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家蝇幼虫中与抗菌功能相关的蛋白和多肽的分析
目的研究家蝇幼虫体内与抗菌功能相关的蛋白和多肽.方法对家蝇3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激、超声4种处理,于处理后6、16、24、48、65h分别收集提取耐热水溶蛋白,比浊法测定抗菌活性,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白和多肽.结果4种处理均能诱导家蝇幼虫产生抗菌物质,其中表观分子量为20kDa、22kDa的蛋白对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌均有抗菌作用,13kDa、16kDa、26kDa蛋白只对上述两种菌中的一种有作用,37kDa、44kDa的蛋白对抗菌作用具有显著负贡献.结论家蝇幼虫经过诱导后,会有多种与抗菌活性相关的蛋白和多肽开始表达或加强表达,它们彼此合作,共同建立一个完整的防御体系.
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家蝇幼虫分泌型抗菌肽对细菌感染小鼠的影响
目的:探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽对细菌感染小鼠的影响.方法:选用BALB/c小鼠,随机分为3组:抗菌肽预防性干预组(小鼠感染前3d预防性给抗菌肽10 mg·kg-1·d-1)、治疗性干预组(感染后予抗菌肽10 mg·kg-1)和模型组(感染后予生理盐水),小鼠细菌感染方式为ip大肠杆菌液,给抗菌肽方式亦为ip给药,设正常小鼠为对照.分别检测以下指标:感染后4,12 h各组小鼠腹腔液细菌数量；感染后4,8,12,24 h小鼠外周血内毒素、一氧化氮(NO)含量及鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)等细胞因子水平.结果:预防性给抗菌肽能明显减少小鼠腹腔液的细菌数量,同时小鼠外周血TNF-α,IL-6,NO及内毒素含量均明显低于模型组；治疗性给抗菌肽组小鼠腹腔液细菌数及外周血内毒素含量亦明显低于模型组,但对其他指标的干预作用较预防性给抗菌肽组弱.结论:家蝇幼虫分泌型抗菌肽ip给药对大肠杆菌ip感染小鼠具有一定的抑制作用.
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家蝇幼虫抗菌肽对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响?
为了更全面的探究家蝇抗菌肽的抗肿瘤作用，本文从肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移的角度研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用。通过针刺诱导家蝇三龄幼虫、低温离心、固相萃取后冻干获取抗菌肽粗提物，将所获抗菌肽调整至不同浓度进行CCK8细胞增殖实验。并通过细胞划痕实验和细胞侵袭实验判断家蝇抗菌肽对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响。实验结果显示家蝇抗菌肽能够明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖，且作用效果与浓度呈剂量依赖特点。低浓度的抗菌肽（60μg／mL）能有效抑制肝癌HepG2细胞迁移及侵袭。
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家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响
本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响.采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响.并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响.Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象.因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生.
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家蝇幼虫抗菌肽粗提物对原代FBL-3细胞增殖周期的影响
为利用家蝇幼虫抗菌肽粗提物作用于原代FBL-3肿瘤细胞,探究其对原代FBL-3细胞周期的影响,本文通过构建小鼠肿瘤模型,获取原代FBL-3肿瘤细胞,之后用家蝇幼虫抗菌肽粗提物作用于该肿瘤细胞,运用流式细胞术检测每个实验组的细胞增殖周期的分布情况.经家蝇幼虫抗菌肽粗提物作用后的FBL-3原代肿瘤细胞,其细胞增殖周期发生了如下改变:G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低,细胞增殖指数降低,与对照组比较具有统计学意义.因此得出结论,家蝇幼虫抗菌肽粗提物可以通过阻滞原代FBL-3肿瘤细胞的增殖周期来诱导细胞凋亡.
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家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨
目的观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导,探讨其抗肿瘤作用机制.方法流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响;HE染色法观察细胞凋亡形态,并测定细胞凋亡指数(AI).结果在0.10%组A375的G2/M期升高,S期降低.0.50%组G0/G1期、G2/M期和AI/PI(增殖指数)显著增加,S期及PI明显减少.2.50%组S期、PI、AI/PI及细胞凋亡率(Ap)显著增高,G0/G1期大大减少.12.50%组G2/M期、PI、AI/PI及Ap显著增高,G0/G1期和S期明显下降.结论家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用;家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长.
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家蝇幼虫血细胞荧光染色法的形态观察
目的 用荧光染色法结合相差显微镜观察家蝇3龄幼虫血细胞的形态、分类.方法 应用吖啶橙和碘化丙啶对家蝇3龄幼虫血细胞进行染色,荧光显微镜结合相差显微镜观察血细胞形态特征并进行分类.结果 (1)家蝇3龄幼虫血细胞可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5类.其中浆血胞又分为大核浆血胞和小核浆血胞2种.(2)家蝇幼虫原血胞在相差显微镜下容易辨认,通过荧光染色后特征不显著.(3)家蝇幼虫粒血胞与大核浆血胞、珠血胞与小核浆血胞在相差显微镜下容易混淆,但在荧光显微镜下很好区分.结论 用荧光染色法结合相差显微镜能揭示未知的昆虫血细胞特征,并能正确地将家蝇3龄幼虫血细胞分为5类.
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滞育对家蝇幼虫蛋白质和核酸的影响
目的 观察家蝇3龄幼虫滞育前后血淋巴中蛋白质及组织匀浆脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制.方法 低温诱导家蝇3龄幼虫滞育,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳观察非滞育组及各滞育组血淋巴蛋白组分变化;紫外分光光度计测定非滞育组及各滞育组RNA和DNA含量.结果 (1)滞育组和非滞育组家蝇幼虫蛋白条带数目无变化,只是滞育20 d组的蛋白含量明显高于非滞育组,其中以85 kd处明显,光密度值为203 475.69.(2)各滞育组DNA均比非滞育组明显降低;滞育10d组、15 d组RNA明显降低,滞育20 d组则明显升高;RNA/DNA在滞育10 d组、15 d组明显降低分别为0.598、0.546μg/mg,滞育20d组则明显升高为1.337μg/mg.结论 滞育家蝇幼虫体内可能无滞育关联蛋白(DAP)的存在,RNA/DNA比值的降低和升高可作为家蝇幼虫滞育开始及滞育结束的信号.
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大肠埃希菌感染后家蝇幼虫血清中3种酶活性的变化
目的 探讨大肠埃希菌感染对家蝇3龄幼虫血清中3种酶活性的影响.方法 (1)用比色法分别测定感染后不同时间家蝇3龄幼虫血清中酸性磷酸酶(ACP)及过氧化氢酶(CAT)活性的变化.(2)用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定感染后不同时间家蝇3龄幼虫血清中二酚氧化酶(DPO)活性的变化.结果 (1)大肠埃希菌感染后各时间组血清中ACP及CAT活性显著高于对照组(P<0.01).其中ACP及CAT活性分别在感染8和16 h达高峰,其值分别为(107.9±3.5)U/100 ml和(174.6±4.7)U/ml,然后逐渐下降.(2)家蝇幼虫体内存在DPO,且感染后4 h DPO活性上升,16 h达高峰,其值为98 805.39,之后下降.结论 大肠埃希菌感染后家蝇3龄幼虫血清中ACP、CAT及DPO活性均增强,提示这3种酶在防御微生物感染过程中发挥了重要作用.
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不同诱导源诱导家蝇幼虫抗菌蛋白效果的比较
目的比较5种诱导源所诱导产生家蝇幼虫抗菌蛋白的抗菌活性,观察不同诱导源对家蝇幼虫抗菌蛋白产生的诱导效果.方法用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、大肠埃希菌脂多糖、紫外线及热诱导家蝇幼虫,在诱导后不同时间提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间,并比较各诱导组高峰时间产生抗菌蛋白的抗菌活性.结果各诱导组诱导家蝇幼虫产生抗菌蛋白达大活性时间为诱导后36～48 h(热诱导后家蝇幼虫很快化蛹,未观察抗菌蛋白产生高峰时间);金黄色葡萄球菌诱导后的抗菌蛋白抗菌活性佳,热诱导后的抗菌蛋白抗菌活性也较未诱导组好.结论各诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间不同;细菌诱导的抗菌蛋白抑菌效果好,热诱导也是一种较理想的诱导方法.
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家蝇幼虫抗菌肽对弓形虫速殖子DNA的损伤作用
目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽,观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,分离纯化并筛选出抗弓形虫作用的抗菌肽,采用流式细胞术(FCM)分析其对弓形虫速殖子DNA含量的影响.结果 通过DNA含量直方图可以看出,实验组的速殖子数少于对照组,且两组分布参数存在较明显差异.正常的弓形虫速殖子处于M1期的较M2期的少,抗菌肽组则相反,处于M1期的较M2期的多,且M1峰值明显前移.结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,其可通过抑制弓形虫DNA的合成杀伤弓形虫.
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家蝇幼虫抗菌肽对K562细胞膜的质量浓度阈值作用
目的 探讨家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用.方法 通过针刺感染大肠埃希菌诱导家蝇3龄幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化家蝇3龄幼虫抗菌肽,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法和光镜观察法筛选对K562有抑制作用的抗菌肽；用不同质量浓度的峰5、峰8处理K562细胞,采用台盼蓝拒染法测定细胞存活率和生长曲线的变化；用光学显微镜和荧光显微镜检测细胞膜形态的变化；用荧光分光光度计检测细胞膜荧光素的渗漏；用激光共聚焦显微镜观察细胞膜的损伤程度.结果 低质量浓度( ＜50 μg/ml)对细胞存活率无明显影响,细胞整体形态变化不大,细胞荧光素渗漏较少[(18.95±0.05)～(22.49±0.68)],细胞损伤甚微；高质量浓度(≥50 μg/ml)使细胞存活率明显下降,细胞形态变化逐渐增大,细胞荧光素渗漏较多[(62.77±4.08)～(70.81±0.18)],甚至大分子荧光素Dextran-FITC可以通过.结论 家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用存在质量浓度阈值,低质量浓度时可引起膜通透性增加,高质量浓度时可引起细胞膜严重损伤.家蝇幼虫抗菌肽可能通过直接杀伤作用抑制K562细胞生长,其作用机制首先是通过对膜作用,然后可能进一步对膜作用从而使膜上孔洞不断扩大或者进入细胞后经过其他途径抑制K562细胞生长.
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家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白对Hela肿瘤细胞抑制作用的形态学观察
目的 研究家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白(anticancer protein from Musca domestica larva hemolymph,MAC-1)对体外培养的人官颈癌Hela细胞抑制作用引起的形态学改变.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法、光学显微镜、HE和吖啶橙(AO)染色、透射电镜(SEM)的方法检测MAC-1对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及形态学改变.结果 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性,同时呈时间依赖性.MAC-1 12.5 μg/ml作用12h后在倒置显微镜、HE及AO染色和透射电镜均观察到典型细胞凋亡形态变化.结论 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用.
关键词： 家蝇幼虫 血淋巴 蛋白 人宫颈癌HeLa细胞株 细胞凋亡 -
家蝇幼虫血细胞的分类及感染后的形态变化
目的 用不同方法观察家蝇三龄幼虫血细胞的分类、各类血细胞计数及感染大肠杆菌后血细胞的形态变化.方法 (1)应用姬氏染色结合相差显微镜对家蝇三龄幼虫血细胞形态进行观察并分类.(2)倒置显微镜下观察家蝇三龄幼虫血细胞总数(THC),姬氏染色法计数各类血细胞(DHC).(3)观察大肠杆菌感染后家蝇幼虫血细胞形态的变化.结果 (1)家蝇三龄幼虫血细胞可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5类.其中浆血胞又分为大核浆血胞和小核浆血胞两种.(2)家蝇三龄幼虫血细胞总数为7090±651/μl,其中原血胞约1.2%、浆血胞约50.4%、粒血胞11.4%、珠血胞约36.2%、类绛血胞约0.8%.(3)感染大肠杆菌后,浆血胞发生空泡、细胞变形等变化.结论 家蝇三龄幼虫血细胞分为5类,血细胞总数为7090±651/μl,其中浆血胞是主干血细胞,并参与感染后的细胞免疫.
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滞育家蝇幼虫糖的变化
目的 观察家蝇幼虫滞育前后血淋巴中总糖、海藻糖、糖原的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制.方法 低温诱导家蝇幼虫滞育,用蒽酮比色法测定滞育10d、15d、20d组及非滞育组血淋巴总糖、海藻糖、糖原的含量.结果 滞育组与非滞育组比较,(1)家蝇幼虫血淋巴总糖含量滞育10d组显著升高,15d组、20d组则降低.(2)血淋巴海藻糖含量滞育10d组、20d组明显升高,15d组差异无显著性.(3)血淋巴糖原含量滞育10d组、15d组降低,20d组则升高.结论 家蝇滞育幼虫的糖醇积累型属于海藻糖积累型.
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药渣对家蝇幼虫生长发育和免疫功能的影响
目的 分析苗药头花蓼药渣对家蝇幼虫生长发育和免疫功能的影响,评价药渣饲养家蝇幼虫的可行性.方法 药渣饲养家蝇幼虫,连续传代,计算平均体重增长速度、化蛹率和羽化率;测定家蝇幼虫血淋巴蛋白浓度;进行家蝇幼虫血淋巴、研磨液SDS-PAGE分析;麦麸饲养家蝇幼虫作为对照组.结果 药渣组化蛹率、羽化率均高于麦麸组(t=2.16,t=2.15,P＜0.05);药渣组蛋白浓度为0.578 mg/ml,麦麸组蛋白浓度为0.240 mg/ml;麦麸组、药渣组家蝇幼虫血淋巴蛋白分子量主要集中在10～17 KD、17～ 26 kD和72～95 KD.结论药渣促进家蝇幼虫生长发育,提高免疫功能,药渣饲养家蝇幼虫具有可行性.
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不同饲养条件对家蝇幼虫生长发育的影响
目的 用不同饲养条件饲养家蝇幼虫,研究人工饲养家蝇幼虫的方法.方法 观察不同幼虫饲养密度、含不同浓度的奶粉和白砂糖的饲料及不同光周期对家蝇幼虫生长发育的影响.结果 每50g麦麸饲养300条幼虫为宜,不能超过500条;每50g麦麸饲料中加入2g奶粉和1g白砂糖有利于家蝇幼虫的生长发育;每日光照8h以上各组的幼虫生长发育无差别,而每日光照4h组及无光照组幼虫发育受抑制.结论 家蝇幼虫饲养条件以每50g麦麸饲料中加入2g奶粉和1g白砂糖、饲养300条幼虫为宜,每日光照不少于8h.
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家蝇幼虫抗弓形虫抗菌肽分离纯化
目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化具有抗弓形虫作用的抗菌肽.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,将家蝇幼虫抗菌肽进行分离纯化,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和血细胞计数法筛选对弓形虫速殖子有抑制作用的抗菌肽.结果 经Resource S阳离子柱和Superdex G75凝胶柱层析后,筛选出2种对弓形虫速殖子有杀伤作用的抗菌肽.结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,而且不止一种,但其效果有所不同.
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家蝇幼虫滞育条件优化
目的 对家蝇幼虫滞育条件(温度、光周期)进行优化.方法 观察不同温度、光周期下3龄幼虫停止进食的时间,确定滞育时间;研究亲代、子代不同光周期和温度对子代滞育的影响,优化诱导家蝇幼虫滞育的条件.结果 3龄幼虫停止进食的时间只与温度有关,与光周期无关;发育起始温度为9.81℃;光周期(L 12:D 12)和两代均低温通常会有高滞育率,亲代和子代都在L 12:D 12(20℃)时滞育率较高,两代长日照或/和两代高温的情况下饲养的幼虫滞育率几乎为零;经统计分析,亲代在20℃,L 12:D 12条件下产卵孵化的子代在15℃、L 12:D 12条件下滞育率较高.结论 温度是家蝇幼虫停止进食的主要影响因素,人工诱导家蝇幼虫滞育的佳方案为在20℃,L 12:D 12培养亲代,再将其子代培养于15℃,L 12:D 12.
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家蝇幼虫抗菌蛋白的诱导及抗菌特性
目的用不同诱导源诱导家蝇幼虫,观察抗菌蛋白产生的规律及其抑菌特性,为进一步研究家蝇幼虫抗菌蛋白的产生及应用提供实验依据.方法用4种诱导源诱导后不同时间的组织匀浆提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间及各诱导组抗菌蛋白的抑菌特性.结果各诱导组抗菌蛋白的抑菌活性明显高于对照组,各诱导组抗菌蛋白的产生在诱导后36～48h达高峰;各诱导组产生的抗菌蛋白均能抑制几种革兰阴性菌、一种革兰阳性菌和耐药菌株,但对不同细菌的抑菌活性有差别.结论不同诱导源诱导家蝇幼虫后抗菌蛋白产生的高峰时间不同、产生的抗菌蛋白抗菌谱广.
