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慢性乙型肝炎患者相关自身抗体与血清乙型肝炎病毒DNA含量的相关性研究
近年研究发现,慢性乙型肝炎时可出现如抗核抗体(ANA)、抗线粒体抗体(AMA)和抗平滑肌抗体(SMA)等多种非特异性自身抗体[1,2],研究乙型肝炎病毒(HBV)感染与自身免疫的关系,将有助于探讨HBV发病机制,对于慢性乙型肝炎的治疗具有重要的意义.本实验通过对慢性乙型肝炎患者血清中ANA、AMA、SMA的检测,比较其与HBV-DNA含量的关系,并进一步分析其特征.
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大花红景天的抗辐射损伤作用
电离辐射可引起机体多种组织和器官的损伤,甚至诱发细胞突变、癌变、致死等严重后果.利用天然植物中的有效活性成分增强机体抵抗力,防止或减轻辐射对人体健康的危害,在辐射防护中具有越来越重要的地位.
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Cyclin Dl、DNA倍体和假尿嘧核苷与胃癌生物学行为关系的研究
目的:探讨Cyclin Dl、DNA倍体和假尿嘧核苷与胃癌生物学行为的关系,进一步认识三者在胃癌发生、发展及转移过程中的作用与意义.方法:应用流式细胞技术(FCM)以及高效液相色谱(HPLC)分析,对46例胃癌患者、56例慢性胃炎患者(浅表性20例,萎缩性16例,萎缩+不典型增生20例)及30例正常对照者胃粘膜和癌组织中Cyclin Dl的表达、DNA倍体与含量以及血尿和冒粘膜组织中假尿嘧啶核苷(PU)水平变化,进行定量分析,同时进行细胞形态学研究,并追踪随访监测观察.结果胃癌组Cyclin Dl阳性表达率、DNA异倍体率、DNA及PU含量显著高于其他各组(P＜0.001);不典型增生组Cyclin Dl阳性表达率、DNA异倍体率也明显高于正常对照及浅表性胃炎组(P＜0.01);胃癌患者血、尿中PU水平显著高于其他各组(P＜0.001);Cyelin Dl过度表达与胃癌的临床病理特征无关(P＞0.05);DNA异倍体率、DNA含量与胃癌分化程度及Lauren's分型有关(P＜0.05),但与有无淋巴结转移和TNM分期无关(P＞0.05);PU值与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴转移有关,但与Lauren's分型无关.Cyclin Dl过度表达与DNA倍体和含量、PU水平呈正相关.结论:Cyclin Dl表达、DNA异倍体与PU量变不仅参与了胃癌的发生、发展过程,而且影响胃癌的生物学行为及其预后.
关键词： 胃癌:Cyclin Dl表达 DNA倍体 DNA含量 假尿嘧啶核苷 生物学行为 -
针灸对环磷酰胺化疗小鼠骨髓细胞DNA含量动态变化的影响
目的:通过观察针灸对环磷酰胺(CTX)化疗小鼠骨髓细胞DNA含量的影响,探讨针灸改善化疗后骨髓抑制、升高外周血白细胞的分子生物学机制.方法:将昆明种雄性小鼠160只按体质量随机分为正常组、模型组、针刺组、艾灸组,每组40只.用CTX建立骨髓抑制模型.模型成功后,每天定时对针刺组、艾灸组小鼠“大椎”“膈俞”“肾俞”“足三里”给予针刺、艾灸治疗,连续6d.正常组、模型组每日陪同抓取固定,不治疗.镜检外周血白细胞数、流式细胞仪检测各组小鼠骨髓细胞G1期、G2期DNA含量,进行数据统计分析.结果:针刺和艾灸可使CTX小鼠外周血白细胞提前1天回升并提前1天超过基础水平;针刺和艾灸可以上调骨髓细胞G1期、G2期DNA含量,在治疗第5天针刺组、艾灸组骨髓细胞G1期、G2期DNA含量高于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:针刺和艾灸可以通过上调CTX小鼠骨髓细胞G1期、G2期DNA的含量,加速骨髓细胞DNA的修复,改善化疗所致骨髓细胞增殖、分裂受抑制的状态,发挥提升外周血白细胞,维护造血功能的作用.
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印度人参根提取物对免疫低下小鼠免疫功能的影响
目的:印度人参根提取物(IRRE)对免疫低下小鼠的免疫调节作用.方法:给免疫低下小鼠灌胃印度人参根提取物5,2.5,0.85 g·kg-1体重,观察其对免疫低下小鼠免疫功能的影响.结果:印度人参根提取物可减缓由环磷酰胺引起的生长缓慢和脏器指数下降,对小鼠迟发型变态反应和抗体生成细胞有增强作用,在刀豆球蛋白A(ConA)刺激的淋巴细胞转化实验中,印度人参根提取物各剂量组显著高于环磷酰胺组(P<0.05).各剂量组骨髓DNA含量、血清-氧化氮(NO)含量显著高于空白组和环磷酰胺组,但磷酸酶活性变化不大.结论:印度人参根提取物对由环磷酰胺导致的巨噬细胞吞噬功能下降和脾脏损伤有一定恢复能力,能有效保护环磷酰胺所导致的骨髓抑制作用.
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食管癌患者淋巴结转移灶DNA含量测定在预后判断中的意义
为了探讨食管癌患者癌周淋巴结转移(LNM)灶细胞DNA含量及其相关指标测定的预后意义,本文采用流式细胞术对64例食管癌癌周LNM灶细胞DNA含量进行检测,并对癌周LNM灶细胞的细胞生物学特性和患者预后的关系进行分析.食管癌癌周LNM灶细胞的DI值、H-检出率、SPF和PI均显著高于相应的对照组淋巴结,Apo却显著低于对照组;癌周LNM灶DNA二倍体者、倍体同质体者、SPF降低者、PI降低者、Apo升高者的术后生存期和5年生存率均显著高于DNA异倍体者、倍体异质体者、SPF升高者、PI升高者和Apo降低者.随癌周淋巴结转移阳性率的升高,患者生存期和5年生存率均逐渐降低,部分呈显著负相关关系. 结论:食管癌癌周LNM灶细胞DNA倍体变化是恶性肿瘤的重要生物学特性之一,其生物学特性和患者预后关系十分密切.因此,癌周LNM灶细胞的生物学参数可作为判断食管癌患者预后的重要参考及量化指标.
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胸水脱落细胞DNA含量及VEGF表达评定对肺鳞癌胸腔积液患者预后的预测价值
目的 评估胸水脱落细胞DNA含量及VEGF表达评定对肺鳞癌胸腔积液患者预后的预测价值.方法 于2011年3月至2014年3月采用定群抽样的方法连续收集登记住我院的肺鳞癌胸腔积液患者.对患者的胸水脱落细胞DNA含量采用分光光度法进行测定;VEGF表达的定量采用免疫组化法完成.结果 患者胸水脱落细胞DNA含量及VEGF表达情况及其与病程的相关性分析显示,胸水脱落细胞异倍体DNA含量及VEGF表达丰度值均与患者的生存时间呈负相关;年龄、BMI、职业、医疗保险情况、吸烟年限(年)、吸烟量(支/周)、胸水脱落细胞异倍体DNA含量以及胸水脱落细胞VEGF含量是患者中位生存时间的影响因素.结论 高水平的胸水脱落细胞异倍体DNA含量以及VEGF含量是肺鳞癌胸腔积液患者预后不良的危险因素,具有一定的临床预测价值.
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胃癌DNA含量与E-cad、EGFR表达的关系及其意义
目的探讨胃癌组织DNA含量与E-cad、EGFR表达的关系,评价其在浸润、转移潜能及预后判断中的作用.方法应用图像分析仪及SP免疫组化法检测30例正常胃黏膜上皮、30例不典型增生和50例胃癌组织DNA含量与E-cad、EGFR蛋白表达情况.结果①正常胃黏膜上皮、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级不典型增生及胃癌组的DI、PI、S%、＞5c%逐渐增高,与胃癌分期、淋巴结转移显著相关(P＜0.01).②E-cad在正常胃黏膜上皮阳性表达率100%,EGFR呈阴性表达;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级不典型增生及胃癌E-cad阳性表达率逐渐降低,EGFR的阳性表达率逐渐升高,且差异显著(P＜0.05);E-cad表达减弱、EGFR表达升高与胃癌分化差、淋巴结转移显著相关(P＜0.01).③E-cad表达阴性的胃癌DNA指数及EGFR表达水平显著高于E-cad阳性(P＜0.01).结论检测DNA含量及E-cad、EGFR蛋白表达有助于胃癌的早期诊断及转移潜能和预后的判断.
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激光照射对弓形虫速殖子作用的流式细胞分析
用流式细胞术(FCM)检测分析了激光照射对弓形虫RH株速殖子的作用.结果显示,激光照射后弓形虫速殖子群体DNA含量分布发生改变, DNA含量的第1道数峰值(平均值)左移,第1峰值分布范围内速殖子数占总速殖子数百分率增加,3.5 W和4.5 W剂量照射组与对照组相比差异存在显著性(P<0.05).提示激光照射能抑制弓形虫DNA的合成,减少弓形虫群体DNA的含量.
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家蝇幼虫抗菌肽对弓形虫速殖子DNA的损伤作用
目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽,观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,分离纯化并筛选出抗弓形虫作用的抗菌肽,采用流式细胞术(FCM)分析其对弓形虫速殖子DNA含量的影响.结果 通过DNA含量直方图可以看出,实验组的速殖子数少于对照组,且两组分布参数存在较明显差异.正常的弓形虫速殖子处于M1期的较M2期的少,抗菌肽组则相反,处于M1期的较M2期的多,且M1峰值明显前移.结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,其可通过抑制弓形虫DNA的合成杀伤弓形虫.
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多发性骨髓瘤细胞DNA含量和细胞周期分析
本研究探讨MM的遗传学背景和细胞增殖特点.应用直接免疫磁珠法分选19例多发性骨髓瘤(MM)患者的骨髓瘤细胞,用流式细胞术检测骨髓瘤细胞的DNA含量和细胞周期.结果表明:19例患者中4例骨髓瘤细胞为超二倍体,15例骨髓瘤细胞均为二倍体;正常人浆细胞处于S+G2/M期细胞的比例为(1.15±0.60)%,MM患者骨髓瘤细胞处于S+G2/M期细胞比例为(10.06±12.60)%,两组相比具有显著性差异(p=0.001).初治组患者出现超二倍体比例为11.76%,复治组患者为100.00%,两组相比有显著性差异(p=0.035);初治组骨髓瘤细胞处于S+G2/M期的比例为(7.12±4.98)%,复治组为(35.10±32.56)%,两组相比有显著性差异(p=0.001).结论:MM患者骨髓细胞DNA含量和细胞周期分布的变化提示了该病遗传背景的复杂性和细胞增殖的异常,而此与病程可能具有一定的相关性.
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化疗对非小细胞肺癌PCNA表达及肿瘤细胞DNA含量的影响
目的:研究化疗对非小细胞肺癌PCNNA表达和肿瘤细胞DNA含量的影响,及PCNA阳性指数与DNA含量的关系.方法:用免疫组化S-P法检测两配对组各18例非小细胞肺癌PCNA表达,并用图像分析系统进行肿瘤DNA分析、倍体测量.结果:化疗后组与对照组肿瘤在PCNA阳性指数(PI)、DNA指数、平均DDNA质量、S期比率及＞5C细胞百分比均有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01).且PI与DNA含量之间呈正相关关系.但两组间异倍体肿瘤率无显著差异(P＞0.05).结论:联合化疗影响肿瘤细胞PCNA表达及DNA含量,即降低了肿瘤的增殖活性.
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组织切片对细胞核DNA含量检测的影响
目的 探讨组织切片对图像分析仪测量细胞核DNA含量的影响.方法 选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片和肝组织切片,肝组织切片分成两部分,分别用于Feulgen染色和石蜡包埋.包埋后的组织采用垂直切片,图像分析仪测量切片实际厚度,依据切片机标识厚度和测量厚度分别分组,TIGER细胞图像分析仪分剐测量肝细胞涂片和组织切片内肝细胞核的积分光密度(IOD).结果 肝细胞涂片内各DNA含量倍体肝细胞核IOD间的比值接近2和4,IOD之变异系数(CV值)<3.5,肝组织切片IOD间比值明显偏离2和4,IOD之CV值均>6;切片机标识厚度为4、6、8和10μm组织切片平均测量厚度分别为6.75、7.18、6.96和7.59 μm,测量厚度大值为9.25μm,小值为4.62μm;依据切片机标识厚度分组中不同切片厚度相同DNA含量倍体肝细胞核的IOD值差异均无统计学意义;依据测量厚度重新分组后5、6微米组与7、8、9微米组IOD值间的差异具有统计学意义(P<0.05).结论 组织切片的实际厚度与切片机标识厚度间存在明显差异,本实验方法可较准确地判断组织切片厚度;厚组织切片测量结果优于薄组织切片,但与细胞涂片相比,厚组织切片仍难以准确测量细胞核DNA含量,DNA含量检测时应优先采用细胞涂片.
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滤光片对细胞核DNA含量检测的影响
目的 探讨滤光片对图像分析仪测量DNA含量的影响.方法 选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片,Feulgen染色和天青B染色,显微镜与摄像机之间分别插入400 nm、560 nm、590 nm、600 nm、626 nm、670 nm带通滤光片和中灰滤光片,利用TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞核的积分光密度(IOD)与平均光密度(AOD)和面积.结果 肝细胞核在Feulgen染色法中呈紫红色,天青B染色法呈蓝色.Feulgen染色和天青B染色分别采用560 nm和600 nm的带通滤光片时,能够测得大的IOD值,不同倍体肝细胞核间的比值接近2、4,CV值低.与天青B染色方法相比,Feulgen染色法中不同倍体间的比值更接近2、4,CV值更低.结论 适宜的滤光片可提高细胞核DNA含量测量结果的精确性和准确性.Feulgen染色测量结果精确性和准确性明显高于天青B染色,应作为首选的染色方法.
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应用凝胶成像分析系统定量测定DNA含量的检测范围
目的 探讨用凝胶成像分析系统进行DNA定量的DNA含量的检测范围.方法 将已知含量的质粒DNA样本稀释成不同含量的DNA样本,进行琼脂糖凝胶电泳.利用凝胶成像系统进行观察及图像采集,并应用IMAGE J软件对DNA的电泳图谱进行灰度分析,用EXCEL软件对已知含量的DNA的灰度值与含量之间进行相关性分析,建立线性方程式.用上述线性方程式计算出样本的DNA含量.结果 DNA灰度值与DNA含量之间呈正相关关系,但不成正比关系;DNA灰度值与DNA含量在一定范围内呈现良好的线性关系.通过所建立的线性关系式可以确定DNA含量的检测范围,在此范围内可较好地进行DNA的定量.结论 通过建立DNA灰度值与DNA含量之间的良好线性关系,可以较好地确定凝胶成像分析系统进行DNA定量的DNA含量的检测范围.
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光衍射现象对细胞核DNA含量检测的影响
利用图像分析仪测量小鼠肝细胞涂片内单个肝细胞核的DNA含量,探讨图像分析仪在测量显微图像的光度时光衍射现象所导致的测量误差.本文选取10只成年健康雄性小鼠的肝组织涂片,Feulgen染色,TIGER细胞图像分析仪测量单个肝细胞核的DNA含量并分析其DNA含量倍体;结果显示,(1)涂片内肝细胞核分布均匀,轮廓清晰,呈紫红色;(2)不同小鼠同一DNA含量倍体的肝细胞核的DNA含量大致相同;(3)二、四、八倍体肝细胞核的DNA含量比值均大于/[Dept.1]等于2或4,二、四、八倍体肝细胞单个核DNA含量的CV值均小于10%;(4)同一小鼠不同DNA含量倍体肝细胞核的平均光密度值差异较小.结论:光衍射现象可导致DNA含量的测量结果偏低,其偏低的程度随待测细胞核的面积增加而减小.
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染色质浓缩对细胞核DNA含量检测的影响
目的 利用三种不同方法制备小鼠肝细胞涂片,探讨染色质浓缩对图像分析仪测量DNA含量的影响.方法 本文选取10只成年健康雄性小鼠,采用传统涂片、液基制片法和甲醛固定后液基制片法制备小鼠肝细胞涂片,Feulgen染色,TIGER细胞图像分析仪分别测量三种涂片内肝细胞核的积分光密度、平均光密度和面积.结果 三种涂片内肝细胞核分布均匀,轮廓清晰,呈紫红色,与传统涂片法相比,液基法内肝细胞核面积明显减小,染色质高度浓缩;相同倍体的肝细胞核在传统涂片中面积大,平均光密度低,各倍体间的比值接近2和4,积分光密度CV值低(＜3.5).固定法和液基法平均光密度明显升高,各倍体间比值明显偏离2和4,积分光密度CV值＞6.结论 不同制片方法可导致同一类型、处于相同功能状态的细胞核染色质浓缩程度产生明显差异,染色质浓缩可导致平均光密度值升高,积分光密度值降低,测量结果的精确性和准确性降低.
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DNA定量检测与胃癌预后的关系
目的 探讨DNA含量与胃癌预后的关系.方法 采用IMS-2000型癌细胞DNA分析系统测定163例胃癌患者的DNA指数、平均CV值、DNA主峰面积、DNA主峰质量(pg)、平均DNA质量(pg)、G0G1期细胞百分率、S期细胞百分率、G2M期细胞百分率以及5倍体超过率等9项指标,并进行Cox比例风险回归分析.结果 Cox比例风险回归模型单因素和多因素分析结果显示,这9项指标与生存率之间的差别均无统计学意义(P＞0.05).结论 DNA含量与胃癌患者术后生存率无相关性.DNA含量不能作为预测胃癌预后的独立指标.
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组织原位测算单个肝细胞核的DNA总量
目的 再次探讨利用图像分析系统在组织切片原位测算以单个完整细胞(核)体积为单位的化学物质总量方法的可靠性.方法 选取10只成年健康雄性昆明小鼠,每只小鼠按常规制片方法制作4 μm和11 μm两种厚度的肝组织切片各一张,改良Feulgen染色,应用细胞图像分析仪在组织原位测量和计算以单个完整二倍体、四倍体和八倍体肝细胞核体积为单位的DNA总量.结果 组织原位测算的以单个完整二倍体、四倍体、八倍体肝细胞核体积为单位的DNA总量间的比值基本上呈2或4的倍数关系.结论 应用细胞图像分析仪在组织切片原位通过合适的抽样和测量计算,可较准确地获得以单个完整细胞(核)体积为单位的化学物质总量.
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细胞DNA图像分析技术的应用方法
本文结合多年软件开发和图像分析仪的应用实践,介绍了利用图像分析仪进行细胞DNA含量的定量分析的具体步骤,对照明光源不稳、照射视场不匀、系统吸光度线性不好带来的误差,提出切实可行的减少误差的办法.通过对鸡红细胞核、肝细胞核DNA含量的定量结果,得到了其二、四、八倍体的倍体关系直方图.
