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SYTO/EB双重染色法测定皮肤活力
目的:建立一种简便、快速和灵敏的皮肤组织原位活力检测方法.方法:采用SYTO 13和溴化乙啶(EB)两种核酸染色剂对皮肤组织进行双重染色,荧光显微镜下通过颜色不同判断细胞的活力状态并计算出活力百分比.本研究利用SYTO/EB法和一种快速、灵敏的间接活力测定方法WST-1法同时对4℃保存不同时间的皮肤进行活力的检测,并将结果进行比较.结果:两种方法测定的结果均显示皮肤在一定的保存液中4℃保存后两周时活力为新鲜皮肤的30%左右,两个结果在各时相点均未有明显差异.结论:SYTO/EB测定皮肤的活力快速、灵敏且简便,并可原位观察皮肤内各种细胞的活力,不失为一种可取的皮肤活力检测方法.
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PCR-酶标板杂交比色法检测结核分枝杆菌
目前在传染性疾病中,结核病仍然是主要致病和死亡原因之一,威胁公众健康.随着HIV蔓延,多重耐药菌株产生,以及世界人口流动增强,其发病率有上升趋势[1].MTB检测方法很多,其中以PCR方法较为灵敏.常规凝胶电泳检测PCR产物结果主观性强,存在溴化乙啶污染及非特异条带影响,膜相杂交检测虽然可提高特异性,但操作繁琐.本研究采用酶标板杂交比色法检测PCR产物,并取得了满意结果.
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溴化乙锭在毛细管DNA传感器中的应用
目的:构建一种新型毛细管的DNA生物传感器.方法:实验于2004-10/2005-12在四川大学华西基础医学与法医学院生物化学实验室完成.毛细管内壁通过poly-I-lysine将20-mer-ssDNA(探针)固定,与互补靶核苷酸杂交后,通过溴化乙锭染色后检测与0.033 mmol/L靶核苷酸杂交后的荧光强度;同样浓度的靶核苷酸序列连续测定3次,进行重现性比较;及对不同杂交时间的荧光强度进行检测.结果:通过溴化乙锭对毛细管固定探针与互补靶DNA杂交进行染色,用RF5000荧光光度仪测定荧光值,测定组高于试剂空白组,差异有显著性意义[分别为(203.15±19.41),(133.05±11.82)s,f=4.110 6,P＜0.05].杂交14 h的荧光强度明显高于杂交12 h,差异有显著性意义[分别为(203.06±17.36),(101.54±25.63)s-1,P＜0.01],重现性较好.结论:在毛细管DNA传感器构建中,溴化乙锭可作为荧光标记物对模式寡核苷酸进行检测.
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PCR-ELISA法检测HCV-RNA的临床应用
采用PCR法检测血清中HCV-RNA是诊断丙型肝炎和观察抗病毒疗效的重要指标.但常规PCR仍存在产物污染和需使用有毒化合物溴化乙啶等缺点.我们近采用抗污染PCR与ELISA检测相结合的新方法进行了初步临床应用,现将结果报告如下.
