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单细胞凝胶电泳检测少精与弱精症患者精子DNA损伤的临床应用研究
男性不育症有复杂的病因,新近研究表明[1-2],精子DNA完整性是保证完成自然受精和正常胚胎发育的前提.任何形式的精子染色质异常或DNA损伤都可能导致男性不育.通过单精子卵浆内注射(intracytoplasmic sperminjection,ICsI)技术,一些DNA损伤的精子很可能将遗传缺陷传递给下一代.本研究采用单细胞凝胶电泳(single cellgel electroplaoresis,scGE)技术,检测男性不育症患者的精子DNA损伤情况,探索应用scGE技术评价男性生殖细胞遗传物质损伤的方法.
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碱性单细胞凝胶电泳检测辐射诱发的外周血淋巴细胞DNA损伤
电离辐射往往通过DNA损伤而诱发细胞突变和癌变。由Singh等改进和建立的碱性单细胞凝胶电泳试验(SCGE),是一种检测哺乳动物单细胞DNA断裂的新技术[1,2]。作者应用SCGE检测了受γ射线照射后小鼠及从事X射线探伤工人的外周血淋巴细胞DNA单链断裂(DNAssb)的情况。 一、材料和方法 1.实验动物及照射:雄性昆明系小鼠购自原苏州医学院动物部,6~7周龄,体重(20±2)g。用60Co外照射治疗机全身照射小鼠。球靶距70 cm,吸收剂量0.5和5.0 Gy,吸收剂量率为90.3 cGy*min-1。
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长波紫外线对人皮肤成纤维细胞DNA的损伤
紫外线在电磁波谱中属于非电离辐射,波长100~400nm,通常把波长320~400nm的紫外线称为长波紫外线(UVA).UVA的能量很弱,DNA对UVA的吸收作用极低,因此UVA对DNA的损伤往往被忽视.我们用单细胞凝胶电泳检测UVA对原代培养人皮肤成纤维细胞DNA的损伤.
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单细胞凝胶电泳检测单细胞DNA损伤
遗传毒理学家主要关注的三大遗传学损伤,即基因突变、染色体畸变及染色体数目改变.这些损伤多因DNA受损所致,其本质是相同的,区别在于其损伤的程度[1].由此DNA损伤与修复就成为生物医学领域特别是遗传毒理学及肿瘤学等领域的核心内容之一.传统的毒理学检测终点是组织病理学改变,过程繁琐且不理想.迄今为止检测DNA损伤与修复敏感的终点是测量DNA单链断裂[2].
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PCR-酶标板杂交比色法检测结核分枝杆菌
目前在传染性疾病中,结核病仍然是主要致病和死亡原因之一,威胁公众健康.随着HIV蔓延,多重耐药菌株产生,以及世界人口流动增强,其发病率有上升趋势[1].MTB检测方法很多,其中以PCR方法较为灵敏.常规凝胶电泳检测PCR产物结果主观性强,存在溴化乙啶污染及非特异条带影响,膜相杂交检测虽然可提高特异性,但操作繁琐.本研究采用酶标板杂交比色法检测PCR产物,并取得了满意结果.
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乙型肝炎病毒复制程度对重叠丁型肝炎的影响
为探讨HBV复制程度高低对重叠丁型肝炎(HD)的影响,以及本地区HD的临床特征,我们对163例患者进行了研究。1. 对象和方法(1)一般资料:在1230例慢性乙型肝炎患者中,发现重叠HD160例,感染率为13.0%。均系本院1996年3月~1999年8月住院患者。平均年龄(39.6±12.7)岁(12~74岁);男126例,女34例。另在50例HBsAg阳性无症状体检者中发现3例HD 患者(血清由宁波市卫生防疫站提供),感染率为6%。(2)检测方法:血清HBV标志物:HBsAg、、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、抗-HBcIgM采用RIA法,试剂由山东潍坊3V诊断技术公司提供。HBV DNA采用斑点杂交法,试剂由上海医科大学协恒公司提供。血清丁型肝炎病毒(HDV)标志物:HDAg和抗-HDV IgM采用ELISA法,试剂由广州丽珠试剂公司提供。HDV RNA采用巢式PCR法[1],引物设计由上海细胞研究所合成,HDV RNA抽提试剂由美国GIBCO-BRL公司提供,以美国Promega逆转录系统在PE公司热循环仪上作PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测和Southern杂交分析。(3)统计方法:资料统计采用χ2检验,并作相关性分析。
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琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测肠道菌群基因扩增产物的方法学比较研究
琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis, AGE))和聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖凝胶电泳的有效分离范围是0.1~2kb,聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5~500 bp)效果好,分辨力极高,测序的聚丙烯酰胺凝胶可分离相差lbp的DNA片段.