首页 > 文献资料
-
浅谈体外诊断试剂质量体系中企业参考品的管理
通过对体外诊断检测系统的技术特性和供应方式的分析,结合目前我国体外诊断试剂行业的现状和所面临的问题,初步研究了企业参考品的质量管理体系要点,对企业建立和运行与产品相适应的质量管理体系具有参考作用,也为监管部门进行企业参考品的生产监督管理提供了技术参考.
-
肠道病毒71型抗原检测试剂参考品制备及标定
目的 制备一套EV71抗原检测试剂盒质量控制用参考品.方法 用组织培养法制备的一组肠道病毒原液及EV71病毒液,制备成10份阴性参考品、10份阳性参考品、2份灵敏度参考品及1份精密度参考品；以上样品经多人次标定后确定终结果.结果 阴、阳性参考品各10份标定结果分别为10阴及10阳；2份灵敏度参考品标定结果分别为177.97U/mL和1966.86U/mL；精密度参考品平均CV值9.29％.参考品37℃保存5天及反复冻融6次对检测结果没有影响.结论 制备的参考品经标定,并通过反复冻融、37℃热稳定性试验,检测结果稳定,可用于EV71抗原检测试剂的质量控制,保证抗原检测试剂检测结果的特异性、灵敏度及稳定性.
-
SARS病毒抗体第一代参考品的研制及初步应用
目的建立严重急性呼吸综合征(SARS)病毒抗体参考品,用于对SARS病毒抗体诊断试剂的实验室评价. 方法收集临床确诊为SARS病人血清和非SARS人群血清,用不同的SARS病毒抗体诊断试剂进行检测筛查,选择不同样品组成参考品.并用该参考品对不同试剂进行初步评价. 结果 SARS病毒IgM抗体的参考品由38份组成,其中包括11份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品6份,精密性样品1份;SARS病毒总抗体(包括IgG)由46份组成,其中包括18份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品7份,精密性样品1份. 结论初步应用结果显示该参考品确实能够反应不同试剂的质量差异.
-
细菌感染多重核酸检测试剂参考品的建立
目的 建立细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,为相关产品的质量评价提供依据.方法 选择34种可导致中枢神经系统、血液、呼吸道、肠道以及生殖道感染的致病性细菌或真菌,培养富集后应用全自动细菌鉴定及药物敏感分析系统VITEK2进行鉴定.鉴定正确的菌株,应用梯度稀释法测定浓度后进行分组混合成高浓度样本.应用全基因组第二代测序技术验证混合样本的组成情况和特异性.选择基于不同原理的多重核酸检测试剂进行协作标定,根据标定结果确定参考品的质量标准,并对参考品的稳定性进行考察.结果 本参考品由28种细菌和6种真菌混合成7支混合参考品,编号为M1～M7,其中细菌的终浓度约为1×108～1×109CFU/ml,真菌的终浓度约为1×106～1×107CFU/ml.经全基因组第二代测序技术验证,参考品的组成正确且无交叉污染情况.分别应用基于PCR-熔解曲线、等温扩增以及靶向扩增第二代测序技术的多重核酸检测试剂对参考品进行检测,结果显示本参考品经过适当稀释后能够对试剂的准确性、特异性、重复性以及低检出限等性能指标进行评价,且参考品各混合菌株间无交叉反应.稳定性研究结果表明反复冻融3次不影响本参考品的稳定性.结论 本研究建立了细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,能够应用于相关参考品的质量评价.
-
回复严舒俊医师关于结核菌素纯蛋白衍生物的剂量单位问题
早应用于结核病临床诊断的结核菌素为结核杆菌培养滤液浓缩液稀释的旧结核菌素(OT),其剂量单位采用浓缩液的稀释度,由于不同厂家制备的OT效价常不一致,1931年,由英国制备旧结核菌素参考品,1938年建立了以其活性为指标的结核菌素单位(tuberculin unit,TU).
-
肺癌相关基因突变二代测序检测试剂参考品的建立
目的:建立肺癌相关基因突变二代测序(next-generation sequencing,NGS)检测试剂参考品并制定其质量标准,用于NGS技术以细胞游离脱氧核糖核酸(cell free DNA,cfDNA)为待测样本的肺癌相关基因突变检测试剂的质量控制和评价.方法:选择携带EGFR基因G719S,E746_A750del,S768I,T790M,L858R,EML4-ALK以及ROS1-SLC34A2基因融合突变的细胞系进行培养,并对各细胞系携带的基因突变进行鉴定和突变频率测定.将细胞系DNA按适当比例混合后超声打断,模拟自然状态cfDNA,作为阳性、重复性和低检出限参考品候选样本;不携带上述基因突变的阴性细胞系DNA打断后作为阴性参考品候选样本.参考品候选样本的基因突变的频率经过定量后应用8家公司的试剂进行协作标定.根据作标定结果确定参考品的质量标准,并考察其稳定性.结果:本参考品为包含8种肺癌相关基因突变的混合参考品,由1份阳性参考品、4份阴性参考品、2份重复性参考品以及4份低检出限参考品(L1 ～L4)组成,质量标准规定对低检出限参考品L1 ～ L3检测各基因突变的低突变频率在0.7％ ～1.2％时必须检出.稳定性考核结果表明反复冻融3次不影响参考品的稳定性.结论:本研究建立了肺癌相关基因突变二代测序检测试剂参考品并制定了质量标准,能够为相关试剂的质量控制和评价提供依据.
关键词： 肺癌 细胞游离脱氧核糖核酸 参考品 二代测序 -
人类基因检测相关试剂评价国家参考品研制技术要求介绍
目的:进一步规范人类基因检测相关试剂评价国家参考品的研制工作.方法:人类基因检测相关试剂评价国家参考品是指用于人类基因检测相关试剂质量评价的参考物质.本文详细介绍了这类参考物质的原材料筛选、制备、标定、稳定性研究、包装、储存及供应方面的要求.结果与结论:人类基因检测相关试剂评价国家参考品研制过程更加清晰,管理更加规范.
-
卡介菌及其衍生制品鉴别实验用BCG DNA国家参考品的研制
目的 建立BCG DNA定性用国家参考品,供BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用.方法 以紫外分光法检测260nm和280nm的吸光度值,比较A260/280的比值,考量国家参考品BCG DNA的纯度指标;以多重PCR法检测BCG DNA 特异性缺失区RD1区是否存在,验证所制备的BCG DNA可作为定性用国家参考品,组织3家实验室对该参考品进行验证;并在不同时间,观察其稳定性.结果 所制备的BCG DNA A260/286=1.96＞1.8; BCG DNA国家参考品经多重PCR扩增BCG 缺失区RD1的产物为约200bp DNA片段,与卡介菌巴斯德株DNA结果相同,3家实验室的验证结果一致,该制品经37℃4周,4℃3个月、6个月、12个月放置后,PCR结果不变.结论该BCG DNA制品纯度高,稳定,可作为BCG DNA定性用国家参考品,在卡介苗相关制品的质量控制中,做为BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用的国家参考品.
关键词： BCG DNA 参考品 质量控制 卡介菌 卡介菌多糖核酸注射液 -
风疹病毒IgG抗体检测试剂盒国家监督抽验工作
目的:按照国家体外诊断试剂抽验工作方案,评价风疹病毒IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法和化学发光法)的质量.方法:分别使用风疹病毒IgG抗体国家参考品和企业参考品对抽验的试剂盒进行准确性、特异性、检测限和重复性项目检测.结果:使用企业参考品按照产品注册标准进行检测,17批次试剂盒的抽验合格为16批.使用国家参考品检测,检验合格为10批,其中6批次试剂盒将国家阴性参考品检测为阳性,1批次试剂盒将国家检测限参考品检测为可疑.结论:使用国家参考品和企业参考品产生了抽验结果差异,建议在今后国家体外诊断试剂监督抽验工作中,继续探讨使用国家参考品作为统一的评判标准,以加强相关产品的监管工作.
-
新一代丙型肝炎病毒抗体试剂国家参考品研究的要点与思考
目的:研制新一代丙型肝炎病毒(HCV)抗体试剂国家参考品,提高试剂的质量.方法:分析新一代HCV抗体试剂国家参考品组成及组分性能要点,促进我国HCV抗体试剂国家参考品质量提高.结果与结论:该参考品增加了HCV抗体中等强度和弱阳性样本比例,对试剂提高了HCV抗体弱阳性窗口期样本的检出能力要求,具有地域代表性及基因型代表性.提出了目前影响HCV抗体试剂国家参考品质量的主要因素.
关键词： 丙型肝炎病毒抗体试剂 参考品 -
脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂参考品的制备及标定
目的 建立脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂参考品,为脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒的性能评价提供可靠的质控品.方法 通过中和实验对血清进行确认,获得了符合要求的血清,每个型别参考品有22份样品,包含10份阳性参考品、10份阴性参考品、1份低检出量参考品、1份精密性参考品.结果 脊灰病毒IgG抗体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型阴性参考品符合率均不低于9/10,阳性参考品符合率均不低于8/10,精密性参考品变异系数均不高于15％,低检出量参考品均不低于1:8;参考品37℃放置5d,反复冻融5次后稳定性良好.结论 制备的脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂参考品经各项试验检测结果合格,可用于脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂的质控.
关键词： 脊髓灰质炎IgG抗体 参考品 质量控制 标定 -
论如何加强微生物检验质量控制
实验室间质量控制是在各实验室完成了内部质量控制的基础上,由上一级质控中心每年给参加室间质控的实验室发1～2次标准参考品,由各实验室进行测定并把测定结果上报,由上级质控中心进行统一评价和考核[1].
-
HBsAg、抗-HCV和抗-HIV诊断试剂质量评估
血站对提高HBsAg、抗-HCV和抗-HIV检出率和检出的准确性,需要各环节共同完成,其中使用高质量、合格的ELISA诊断剂是影响检验工作质量的关键因素,我院对我市血站使用的酶免试剂按照卫生部需求进行批批检测工作.对2001年1月-2002年2月酶免试剂批检结果进行评估,现报告如下.1 材料与方法1.1 检测参考品 HBsAg血清盘:阴性参考品20份,阳性参考品3份,灵敏度参考品4份(0.2ng/ml、0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.0ng/ml)精密性参考品1份;抗-HCV血清盘:阴性、阳性参考品各40份;抗-HIV血清盘:阴性、阳性参考品各20份,精密性参考品为阳性18号.以上产品均由中国药品生物制品检定所提供.
-
四价流感病毒裂解疫苗血凝素含量检测方法的验证
目的 验证四价流感病毒裂解疫苗[quadrivalent influenza vaccines(split virion) inactivated,QIV]血凝素含量检测方法的可行性.方法 采用传统的单向免疫扩散法(single-radial immunodiffusion,SRID)检测QIVH1N1和H3N2型的血凝素含量,双价抗原参考品SRID法检测两种B型(包括B/Yam和B/Vic)血凝素含量,并对该检测方法进行准确度、精密度、专属性及线性验证.结果 QIV各型的血凝素含量总体回收率为97.8％ ～ 107.6％,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.59％ ～1.83％;试验间和试验内RSD均＜5.0％;4个型别血凝素含量在10 ～ 50 μg/ml范围时,标准曲线呈良好的线性,R2均大于0.980 0,定量限分别为:H1N1:4.53 μg/ml,H3N2:3.83 μg/ml,B/Yam:2.89 μg/ml,B/Vic:5.60 μg/ml;各型别流感裂解疫苗供试品和抗原参考品与对应抗血清参考品出现沉淀环,与非对应抗血清参考品不出现沉淀环.结论 QIV血凝素含量检测法是可行的.
关键词： 四价流感病毒裂解疫苗 血凝素 单向免疫扩散法 抗原 参考品 -
adr亚型HBsAg冻干实验参考品的制备与检测
目的 制备用于检测重组酵母表达的adr亚型HBsAg含量的实验参考品.方法 重组酵母表达的adr亚型HBsAg溶液经纯化后,经3家实验室联合标定蛋白含量,准确稀释并加入保护剂,使抗原终含量为10 μg/ml,分装安瓿后,冷冻干燥熔封,制备成adr亚型实验参考品.再由不同实验室用不同试剂和不同方法,以联合标定的蛋白含量为定量标准,分别验证冻干参考品中adr亚型HBsAg含量及37 ℃放置不同时间的稳定性.并以adw亚型HBsAg标准作为定量标准,检测adr亚型参考品中HBsAg含量.结果 所制备的adr亚型冻干参考品分装准确均匀;以联合标定蛋白含量为标准,不同实验室分别以珠式EIA法和RIA法所测的adr亚型冻干参考品HBsAg含量与目标含量相近,各支参考品间差异小;adr亚型冻干实验参考品37 ℃放置2～10周后质量稳定.以adw亚型HBsAg参考品为定量标准,所测定adr亚型冻干参考品HBsAg含量,比实际含量约高出0.6倍.结论 冻于adr亚型HBsAg实验参考品可用于重组酵母表达adr亚型HBsAg的定量检测.不同亚型HBsAg检测需用各自亚型的参考品作为定量标准.
-
重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品的制备
目的制备冻干参考品,用于重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力检测.方法配制含氢氧化铝的保护剂,加入抗原至规定浓度,使各组分含量分别为明胶1%、蔗糖5%、氢氧化铝0.9 mg/ml、抗原10μg/ml,分装冻干,制成冻干参考品,并对其理化指标进行全面检定.采用小鼠效力试验方法检测冻干对疫苗效力的影响,并比较冻干参考品与同批液体疫苗的稳定性.结果冻干参考品各项指标均符合规程要求,冻干前后疫苗效力无明显变化,冻干参考品与同批液体疫苗效力差异无显著意义,37℃热加速8周,冻干参考品效力未见显著下降,液体疫苗效力则明显下降.结论冻干对疫苗效力无影响,冻干参考品热稳定性良好.
-
百日咳毒素参考品的制备及鉴定
目的 制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)参考品,并进行鉴定.方法 将百日咳杆菌培养上清经珍珠岩和羟基磷灰石两步吸附层析纯化后获得PT,进行SDS-PAGE、ELISA、斑点免疫印迹及血凝效价检测.结果 纯化后PT纯度可达99％以上;相同抗原含量的纯化后PT和NIBSC标准品与PT单克隆抗体均为阳性反应,与FHA单克隆抗体均为阴性反应;纯化后PT和NIBSC标准品均可与PT单克隆抗体产生明显的反应斑点,与FHA单克隆抗体无反应斑点,Sigma公司PT参考品与PT单克隆抗体有明显反应斑点,与FHA单克隆抗体有微弱反应斑点;纯化后PT和Sigma公司PT参考品的血凝效价分别为1:32和1:64.结论 成功制备了较高纯度的PT,有望作为参考品用于PT抗原含量检测、抗PT血清抗体滴度检测及抗原纯度检测.
-
重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品的研制
目的 制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品,用于重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力评价.方法 选取检定合格的重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)原液,经协作标定表面抗原蛋白含量后,加入氢氧化铝佐剂和冻于保护剂,冷冻干燥制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品,并按《中国药典》三部(2010版)要求进行各项检定.经10次独立试验测定冻干参考品小鼠效力,采用Reed-Münch计算ED50值；将冻干参考品置4℃(8周)、37℃(4和8周)后分别检测疫苗效力,分析其稳定性,依据Q10法进行效期推测；并对2个生产企业10批疫苗进行效力测定,分析其适用性.结果 制备的冻干参考品各项指标均符合规定,小鼠ED50均值为0.183μg,CV为50.5％；该CHO细胞效力冻干参考品蛋白含量定为20 μg/ml,规格为10 μg/0.5 ml;冻干保护剂、冻干工艺对乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力影响较小,冻干参考品在37℃放置不同时间,效力变化不明显,表明冻干参考品稳定性较好,有效期约为7年；10批疫苗中,不合格率为10％,表明该参考品可用于乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效力质控.结论 制备的冻干参考品可作为重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效力检定的质控参考品.
-
重组水蛭素生物学活性检测参考品的制备和标定
目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性.方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测.结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%.经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%.在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月.结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测.
-
抗乙型脑炎病毒阳性血清抗体效价参考品的制备
目的 制备抗乙型脑炎病毒阳性血清抗体效价参考品.方法 评估乙脑病毒IgG酶联免疫试剂盒定量检测不同浓度阳性血清抗体的线性范围、准确性、精密性及特异性,并以正常血清及其他免疫球蛋白产品为对照,对该参考品抗体效价定位进行适用性比较.结果 不同浓度阳性血清的线性范围为0.625～10 IU/ml,抗体效价回收率为91.2%～112.8%,试验内变异系数≤7.8%,正常血清与阳性血清的乙脑抗体效价相差15倍.试验用的阳性血清乙脑病毒抗体效价设为10 U/ml时,在特定的疫苗免疫程序下,效价峰值期能够实现合格血浆≥50%的收获率.结论 兼顾原料血浆的可获取性与产品临床效果的难以替代性,特定阳性血清定位为10 U/ml.
