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点杂交法检测诊断超声引起的人绒毛细胞DNA链的损伤
目的:探讨诊断超声经腹照射子宫内胚胎是否引起人早孕绒毛细胞的DNA链的损伤及评价检测DNA单、双链断裂的方法.方法:60例早孕妇女随机分为照射宫内孕囊10分钟组和未照射组(各30例),取绒毛组织后,以32P标记Alu探针打点杂交法定量检测绒毛细胞单、双链DNA.结果:照射组与对照组比较,绒毛细胞单、双链DNA的量、百分含量的差异均无显著性(P>0.05);该方法只能与人DNA杂交,可检测2.5×103个绒毛细胞分离的DNA、0.45ng的人白细胞DNA.结论:该实验用诊断超声照射宫内孕囊10分钟,未引起绒毛细胞DNA单、双链断裂;所用点杂交法的特异性、敏感性与准确性高.
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碱性单细胞凝胶电泳检测辐射诱发的外周血淋巴细胞DNA损伤
电离辐射往往通过DNA损伤而诱发细胞突变和癌变。由Singh等改进和建立的碱性单细胞凝胶电泳试验(SCGE),是一种检测哺乳动物单细胞DNA断裂的新技术[1,2]。作者应用SCGE检测了受γ射线照射后小鼠及从事X射线探伤工人的外周血淋巴细胞DNA单链断裂(DNAssb)的情况。 一、材料和方法 1.实验动物及照射:雄性昆明系小鼠购自原苏州医学院动物部,6~7周龄,体重(20±2)g。用60Co外照射治疗机全身照射小鼠。球靶距70 cm,吸收剂量0.5和5.0 Gy,吸收剂量率为90.3 cGy*min-1。
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单细胞凝胶电泳检测单细胞DNA损伤
遗传毒理学家主要关注的三大遗传学损伤,即基因突变、染色体畸变及染色体数目改变.这些损伤多因DNA受损所致,其本质是相同的,区别在于其损伤的程度[1].由此DNA损伤与修复就成为生物医学领域特别是遗传毒理学及肿瘤学等领域的核心内容之一.传统的毒理学检测终点是组织病理学改变,过程繁琐且不理想.迄今为止检测DNA损伤与修复敏感的终点是测量DNA单链断裂[2].
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单细胞凝胶电泳在放射医学中的应用进展
单细胞凝胶电泳技术(Single Cell Gel Electrophoresis Assay,SCGE),又称彗星试验(Comet Assay)或微凝胶电泳(Microgel Electrophoresis,MGE),它是在核酸沉淀法(Nucleoid Sedimentation)和晕圈分析(Holo Assay)及弱碱性条件下的单细胞凝胶电泳等检测技术基础上逐步发展起来的一种在单细胞水平检测哺乳类有核细胞DNA断裂的新技术.它主要包括Olive等(1984)建立的测定DNA双链断裂(dsb)的中性微凝胶电泳技术和Singh等(1988)建立的测定DNA单链断裂(ssb)的碱性微胶电泳技术.
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单细胞凝胶电泳技术的应用与进展
1 检测原埋 DNA为紧密的四级超螺旋结构,一般情况下,部分DNA的单链断裂对DNA的结构影响不大,不容易释放。在单细胞凝胶电泳(SCGE)实验中,由于细胞裂解液的作用,膜结构受到破坏,胞内成份扩散到裂解液中,DNA由于相对分子质量大留在原位。在碱性条件下,DNA解螺旋,DNA的断链和亲碱性片段释放,在电场中移动,形成彗星样图像。通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移距离可以测定DNA的损伤程度[1]。2 实验方法 目前多采用Singh等的"三明制"法制板[1],第一层为正常熔点琼脂糖(NMA),第二层为含有细胞的低熔点琼脂糖(LMA),第三层为LMA。凝胶的浓度为0.5%~1.0%,每层用量为85~100μl。将制备的玻片浸入预冷的裂解液中使细胞裂解,对于特殊细胞如精子,需用酶作特殊处理[2]。在碱性条件下,使DNA解螺旋后电泳,中和玻片后,染色,荧光显微镜下阅片。国内学者在制板、铺胶等方法学上有许多改进[3,4]。3 研究及应用领域
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大鼠脑缺血再灌注DNA单链断裂与凋亡
观察脑缺血再灌注损伤中DNA单链断裂、神经元凋亡的变化,探索它们的关系,发现脑缺血再灌注先引起神经元DNA单链断裂,随后出现神经元凋亡,DNA单链损伤可能是神经元凋亡的机制之一.