首页 > 文献资料
-
环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌的研究
目的 建立藤黄微球菌的环媒恒温基因扩增检测方法. 方法 基于藤黄微球菌23S rRNA基因部分序列设计1套(共4条)能够识别6个区域的特异性引物;优化扩增条件;评估该方法的特异性与敏感性. 结果 用7个参考株和大肠埃希菌等8种其他临床病原菌检验本检测法,成功地建立了环媒恒温基因扩增(LAMP)检测法. 结论 环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌快速、灵敏高、特异性强.
-
藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响
目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.
-
结核分枝杆菌RPF蛋白的生物学特性及其在结核病疫苗研究中的应用
复活促进因子(resuscitation-promoting factor,RPF)初是在藤黄微球菌(M.luteus)中发现,该因子可以在g×10-12水平以自分泌和旁分泌形式促进休眠菌的复活和生长,其机制可能是参与了细胞间的信号转导[1].RPF除能促使休眠菌复活和生长以外,对正常生长的细菌也有效.由于RPF的功能类似于真核生物的生长因子,所以被称为细菌的生长因子[2].目前已查明RPF氨基酸的顺序并确定了编码这种蛋白的基因,相似的RPF基因广泛分布在碱基G和C高比率含量的革兰阳性菌中.
-
骨髓培养检出藤黄微球菌1例
藤黄微球菌属于微球菌属细菌,广泛分布于自然界中,可从人和其他哺乳动物的皮肤分离得到,通常认为是非致病菌.由于在骨髓培养中检出微球菌属的报道较少,故将本病例报道如下.
-
可见分光光度法对3种细菌计数的研究
目的：建立枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、藤黄微球菌的快速计数方法。方法：采用可见分光光度法进行细菌计数方法研究，考察菌液浓度与吸光度之间的关系。结果：枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、藤黄微球菌菌液的吸光度与其菌液浓度对应在0.68×108~10.88×108、0.80×108~12.80×108、0.89×108~14.30×108浓度范围内线性关系良好（r2分别为0.9999、0.9998、0.9998，n=5），相应菌落计数结果稳定。结论：可见分光光度法可用于3种细菌菌液的快速计数，可以提高药品微生物检定工作效率。
-
藤黄微球菌引起脑室外引流患者颅内感染
1 临床资料患者,男73岁,10月6日因脑出血入住石家庄市第二医院神经外科手术,术后脑室留置引流管至体外.患者颅内高压,每天流出脑脊液的量在200ml左右.术后患者深度昏迷,意识不清,局部肢体有僵硬的现象,体温逐渐恢复正常,血常规由13.6×109/L逐渐降到6.5×109/L.
-
复苏促进因子Rpf结构域突变体蛋白的原核表达和纯化
[目的]构建藤黄微球菌复苏促进因子Rpf结构域突变体基因E54K、E54A的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达和纯化.[方法]采用PCR方法从藤黄微球菌基因组中扩增出Rpf结构域F,54A、E54K突变体基因,连接进入pMD-18T载体中,测序正确的基因插入到pGEX-4T-1表达载体中,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定表达蛋白,利用Rpf结构域单克隆抗体进行Western-blotting分析.用GS-4B亲和层析柱纯化目的蛋白.[结果]获得藤黄微球菌Rpf结构域E54K和E54A突变体基因,测序结果与GenBank公布的序列相同,突变体位点与设定一致;表达蛋白相对分子质量与文献报道一致;Western-blotting结果显示,在相对分子量约32 KD处有与Rpf结构域单克隆抗体特异性结合带.通过GS-4B系统,得到纯化的GST融合蛋白.[结论]成功表达、纯化了Rpf结构域突变体E54K、E54A融合蛋白,为上述蛋白在结核病中的应用奠定基础.
-
1例藤黄微球菌致腹膜透析相关隧道炎的护理
介绍了1例藤黄微球菌致腹膜透析相关隧道炎的护理经验,强调护理过程中应注意排脓、隧道冲洗、应用磺胺嘧啶银脂质水胶体敷料填塞引流,经积极治疗及护理20 d后病人痊愈出院.
-
类风湿关节炎合并藤黄微球菌关节炎一例
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)之膝关节滑膜炎并积液为RA常见症状,但合并膝关节藤黄微球菌(micrococcus luteus)感染实属罕见,现将所遇1例及其治疗情况报道如下.
-
土霉素微生物检定条件的改进
土霉素为四环素类广谱抗生素,含量测定采用微生物检定法,按文献[1,2]的方法进行含量测定时,会产生抑菌圈边缘不清晰、菌层生长稀薄等,不易达到生物检定的要求.笔者参照文献[3]改变制备检定所用藤黄微球菌的培养温度进行生物检定,效果满意.
-
琥乙红霉素颗粒的人体生物利用度和生物等效性研究
目的 研究琥乙红霉素颗粒在健康人体内的药动学与生物等效性.方法 20例受试者随机交叉单剂量口服琥乙红霉素颗粒受试制剂或参比制剂各500 mg,以微生物法测定人体血浆药物浓度.结果 受试制剂与参比制剂的药动学参数如下:Tmax分别为(0.86±0.22)h和(0.80±0.13)h,Cmax分别为(2.13±0.64)和(2.16±0.61)mg/L,t1/2分别为(2.04±0.2)和(1.97±0.4)h,AUC0-t分别为(4.96±1.73)和(4.63±1.52)mg·h/L.受试制剂与参比制剂比较,相对生物利用度(F)为(109.1±22.8)%.结论 经生物等效性检验,受试颗粒剂与参比颗粒制剂具有生物等效性.
-
创口分泌物中检出成团泛菌和藤黄微球菌
1999年10月,我们从一患者创口分泌物中分离出Pantoe agglomerans(成团泛菌)和 Micrococcus Luteus(藤黄微球菌),现报告如下.
-
幼儿患者脑脊液内检出藤黄微球菌1例
患儿男,6个月,发热3天入院.血常规:WBC26.35×109/L,RBC4.54×1012/L,Hb135g/L,N0.85,L0.13,M0.02,PLT230×109/L.脑脊液检查:灰白色,混浊,WBC2.85×109/L,N0.91,L0.09;潘氏试验阳性.取脑脊液加入BD儿童树脂瓶中,同时接种血和巧克力琼脂平板.置35℃培养18～24 h,巧克力平板置35℃5%～10%CO2培养.菌落较葡萄球菌小,圆形、突起、表面光滑、边缘整齐、不透明、微黄色菌落.染色为革蓝阳性球菌,直径约0.5～2.0μm,比葡萄球菌稍大,多成四联、双或簇状排列,但不形成链状排列.
-
藤黄微球菌致败血症7例及脓肿1 例
目的:报道藤黄微球菌致败血症7 例及脓肿1例.方法:从患者血液及脓液中分离出菌株并作菌株鉴定和药敏试验.结果:从7例败血症患者中分离菌株7株,脓液中分离出1株,均鉴定为藤黄微珠菌.7例败血症治愈6例,死亡1例. 结论:藤黄微球菌可致人体败血症和严重感染.
-
医院门诊大厅内外空气细菌污染对比分析
目的 探寻适当的医院门诊空气质量微生物学评价方法.方法 无风晴天气象条件下,用撞击法采集3家三甲综合医院门诊内、外的空气,检测空气菌落总数、溶血葡萄球菌、藤黄微球菌,并对医院门诊大厅内、外空气细菌数量及指标菌在空气细菌所占比例进行对比分析.结果 医院门诊大厅内、大厅外人多处空气菌落总数分别为1 281 CFU/m3、1 094 CFU/m3,两者差异无统计学意义;大厅内、大厅外人多处溶血葡萄球菌在空气细菌所占比例分别为4.03％、1.76％,藤黄微球菌分别为3.64％、7.14％,显示大厅内空气污染程度高于大厅外人多处.结论 仅以菌落总数为指标,不能判断门诊大厅内、大厅外人多处空气污染程度的差别,而增加溶血葡萄球菌、藤黄微球菌在空气细菌所占比例为指标,可充分显示该差别.
-
藤黄微球菌Rpf结构域多肽诱导小鼠免疫应答的实验研究
目的:研究藤黄微球菌Rpf结构域多肽的免疫学特性.方法:用原核表达的藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫哌BALB/c小鼠3次,每次间隔2周.用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度.分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增值指数.ELISA方法检测淋巴淋巴细胞悬液中IFN-γ、IL-10和IL-12产生水平.另一部分免疫的小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后,计数脾脏细菌负荷数.结果:藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶128 000,淋巴细胞增殖指数为(2.10±0.12),明显高于生理盐水对照组(0.90±0.21).ELISA方法检测Rpf结构域多肽免疫组IFN-γ,IL-10和IL-12水平为(1 126±36) ng/L,(368±13)ng/L和(289±14)ng/L,明显高于生理盐水对照组(P<0.01).与生理盐水免疫组(细菌负荷6.64±0.13)相比较,Rpf结构域多肽免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有明显作用(细菌负荷为5.03±0.11,P<0.05).结论:藤黄微球菌Rpf结构域多肽有可能作为新型结核疫苗的候选组分.
-
抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定
目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb).方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白.用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力.结果:在变性条件下用Ni2+-NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpf domain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽.结论:所获得的抗Rpf domain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具.
关键词： 结核分枝杆菌 藤黄微球菌 Rpf domain MAB -
藤黄微球菌RPF基因蛋白的克隆、表达与鉴定
目的 构建表达藤黄微球菌RPF基因蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达获得基因重组蛋白.方法 提取藤黄微球菌基因组DNA,以PCR扩增RPF基因,克隆入pGEX-4T-2表达载体,测序证实正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),在30℃用IPTG诱导3 h后进行SDS-PAGE分析.结果 测序结果 证实获得了藤黄微球菌RPF基因,其序列与GenBank中报道完全一致;SDS-PAGE分析表明,RPF基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组蛋白,表达的蛋白量约占菌体蛋白的33.8%.结论 成功克隆了藤黄微球菌RPF基因,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性及其功能奠定基础.
关键词： 藤黄微球菌 促进复活因子(RPF) 克隆 表达 -
用微生物方法同时筛检水产品中的多种抗生素残留
本文介绍了一种检测抗生素残留的微生物抑制试验方法,该方法同时使用藤黄微球菌ATCC9341,枯草芽胞杆菌ATCC6633,蜡样芽胞杆菌蕈状变种ATCC11778为检测菌,一次提取可同时检测4-6大类抗生素在鱼组织中的残留,对土霉素、卡那霉素、氨苄西林和红霉素的回收率分别为85%-101%、70%-83%、84%-91%和81%-94%.
关键词： 藤黄微球菌 枯草芽胞杆菌 蜡样芽胞杆菌蕈状变种 抗生素残留检测
