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应用PCR-反向斑点杂交法快速检测和鉴定常见医学真菌
近年来,机会性真菌感染呈不断上升趋势,这主要归因于器官移植、骨髓移植的广泛开展;艾滋病患者的大量增多及皮质类固醇激素、免疫抑制剂和广谱抗生素的应用等;另外不同真菌菌种对抗真菌药物具有不同的天然耐药性,这就不仅要求实验室快速检出感染的病原菌,而且还应准确鉴定到种,才能使临床采取有效措施控制感染.目前,真菌的分离培养鉴定仍是主要诊断方法,但存在耗时长且不敏感等问题.为建立快速、敏感、特异的检测与鉴定方法,我们用真菌通用引物扩增广范围医学真菌的细胞色素P450羊毛固醇-14α-去甲基化酶(L1A1)基因的1个片段(约350bp).通用引物以生物素标记,结合种特异性探针进行反向斑点杂交,可鉴定临床常见的8种真菌,其中包括近年来新发现的都柏林念珠菌.
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反向斑点杂交技术应用于人乳头瘤病毒基因分型的研究
人乳头瘤病毒(HPV)感染、传播是宫颈癌与尖锐湿疣发生的重要病因,且HPV多重感染是宫颈癌的一个极其重要的危险因素.目前,已经确定的HPV型别有100多种,其中42种与生殖道疾病有关,不同地区HPV感染类型有较大差异[1].本研究利用反向斑点杂交法,可同时检测23种HPV型别,包括18种高危型与5种低危型.
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间日疟特异DNA探针CS9211的研制与应用
本课题为探索间日疟灵敏特异的诊断和检测方法,解决灭疟后期疟疾监测的难题而设计.并从分子生物学角度,根据DNA分子碱基的互补原理和基因遗传的稳定性,从克隆的间日疟DNA重复序列中设计合成了CS9211寡核苷酸片段,由35 mer组成,经同位素标记作为探针,以斑点杂交法对不同虫种的疟原虫进行杂交,检验其特异性;对已知不同原虫密度的原虫血进行杂交,了解其敏感性和对现场采集的现症病人血样进行检测及现场传染源检索,以对其现场应用价值进行评价.在现场监测中对发热病人、流动人口、出国回归人员,疫点周围人群进行了检测,并使用镜检,IFA和PCR技术对结果进行验证以评价其结果的可靠性.
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定量PCR在HBV临床研究中的应用
自1989年聚合酶链反应(PCR)技术应用于临床检测以来,对HBV感染的研究提供了一种快速而敏感的有效手段.然而,PCR临床应用亟待解决不能定量和污染所致的假阳性等问题.
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IL-1βmRNA在胎儿脑及U251细胞中的表达
目的探讨IL-1βmRNA在胎儿脑中的表达与某些疾病的关系.方法采用杂交法检测胎儿脑中IL-1βmRNA的水平,利用Nonhem杂交法检测人脑胶质瘤传代细胞U251中IL-1β的表达情况.结果显示了TPA可明显刺激U251中IL-1β的表达.结论孕2个月胎儿脑在未加任何刺激的自然情况下即有中IL-1β的表达.
关键词: IL-1βmRNA 斑点杂交法 Nonhern blot 胎儿脑 -
乙肝患者血清乙肝病毒标志物与HBV-DNA的比较分析
目的探讨乙肝患者HBV血清标志物与HBV-DNA检测结果的相关性.方法HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的测定采用ELISA法,HBV-DNA采用地高辛标记斑点杂交法.结果在不同模式的HBV血清标志物患者中均有一定比例的HBV-DNA阳性者,且e抗原阳性的乙肝患者HBV-DNA阳性率达88.2%,明显高于其它模式的HBV血清标志物患者.结论e抗原阳性与HBV-DNA有正相关性,HBV-DNA的检测对于乙肝的诊断、病情转归的判别以及药物疗效的评估意义重大.
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聚合酶链反应-反向斑点杂交法直接从BACTEC-960阳性培养物鉴定分枝杆菌菌种
目前,常规的分枝杆菌菌种鉴定需采用分枝杆菌培养物进行生长特性试验(生长速度、生长温度、光产色试验、多种鉴别培养基上生长试验)及生化特性试验(耐热触酶试验、硝酸盐还原试验、烟酸试验、吐温-80水解试验、尿素酶水解试验、芳香硫酸酯酶试验、铁离子吸收试验、亚碲酸盐还原试验)等10余项试验,综合分析判定结果,方法复杂、费时、准确度较差,难以满足临床诊断和治疗的需要.
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几种结核杆菌检测方法在结核病中的诊断价值
结核病是一种较严重的传染病,目前的疫情呈上升趋势.结核病的实验室诊断是发现传染源的主要途径和手段,是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据,也是考核疗效、评价治疗效果的可靠标准.痰中结核杆菌的检测方法常规采用痰涂片及痰培养.涂片虽简单易行,但阳性率低,培养虽为金标准,但周期太长,均难以满足临床需要.近年来,一些针对结核分支杆菌检测的新方法陆续报道.本文对聚合酶链反应(PCR)法、噬菌体裂解法、PCR-斑点杂交法,几种结核分支杆菌检测方法的应用进行评价.
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维持性腹膜透析患者感染乙型和丙型肝炎对肝功能的影响
腹膜透析(腹透)患者为血源性传播疾病的高危人群,其感染病毒性肝炎后不仅影响生活质量,也是增加透析并发症、死亡率和影响移植肾失功的重要原因….为此,本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测腹透患者血清中抗-HCV IgM、IgG,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HCV RNA,采用固相放免法(EIA)及斑点杂交法检测血清HBV感染标志,并同时检测腹透患者的肝功能和血浆蛋白电泳,以评价腹透患者HBV和HCV感染况,以及对肝功能的影响.
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临床基因诊断实验室的管理
一技术背景在基因诊断技术发展史中核酸分子杂交发展早,于1961年开始研究.经典的方法是Southern印迹法,主要用于DNA的检测;随后又发展出了Northern印迹法(检测RNA)和斑点杂交法等.它是直接对样品中靶序列的测定.杂交法灵敏度不够,据报道敏感的核酸探针仅能检出103~104拷贝的靶分子,而多数临床标本中靶分子量远低于此限.1980年代中期,以PCR技术为主的体外核酸扩增技术的发展,使低拷贝临床标本的检测成为可能.PCR能使样品中靶序列的拷贝数特异性地快速扩增105~107倍,将检测阈值降至1~10拷贝数,大大提高了杂交检测的灵敏度.
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脑红蛋白及其在神经疾病中的作用
脑红蛋白(Ngb)是近期发现的一种携氧球蛋白,是继血红蛋白(Hb)和肌红蛋白(Mb)之后的第三种携氧球蛋白,主要存在于人和脊椎动物脑内.斑点杂交法研究证实Ngb mRNA和Ngb在脑内高表达,但在不同的脑区分布不同,并且在不同部位的表达程度与该区域对氧的敏感性呈负相关.
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拉米夫定治疗慢性乙型肝炎
1 病人的选择1.1 适合治疗对象慢性乙型肝炎。按全国病毒性肝炎防治方案,确诊为慢性乙型肝炎,性别不限,年龄16岁及以上,并且符合下列标准:HBeAg阳性,HBV DNA阳性(HBV DNA阳性系指斑点杂交法,不是PCR法阳性,有条件者可作HBV DNA定量测定,没有条件检测HBV DNA的地方,可以HBeAg阳性为准);HBeAg阴性,抗-HBe阳性者,考虑有前C区变异情况也适于治疗;ATL高于正常,胆红素低于50μmol/L(3.0mg/dl)。1.2 研究观察对象慢性乙型肝炎年龄在12~16岁的病人,具有病毒复制指标阳性及血清转氨酶升高;代偿期肝硬化伴有活动性病毒复制的患者;无症状HBV 携带者(尤其是肝活检发现有肝炎证据者),伴有活动性病毒复制或有肝癌家族史者,偶尔有过肝功能不正常。2 不适合治疗的对象2.1 自身免疫性肝病。2.2 遗传性肝病如肝豆状核变性、Wislon病、血色病、α抗胰蛋白酶缺乏症等。2.3 骨髓抑制血红蛋白<10g/L、白细胞<4×109/L、血小板<80×109/L(迄今为止,在临床研究中并未发现拉米夫定有骨髓抑制作用。对于有骨髓抑制倾向的患者严格遵照医嘱)。2.4 有明显心、脑、神经病和不稳定糖尿病。
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应用聚合酶链反应斑点杂交法检测结核杆菌
实验室诊断结核杆菌主要依靠涂片法和分离培养法.我院虽然采用集菌涂片法,但检出率仍然不高,而分离培养所需时间又太长,近年来应用PCR技术直接测定结核杆菌的DNA[1~3],不失为一种理想的方法.我们通过应用PCR斑点杂交法对137份样本进行了检测,并同时用集菌涂片和分离培养法进行比较,以了解PCR斑点杂交法的诊断价值.
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α-2b干扰素治疗慢性乙型肝炎临床疗效观察
我院自1997年以来应用国产安达芬(α-2b基因工程干扰素,安科生物高科技有限公司)治疗慢性乙型肝炎61例,对其病毒标志物(HBV-M,HBV-DNA)的变化进行观察,现将结果报告如下.1资料与方法1.1对象61例均为慢性乙型病毒性肝炎,诊断标准按1995年5月第5次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的标准.年龄16~50岁,男43例,女18例.血压HBV-DNA阳性(斑点杂交法),ALT均升高,HBsAg、HBeAg、抗-HBc均为阳性(上海科华酶标试剂).
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苦参素联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎疗效观察
1 资料与方法1.1 选择病例 入选标准:①按2000年第十次全国病毒性肝炎和肝病学术会议修订的<病毒性肝炎防治方案>标准进行诊断,且满足HbeAg(+)和HBV-DNA(+)斑点杂交法,同时有ALT(>40%)升高和无黄疸(<17.1 umol).②治疗前3个月未用过抗病毒药.
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拉米夫定治疗HBV低水平复制慢性乙型肝炎59例
目的观察拉米夫定对乙型肝炎病毒(HBV)低水平复制的慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效.方法将肝功能反复异常、 HBeAg阴性和斑点杂交法(DOT)检测HBV DNA阴性、聚合酶链反应法(PCR)检测HBV DNA阳性的119例CHB患者分为两组:治疗组59例给予拉米夫定100 mg·d-1,po,qd;对照组60例给予一般保肝、降酶、对症治疗.疗程均为1 a.两组每个月复查肝功能,每3个月复查HBV DNA(PCR).结果疗程结束时,治疗组56例HBV DNA(PCR) 转阴,52例肝功能完全恢复正常;对照组仅6例HBV DNA转阴,31例肝功能恢复正常.结论拉米夫定对以DOT检测HBV DNA阴性的慢性乙型肝炎具有较好的近期疗效.
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921消毒剂对乙肝病毒DNA消毒效果的评价
乙型肝炎病毒为DNA病毒,患者在感染HBV的不同时期,血清内可以出现不同的HBV感染标志[1],其中包括检测HBV DNA,其为HBV复制和传染的直接标志。利用斑点杂交可检测pg水平的HBV DNA,应用聚合酶链反应(PCR)可检测fg水平的HBV DNA,较斑点杂交法敏感1 000倍。作者利用PCR技术检测HBV DNA,结合ELISA法检测HBsAg、HBeAg评价921消毒剂的消毒效果。
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应用聚合酶反应-反向斑点杂交法检测利福平结核分支杆菌rpoB基因突变
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乙型肝炎病毒复制程度对重叠丁型肝炎的影响
为探讨HBV复制程度高低对重叠丁型肝炎(HD)的影响,以及本地区HD的临床特征,我们对163例患者进行了研究。1. 对象和方法(1)一般资料:在1230例慢性乙型肝炎患者中,发现重叠HD160例,感染率为13.0%。均系本院1996年3月~1999年8月住院患者。平均年龄(39.6±12.7)岁(12~74岁);男126例,女34例。另在50例HBsAg阳性无症状体检者中发现3例HD 患者(血清由宁波市卫生防疫站提供),感染率为6%。(2)检测方法:血清HBV标志物:HBsAg、、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、抗-HBcIgM采用RIA法,试剂由山东潍坊3V诊断技术公司提供。HBV DNA采用斑点杂交法,试剂由上海医科大学协恒公司提供。血清丁型肝炎病毒(HDV)标志物:HDAg和抗-HDV IgM采用ELISA法,试剂由广州丽珠试剂公司提供。HDV RNA采用巢式PCR法[1],引物设计由上海细胞研究所合成,HDV RNA抽提试剂由美国GIBCO-BRL公司提供,以美国Promega逆转录系统在PE公司热循环仪上作PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测和Southern杂交分析。(3)统计方法:资料统计采用χ2检验,并作相关性分析。
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斑点杂交法及PCR法检测乙肝患者血清HBV DNA结果分析
1994年2月以来,我们对我院门诊及住院部临床已确诊的1021例乙肝患者,采用ELISA法检测患者血清的乙肝两对半,并同时留标本采用Dig HBVDNA探针斑点杂交法及PCR-溴化乙锭法分别检测其HBVDNA.以便探讨Dig HBV-DNA探针斑点杂交法及PCR-溴化乙锭法探测HBV-DNA的灵敏度及特异性,更好地为临床提供佳的检测结果,现将结果报告如下.