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EB病毒转化B淋巴细胞影响因素的研究
人外周血B淋巴细胞膜上有EB病毒(EBV)受体,在体外可被EBV转化为B淋巴母细胞样细胞系(LCL),LCL具有永生性,能在体外长期传代生长,且能保持较稳定的遗传学性状.因而LCL可被广泛应用于医学生物学研究的许多领域,如进行基因组遗传物质结构的分析,某些细胞生物学性状的检测等.目前建立LCL的方法主要有环孢霉素A法、微量全血法及冻存全血法.但微量全血法和冻存全血法因具有操作简单,所需标本量少的优点,而被广泛采用.我们就影响微量全血法转化效果的因素作了初步探讨.
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EB病毒在人单克隆抗-D研制中的应用
EB病毒(EBV)可感染灵长类B细胞,使其获得持续生长的特性,即永生性.我们利用EBV的这一特性,在体外感染一能分泌抗-D的人B淋巴细胞,建立了能分泌抗-D的人淋巴细胞株(lymphocyte cell lines,LCL),为单克隆抗-D的研制奠定了基础.
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永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
目的:建立永生性大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系.方法:采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏,经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC.然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养.结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成等表型特征.结果:分离获得的HSC约为2X107细胞/只大鼠,细胞成活率>95%,纯度>90%,培养2 wk后几乎所有HSC均已活化.在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞,倍增时间约75 h,可表达结蛋白、α-SMA以及除Ⅳ型胶原外的多种ECM成分(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等),且传代过程中增生、ECM表达等特性均保持稳定.该细胞系已在体外培养32代(1 a以上),提示其具有永生性.结论:已成功建立永生性大鼠HSC系,该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似.
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HCVⅡ型病毒在EBV转化人PBMC中持续存在的研究
近年来发现丙型肝炎病毒(HCV)不仅可以感染肝细胞,也可以侵入肝外多种组织和器官,尤其其嗜淋巴细胞性正在引起越来越多的关注.已有研究证明,丙型肝炎病人外周血单个核细胞(PBMC)中既有HCV RNA正链存在,也有负链存在,表明HCV可在PBMC中复制.PBMC可能是HCV的潜伏感染库,是病毒复制的一个场所.若使丙型肝炎患者的PBMC在体外获得长期存活的能力,传代培养后,HCV是否还能在其中继续存在?本文利用Epstein-Barr病毒(EB病毒)可以在体外使人B淋巴细胞发生转化成为永生性细胞的特性,对体外EB病毒转化的病人PBMC中的HCV复制情况进行了研究.
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端粒、端粒酶、端粒酶抑制剂与消化系统肿瘤的研究进展
肿瘤是人类当前面临的大顽症,它的形成是一个多阶段的过程.原癌基因的激活,抑癌基因的突变是肿瘤形成的重要分子基础.正常细胞在致癌因素作用下,转变为恶性细胞并不意味着一定能形成肿瘤,哺乳动物体内有一套精细的调节机制控制着细胞的分裂次数,使细胞分裂达到一定程度后死亡.可见肿瘤细胞获得无限增殖的特性-永生性,在肿瘤的发生中起着至关重要的作用.
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端粒酶的调控在肿瘤治疗中的启示
1 端粒酶与肿瘤的关系早在1990年,人们就注意到端粒酶与肿瘤的关系.在人体内,正常的体细胞因缺乏端粒酶活性,随着细胞的分裂,端粒持续丢失,直到细胞死亡.而在具有永生性的细胞株中,存在着极高的端粒酶活性,端粒酶对端粒的不断合成,使端粒的长度保持稳定,细胞获得无限的增殖能力,进而发展成为肿瘤.
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干细胞免疫功能研究进展
干细胞是一种永生性细胞,能够不断地自我更新并分化为特定组织的成熟细胞.根据机体发育的不同阶段,分为胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和成体干细胞(Adult stem cells,ASCs),ESCs能够分化出机体所有组织器官的细胞类型,ASCs则只能分化为特定的组织细胞,ASCs中的造血干细胞(Haemopoietic stem cells,HSCs)负责血液和免疫系统的形成和再生.
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抗血管生成治疗淋巴瘤研究进展
恶性淋巴瘤系免疫系统的一类恶性肿瘤,其以受累部位出现淋巴细胞来源的恶性细胞为特征.这类细胞或丧失淋巴细胞的生理功能、或因基因突变获得永生性、或出现异常分化而导致免疫功能紊乱.由于淋巴瘤的临床分类复杂,各类型淋巴瘤对治疗反应及预后相差悬殊,常规细胞毒化疗缺乏特异性,且具有诸多的毒副作用及局限性,因此新的治疗模式成为研究热点.大量实验证实,肿瘤的生长、转移和预后均与血管生成相关,抑制血管生成能显著抑制肿瘤的生长及转移,抗血管生成治疗正以一种全新的治疗模式进入临床,在此,本文将就血管新生在恶性淋巴癌中的研究和实践作一概述.
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胃良恶性溃疡组织中幽门螺杆菌感染与端粒酶的关系胃良恶性溃疡组织中幽门螺杆菌感染与端粒酶的关系
端粒酶的激活是恶性肿瘤细胞获得永生性的重要条件.但其激活机制未明.幽门螺杆菌与胃癌的发生关系密切.WHO已将Hp感染作为胃癌的第一类致癌因子.我们的研究试图表明二者之间的关系.
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端粒、端粒酶在肝细胞肝癌中的意义
永生性是细胞癌变的重要生物学特性.人体细胞没有无限制增殖的能力,它存在着抑制细胞无限制增殖的复杂机制,其中之一是随每次细胞分裂而发生的染色体末端序列--端粒的进行性缩短所致细胞的老化死亡.
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ECV304对4种病毒的敏感性研究
ECV304(Umbilical cord, endothelial, human)为正常人脐带静脉自发转化的永生性内皮细胞株.细胞多呈梭形和不规则三角形,具有单层生长的特点.为了寻找更多的对病毒范围较广的敏感细胞株,我们对ECV304用4种理化和生物学特性均不同的病毒单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ333)、柯萨奇病毒(CBV4)、腺病毒(AdV7)、人巨细胞病毒(HCMV169)进行了敏感性研究.
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永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
目的建立永生性大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系.方法采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏,经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC.然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养.结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、(平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成等表型特征.结果分离获得的HSC约为2×107细胞/只大鼠,细胞成活率>95%,纯度>90%,培养2周后几乎所有HSC均已活化.在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞,倍增时间约75 h,可表达结蛋白、α-SMA以及除Ⅳ型胶原外的多种ECM成分(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等),且传代过程中增殖、ECM表达等特性均保持稳定.该细胞系已在体外培养32代(1 a以上),提示其具有永生性.结论已成功建立永生性大鼠HSC系,该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似.
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人脐动脉平滑肌细胞体外培养的生物学特性及其永生株的初步建立
目的建立人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMC)原代、传代培养的佳方法,并初步建立其永生株.方法采用人脐动脉血管中膜组织块贴壁法原代培养,比较不同培养基对原代及传代细胞增殖的影响;选择标记为新霉素(G418)的带有端粒酶催化亚基(hTERT)基因的重组质粒导入人脐动脉血管平滑肌细胞.结果经α-肌动蛋白鉴定,组织块贴壁法可获得高纯度的HUASMC.原代培养的HUASMC 1~4代细胞增殖能力强、生长旺盛,此后细胞的增殖能力逐渐降低,到第10代几乎丧失增殖力.原代培养以MCDB131为佳培养基.hTERT转染细胞克隆由长梭形变为短梭形,接触抑制消失,生长速度快,目前已传至20代,增殖能力与第1代无差别.转染前后平滑肌特异的α-肌动蛋白表达阳性.结论 hTERT转染的HUASMC保留了HUASMC的基本生物学特征,能保持较强的增殖能力持续传代.