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抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾组织纤维化作用机制研究
目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及机制研究.方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术.术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组(0.1,0.2,0.4 mg·kg-1)及雷帕霉素组(0.16 μg·kg-1),各组10只.各组于术后2周分别给予0.5 mL生理盐水、雷帕霉素及抗纤灵煎剂灌胃.治疗8周后处死小鼠,在处死小鼠前1d收集24 h小便测24 h尿蛋白(UPRO)定量,眼眶采血测血肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取残肾应用免疫荧光法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;系用Western blot法检测肾组织Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达均有所下降(P<0.05).结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h UPRO定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生,其机制可能与下调α-SMA表达,抑制肾脏Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达相关.
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氨基胍降低肺纤维化大鼠肺成纤维细胞表达仅α-平滑肌肌动蛋白
肺纤维化主要的病理变化是肺间质中成纤维细胞活化为肌成纤维细胞(Myofibroblast,MF)及大量细胞外基质聚集.
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成年小鼠肺成纤维细胞分离纯化及原代培养
成年小鼠肺成纤维细胞的原代培养是获得肺组织后在体外进行的培养,能反映体内的生长特性,对研究细胞的生长分化及其生理病理变化的机制具有极其重要的价值,具有细胞系所无法比拟的优点.本文主要探讨合理的成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化培养方法及其生长曲线特点.1材料与方法1.1试剂:高糖DMEM(Gibco公司),胎牛血清(杭州天杭公司),胰蛋白酶(Sigma公司),波形蛋白vimentin、α-平滑肌肌动蛋白α-SMA抗体和免疫组化SABC试剂盒(武汉博士德公司).1.2实验动物:清洁级雄性成年昆明小鼠(25±5)g[华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2008-0005].
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肾上腺节细胞神经瘤一例
患者女,27岁。间断右上腹痛3个月,近半个月疼痛加重,为持续性钝痛。B超示:右侧腹实性占位性病变,大小为12.0 cm×11.0 cm×7.4 cm,可能来自肾上腺;CT示:右肾上腺肿物。在B超引导下行穿刺活检,病理诊断为良性病变,可能为节细胞神经瘤。故行右肾上腺肿物切除术。 病理检查:送检结节状肿物,重约600 g,大小为12 cm×12 cm×8 cm 。包膜完整,切面灰白色、实性、质韧,可见编织状及漩涡状结构。组织学检查,肿瘤包膜外残存有部分肾上腺皮质。肿瘤由少量纤维结缔组织分隔成小结节。肿瘤主要由编织状排列的成纤维细胞和少量神经鞘细胞组成,其间散在一些分化成熟的神经节细胞,节细胞体积较大,胞质宽,略嗜碱性,单核,核圆形、深染,位于中间或偏位,核仁明显。免疫组织化学结果:S-100蛋白阳性,平滑肌肌动蛋白阴性。
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心脏原发性恶性肿瘤六例
一、临床资料收集6例心脏原发性恶性肿瘤的标本(临床病理资料见表1),均为男性患者,年龄30~47岁,平均年龄为39.3岁.常规肿瘤取材制片,HE染色,免疫组织化学染色[波形蛋白、肌动蛋白、平滑肌肌动蛋白(SMA)、白细胞共同抗原(LCA)、CD20、CD79a、CD45RO、CD3等].
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琥珀酸脱氢酶缺陷型胃肠道间质瘤一例
患儿男,9岁。2014年5月16日因左上腹疼痛12 h入当地医院就诊,次日行剖腹探查。术中见胃前壁近胃窦肿物,直径约3 cm,表面糜烂,有活动性出血,行远端胃大部切除。送病理检查的肿瘤组织大小为3.5 cm ×3.5 cm ×0.8 cm,破裂伴出血,切面呈灰红至灰褐色。免疫组织化学检测结果为:CD117、DOG-1阳性,Ki-67阳性指数20%,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)局灶阳性,细胞角蛋白( CK)、S-100蛋白、白细胞共同抗原( LCA)、CD3、CD20阴性,病理诊断为:胃间质瘤,核分裂象>50/50 HPF,考虑高度侵袭转移危险性。6月17日患者家属携带病例材料来复旦大学附属肿瘤医院进一步诊治。追问病史,本例临床上无Carney三联征或Carney-Stratakis综合征,辅助检查未示患其他肿瘤的征象。对送检蜡块进行重新切片,分别行HE染色、免疫组织化学标志物和分子病理检测。
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伴玻璃样间质的透明细胞癌二例
例1男,76岁.因双下肢浮肿2个月余,声嘶1周于2000年3月12日入院.体检:一般情况差,左颈部触及肿大淋巴结约2 cm×2 cm大小,血生化检查提示肾功能及呼吸功能衰竭,后因呼吸困难作气管插管时舌根部见一菜花状肿瘤约3.0 cm×2.5 cm大小,行颈淋巴结及舌根部肿瘤活检术.术后1个月患者死于慢性肾炎所致肾功能及呼吸功能衰竭.病理检查:切除淋巴结大小2 cm×2 cm,切面灰白色,质硬.舌根部肿瘤大小3.0 cm×2.5 cm,表面呈菜花状,切面灰白色,质硬.镜下观察:舌根部肿瘤细胞形态较一致,排列呈互相吻合的小梁状、岛状或片状.巢间有大量玻璃样变的纤维性间质.瘤细胞中等大小,圆形、多角形,胞质透亮,核居中,染色质粗,核仁可见,核分裂象偶见.送检颈淋巴结结构大部被上述肿瘤组织取代(图1).免疫组织化学检查:肿瘤细胞广谱细胞角蛋白 (CK)阳性,平滑肌肌动蛋白(SMA)及S-100蛋白阴性.瘤细胞胞质过碘酸雪夫反应(PAS)染色阳性,黏液卡红染色阴性.
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乳腺干细胞研究进展
人类乳腺组织含有两种不同的上皮细胞:即腺腔内层的腺上皮细胞和外层的肌上皮细胞,前者表达细胞角蛋白(CK)8/18/19,而后者表达平滑肌肌动蛋白(SMA).以往人们常常用它来解释正常乳腺组织的发育以及乳腺肿瘤的发生和发展.一般认为乳腺肿瘤均来源于腺上皮细胞,而乳腺癌中肌上皮细胞减少或消失,并以此来鉴别是否有浸润或癌变.
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胃丛状纤维黏液瘤:一种独特的胃窦良性肿瘤
胃丛状纤维黏液瘤(plexiform fibromyxoma of stomach)显著的病理特征为肿瘤在胃壁间呈丛状生长,由温和的梭形或卵圆形细胞增生形成,间质富于黏液及小血管,阿辛蓝染色阳性[1].我们遇到1例,现结合文献对其临床及形态学特点加以复习,以便病理医师和临床医师认识这一新的肿瘤,避免误诊或过度治疗.一、材料和方法标本为本院2004年手术切除之胃窦部肿物1例,经常规4%中性甲醛固定,石蜡包埋切片,厚度4μm,HE染色及阿辛蓝染色,光镜观察.免疫组织化学采用EnVision法,检侧AE1/AE3、CD34、CD117、平滑肌肌动蛋白(SMA)、HHF35、caldesmon、结蛋白、S-100蛋白、波形蛋白、DOG-1、β-连接素、CD10、间变性淋巴瘤激酶(ALK)在肿瘤中的表达.所用-抗及二抗试剂盒购自泉辉生物技术有限公司.
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α-平滑肌肌动蛋白在实验性放射线大鼠肾病组织中的表达和意义
一、材料和方法1. 实验模型建立:按文献[1]的方法制作放射性肾病动物模型.6周雄性Wistar大鼠(日本SLC公司,n=32)被随机分成对照组(n=12)和照射组(n=20),全麻后开腹将右肾切除,暴露左肾,给予X线25 Gy单次照射.照射后1、3、6、9个月4个时间点分别处死各组动物.
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抗体鸡尾酒法在免疫组织化学标记中的应用
肿瘤组织常含有多种抗原成分,要在一张切片上同时显示多种组织抗原,往往需要采用双标记或三标记方法.然而,反复在一张切片上进行操作容易引起脱片,从方法学角度看也颇为费时费力.为此,作者设计了抗体鸡尾酒标记法,用p53/CD34标记了325例肺、食管、胃肠、膀胱及子宫等部位的上皮性肿瘤,同步显示p53表达水平、微血管密度及脉管受累情况;用p63/α-平滑肌肌动蛋白(SMA)标记了15例乳腺病变组织,显示肌上皮细胞的基本结构.
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网状纤维和α-平滑肌肌动蛋白/ED-1免疫组织化学双重染色方法
在同一张组织切片上探讨两种或两种以上的组织成分或抗原成分的相互关系时,可以采用双重染色方法.网状纤维是构成组织的网状支架,广泛分布于实质性脏器中,其中丰富的区域是肝、脾、淋巴组织、骨髓、基底膜和血管等处.网状纤维染色方法是一种组织化学方法,利用此方法可以显示和判定病变组织支架的破坏情况及纤维组织的增生情况[1].
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肝纤维化组织中星状细胞活化与基质金属蛋白酶系统改变的研究
血浆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)可转化纤溶酶原为纤溶酶,活化MMPs,从而降解多种细胞外基质成分.PAI-1抑制uPA作用,TIMP-1抑制MMPs对细胞外基质的降解作用.我们测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达以及uPA、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)在不同肝纤维化分级中的变化,旨在了解肝纤维化发展过程中肝星状细胞活化、基质金属蛋白酶系统蛋白表达以及纤溶酶原活化系统变化,为临床治疗肝硬化提供理论依据.
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肝纤维化的治疗
当肝受到损伤时,炎症细胞和肝窦Kupffer细胞释放出活化因子激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),使HSC转化为表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的肌成纤维细胞(myofibroblast),并且产生大量Ⅰ型胶原[1].
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胆管疤痕相关因子在梗阻型胆管损伤后不同时间段的表达
目的:探讨手术时机的选择对胆道修复后吻合口狭窄的影响.方法:运用家犬制作梗阻型胆管损伤的动物模型,通过HE染色及Masson特染分析损伤后胆管壁的结构改变及胶原增生情况,免疫组织化学法测定胆管梗阻损伤后不同时间段巨噬细胞MΦ、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达情况.结果:胆管损伤后早期(BDL5)出现黏膜水肿,部分弹力纤维断裂,随着梗阻时间延长,黏膜层变薄,成纤维母细胞及胶原组织不断增生,纤维呈无规则排列,随着损伤时间的延长,胶原纤维增生不断增强[28.47±4.06(BDL5)vs 59.92±9.13(BDL30)],但是疤痕相关因子MΦ、α -SMA及TGF-β1在损伤后5d即出现高表达[MΦ:0.262±0.031(BDL0) vs 0.409±0.034(BDL5),α-SMA:0.239±0.035(BDL0)vs 0.387±0.018(BDL5),TGF-β1:0.245±0.033(BDL0) vs 0.386±0.029(BDL5),P>0.05],而后随着损伤时间的延长,其表达并未出现增高[MΦ:0.409±0.034(BDL5) vs 0.422±0.023(BDL30),α-SMA:0.387±0.018(BDL5)vs 0.358±0.029(BDL30), TGF-β1: 0.386±0.029(BDL5) vs 0.389±0.056(BDL30),P<0.05],两者无时效关系.结论:胆管损伤后时间的长短与管壁疤痕是否过度形成无关,故胆管修复时间不是术后吻合口狭窄的主要因素.
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永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
目的:建立永生性大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系.方法:采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏,经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC.然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养.结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成等表型特征.结果:分离获得的HSC约为2X107细胞/只大鼠,细胞成活率>95%,纯度>90%,培养2 wk后几乎所有HSC均已活化.在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞,倍增时间约75 h,可表达结蛋白、α-SMA以及除Ⅳ型胶原外的多种ECM成分(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等),且传代过程中增生、ECM表达等特性均保持稳定.该细胞系已在体外培养32代(1 a以上),提示其具有永生性.结论:已成功建立永生性大鼠HSC系,该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似.
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支气管哮喘大鼠气道重构与平滑肌肌动蛋白α表达的关系
平滑肌肌动蛋白α(SMA-α)是平滑肌的主要标志物,可反映平滑肌数量及其收缩能力的改变[1].
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转化生长因子β1对人胚肺成纤维细胞平滑肌肌动蛋白α表达的影响
在肺纤维化动物模型以及人类特发性肺纤维化(IPF)中,纤维化肺组织局部不仅转化生长因子β1(TGF-β1)水平升高,而且还聚集了大量表达平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的肌成纤维细胞.肌成纤维细胞与肺纤维化进展过程密切.本研究拟探讨外源性TGF-β1对人胚肺成纤维细胞α-SMA蛋白和mRNA表达水平的影响.
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肺内原发性神经鞘瘤一例
患者男性,14岁,因盗汗1年余,咯血6 d入院。患者于1998年初出现夜间盗汗,无咳嗽、咳痰、胸痛、发热等症状。1999年12月17日突感咽部不适,随即咯出鲜血约20 ml,次日又咯血2次,共约10 ml。12月23日就诊收入我院。体检:无发热,浅表淋巴结未扪及肿大,气管居中,右胸前2、3肋间扣诊呈浊音,呼吸音减弱,两肺未闻及明显干湿音。X线胸片示:右上肺块影,胸部CT示:右肺上叶前段块状阴影,约5.0 cm×4.0 cm,边界清楚,无毛刺,密度均匀,内有数个小点状钙化灶,增强扫描肿块呈均匀轻度强化。遂行右肺上叶切除术,术中见肿瘤位于右肺上叶内,质中偏硬,边界尚完整,纵隔及气管无异常,纵隔未见肿大淋巴结。 病理检查:切除肺叶组织大小为11.0 cm×6.5 cm×4.0 cm,切面见近肺门处有一灰白色球形肿块,直径 4.0 cm,肿块切面灰白间灰黄色,质中,边界清楚(图1)。镜下见瘤细胞呈长梭形,胞浆较丰富,红染,核卵圆形或杆状,染色质细而疏松,核仁小,瘤细胞呈漩涡状、丛状或密集成束平行排列,胞核呈栅栏状结构(图2),部分区域瘤细胞稀少,呈星网状,排列疏松零乱,细胞小梭形或圆形,核染色深。免疫组化染色:S-100蛋白阳性,神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)阴性,平滑肌肌动蛋白(Actin)血管平滑肌阳性,瘤细胞阴性。电镜:瘤细胞梭形,核卵圆形或杆状,胞浆内可见粗面内质网、线粒体及一些退变的细胞器,瘤细胞膜外见有基膜包绕,细胞外间隙可见典型的长间距纤维胶原,即卢氏小体(Luse bodies)。病理诊断:右肺上叶原发性神经鞘瘤。
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肺原发性血管外皮细胞瘤一例
患者,女,30岁,已婚,农民,因咳嗽2个月,反复发热1个月于2000年5月11日入院。入院查体:体温39 ℃,呼吸20次/min,脉搏80次/min,血压90/69 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),浅表淋巴结不肿大,双肺散在干湿性音,左下肺呼吸音稍弱,心脏及腹部无异常。外院CT示:左下肺块影,并与胸壁粘连。纤维支气管镜检查可见左下叶粘膜充血,炎症改变,活检标本(苏木素-伊红染色)无异常。CT引导下行经皮肺活检术,病理切片(苏木素-伊红染色)结合免疫组化[波形蛋白(+)、神经元特异性烯醇化酶(-) 、嗜铬素A(-)、溶菌酶(-) 、角蛋白(-) 、Ⅷ因子(-) 、平滑肌肌动蛋白(-)],考虑为左下肺血管外皮细胞瘤(低度恶性)。经外科手术切除肿瘤,其大体标本示(肉眼观):离肺门残端3 cm处可见一7 cm×6 cm×3 cm结节状肿物,突出肺表面,无包膜,边界清楚,无明显粘连,质软,切面呈灰白色,鱼肉样,部分区有出血、坏死;病理切片(苏木素-伊红染色)示:瘤组织由梭形、椭圆形细胞构成,其内有薄壁血管腔隙,衬以单层内皮细胞,瘤细胞围绕血管周围,异型性显著,胞核大,不规则,核膜粗糙,核仁可见,核分裂像多见,并见病理性核分裂像(图1,2),结合网织染色(图3),诊断为肺血管外皮细胞瘤(低度恶性)。