQ预处理的HLF和HLFC细胞均出现G2期阻滞;HLFP细胞表现为G2期阻滞,1.000、2.000 μmol/L出现G1期阻滞.结论在低剂量HQ作用下,hPARP-1蛋白缺陷细胞和正常细胞一样有适应性反应,但低于正常细胞,说明hPARP-1蛋白在细胞适应性反应方面起重要作用,适应性反应与细胞周期调控等有关.
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三参滋胃饮对慢性萎缩性胃炎的实验研究
目的:观察三参滋胃饮对慢性萎缩性胃炎大鼠胃粘膜病理和细胞动力学的影响.方法:采用综合造模法.将大鼠随机分为5组:正常组、三参滋胃饮小剂量治疗组、三参滋胃饮大剂量治疗组、自然恢复组、维酶素治疗组.给药50天后留取胃粘膜组织块,HE染色观察粘膜组织病理变化,流式细胞仪观察粘膜组织细胞动力学变化.结果:三参滋胃饮大小剂量组胃粘膜病变基本恢复与正常组无显著差异,自然恢复组胃粘膜病变无恢复与正常组差异显著.三参滋胃饮大小剂量组G0/1期细胞比例明显高于自然恢复组,与正常组无显著差异;S期和G2/M期细胞比率明显低于自然恢复组,与正常组无显著差异;细胞增殖指数(PI)低于自然恢复组,与正常组无显著差异.结论:三参滋胃饮对慢性萎缩性胃炎大鼠的胃粘膜有明显的修复作用,并对胃粘膜活跃的增殖状态有明显的抑制作用.
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细胞增殖的检测及临床意义
细胞动力学是研究细胞群体内各部分细胞运动规律的学科.肿瘤的细胞增殖研究早期工作由于受方法学的制约主要限于实验肿瘤,随着分子生物学的飞跃发展和免疫组织化学技术的改进,多种与细胞增殖有关的生物标志物得以发现并逐渐有了深入地认识,检测方法不断更新.现已发现许多肿瘤的细胞增殖状态与生物学行为及预后有密切关系[1],内窥镜及针吸活检技术的普及使在治疗前了解肿瘤的增殖状态成为可能,近年来已有许多关于肿瘤细胞增殖与临床病理关系的研究.
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骨髓检查临床实践
随着科学的不断发展,学科间的相互渗透,血液学领域不断扩大,检测手段愈来愈丰富.细胞生物化学、免疫、遗传、细胞动力学及电镜等检查使形态学检查达到了分子水平,但在日常临床工作中,光镜下的细胞形态学检查仍是首选和必不可少的手段,因而骨髓检查对血液病的诊断治疗显得尤为重要.作者从事血液学临床及教学多年,遇到一些因操作、取材不当的情况,既增加了患者痛若,又影响了诊断治疗;作者曾亲手操作骨髓检查数千例,谨将点滴心得飨与同道,以抛砖引玉.
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开痞合剂对实验性CAG大鼠DNA含量的影响
目的:观察开痞合剂对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜组织细胞DNA含量和细胞动力学的影响.方法:采用去氧胆酸钠联合无水乙醇经口灌服制备慢性萎缩性胃炎的大鼠实验模型,将造模动物随机分为4组,每组18只,分别是高剂量组、低剂量组、维酶素组、自然恢复组加之正常组12只.灌服60天,留取胃黏膜组织,流式细胞仪检测PI,使用Mcycle软件分析细胞周期变化的情况.结果:开痞合剂组DI值与模型组有显著差异,DNA含量和S期所占比率及细胞增殖指数明显低于模型组,与正常组接近,结论:开痞合剂对CAG大鼠胃黏膜活跃的增殖状态有明显抑制作用,胃黏膜病变得以逆转.
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细胞动力学和化疗方案的设计
细胞(增殖周期)动力学研究细胞群体生长、繁殖、分化、丢失和死亡等运动变化的规律.肿瘤组织主要由增殖和非增殖细胞群组成,绝大多数细胞毒素型的抗肿瘤药对增殖周期中的各期细胞有不同的影响.因此,了解细胞动力学知识,对深入认识肿瘤细胞繁殖过程和特点及药物作用原理,正确制定肿瘤药物治疗方案及新药研究都有很大的帮助.
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肿瘤大剂量化疗矛盾剖析与对策
1 大剂量化疗效应1.1 化疗历史并不漫长,它开始于20世纪40年代,当时只发现几种药物单独使用对淋巴瘤、白血病的治疗有效,到了60年代,由于细胞动力学和药物代谢动力学知识应用于临床化疗, 并由此设计出多种药物联合化疗方案,大大提高了治疗效果,并广泛应用于各类肿瘤,而70年代以来,化疗方案日趋成熟,给药方式的改进,5-羟色胺拮抗剂和大剂量类固醇有效止吐药物应用,粒细胞刺激因子和抗菌素,抗真菌药的使用,使得化疗剂量成倍增加,实现大剂量化疗并由此而产生的骨髓移植真正成为化疗史上的一次革命,使化疗效果也起到根本变化.实践已证明大剂量联合化疗在绝大多数肿瘤治疗中,疗效较单一剂量化疗提高,使某些肿瘤治愈成为现实.
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Hp毒力因子与胃上皮细胞动力学变化
1982年澳大利亚学者Warren和Marshall发现了幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp),引起医学界的广泛关注.多年来,各国学者对其进行的大量研究显示幽门螺杆菌是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,并且与胃癌的发生密切相关,被WHO列为一类致癌因子.