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浙江省衢州市应用聚合酶链反应检测钩端螺旋体效果评价
目的 建立聚合酶链反应(PCR)检测钩端螺旋体的快速方法,应用于宿主动物钩端螺旋体的快速检测,同时比较PCR方法和常规检测的效果.方法 根据中国疾病预防控制中心提供的引物,以致病性大肠杆菌、产毒性大肠杆菌、溶藻弧菌、沙门菌、霍乱弧菌、痢疾志贺菌、非O1、O139霍乱弧菌、副溶血性弧菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7为对照,建立PCR检测钩端螺旋体的快速方法,用于钩端螺旋体的快速检测.结果 衢州市2006年分离钩体菌株进行PCR鉴定结果与血清学鉴定结果相符.100只鼠和100只蛙肝、脾、肾标本进行PCR检测,PCR检测阳性率10%,钩体菌株培养分离率仅为1%,二者差异有统计学意义(χ2=16.05,P<0.005).结论 PCR检测钩端螺旋体灵敏度高、特异性强,可用于钩端螺旋体的快速检测.
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霍乱弧菌的PCR方法检测及耐药性分析
目的 建立PCR检测霍乱弧菌的快速方法,应用于水源、海产品霍乱弧菌快速检测;了解霍乱弧菌的耐药性.方法 根据霍乱弧菌的肠毒素基因A亚单位(ctxA)的保守序列,设计引物,以副溶血弧菌和沙门菌为对照,建立PCR检测霍乱弧菌的快速方法,用于霍乱弧菌的快速检测;应用美国德灵公司生产的Walkway40微生物鉴定和药敏分析系统对70株霍乱弧菌进行耐药性检测.结果 70株霍乱弧菌出现特异性荧光,其他菌不出现荧光,灵敏度高、特异性强,可在8 h内作出诊断.霍乱弧菌对大部分抗生素敏感,对复方新诺明耐药率较高.结论 PCR检测霍乱弧菌灵敏度高特异性强可用于水源、海产品霍乱弧菌快速检测;霍乱弧菌对大部分抗生素敏感.
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血清中乙肝病毒全长cccDNA的检测及其临床意义
共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)的复制中间体.HBV复制活跃时,cccDNA可从损伤的肝细胞释放入血.因此,血清中出现cccDNA是肝细胞受损的早期标志~([1]).本研究用长链PCR方法从血清中扩增HBV cccDNA全序列,结合血清中HBV PreS1抗原、HBV标志物和丙氨酸转氨酶(ALT)的检测结果,分析血清中cccDNA检出率与HBV PreS1抗原表达及肝细胞损伤的相关性.
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甲基化敏感限制酶结合定量PCR检测DNA甲基化方法的建立与应用
启动子CpG岛高甲基化是抑癌基因失活的重要机制之一,对于肿瘤的早期诊断、分子分型、预后判断等均具有较大的价值[1-2].目前较常用的DNA甲基化检测技术是基于亚硫酸氢盐处理的甲基化特异PCR方法(MSP),但该技术需使用强碱对DNA进行处理,导致绝大多数DNA分子发生断链.
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实时定量聚合酶链反应在鉴别诊断结节病和结核病中的应用
结节病与结核病的组织病理学均属于肉芽肿病变,当结核病标本未见干酪样坏死(即增殖型结核病),且抗酸染色阴性时,两种疾病的鉴别诊断非常困难.为了解决这一难题,上海市肺科医院呼吸科曾建立一种实时定量PCR方法[1],通过MTB DNA进行定量分析,鉴别结节病和抗酸染色阴性的增殖型结核病.为验证该方法的可靠性,我们在前期研究的基础上扩大样本量,检测104例经病理证实的结节病标本,并设定结节病和结核病鉴别诊断的定量标准.
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渗透性腹泻状态下小鼠结肠水通道蛋白8表达的研究
水通道蛋白为存在于动、植物和微生物中的一种小分子疏水性跨膜蛋白,可选择性通透水,本研究以水通道蛋白8(AQP8)为研究对象,采用免疫组化和实时荧光定量PCR方法,测定渗透件腹泻状态下不同时间点结肠AQP8 mRNA表达量,探讨AQP8在结肠水转运中的作用.
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口腔幽门螺杆菌感染的处理策略——必须面对的一个重要问题
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的发现是医学史上的一件大事,它的发现使人们对慢性胃炎、消化性溃疡等上胃肠道疾病的发病机制及其治疗有了全新的认识.1989年Krajden等[1]及1993年Ferguson等[2]相继从牙菌斑、唾液中分离培养出Hp,并推测口腔可能是Hp的另一定居地.此后多位学者采用不同方法从Hp阳性的胃病患者口腔中分离出Hp或检测到Hp的特定基因[3-4],表明口腔Hp与胃内Hp具有一定相关性;并从基因检测和提取培养的细菌指纹图谱分析结果,提示两处的细菌具有同源性[5].Eskandari等[6]采用PCR方法在无胃Hp感染者的牙菌斑中检测到Hp.以上发现说明人类口腔环境也适宜于Hp聚集和定植.
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急性髓系白血病患者骨髓细胞Ang2 mRNA表达水平及其临床意义
血管生成素2(angiopoietin2,Ang2)为内皮细胞特异性生长因子之一,近年来研究发现其表达水平与急性髓系白血病(AML)预后密切相关[1-4].我们通过实时荧光定量PCR方法对57例初诊AML患者骨髓单个核细胞(MNC)中的Ang2 mRNA表达水平进行检测,并分析其与临床的关系.
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多重等位特异PCR方法在四川人群β地中海贫血基因检测中的应用
我们采用多重等位特异PCR(multiple allele specific PCR,MAS-PCR)方法对四川人群β地中海贫血(β地贫)患儿及家人进行CD17、CD41-42、nt-28、nt-29和IVS-Ⅱ654 5种常见突变的检测,并对高危胎儿实行产前诊断,确定此方法的可靠性.
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醒脑开窍液对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织VEGF、HIF-1α表达影响随机平行对照研究
[目的]观察醒脑开窍液对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织VEGF、HIF-1 α表达影响.[方法]使用随机平行对照方法,将45只健康清洁级SD大鼠(体重210~230g,平均体重210±20g,鼠龄4~5周),采用Zea longa大脑中动脉内栓线阻断方法复制脑缺血再灌注损伤模型.造模成功45只大鼠按随机数字表分为三组,15只/组,模型组、尼莫地平组、醒脑开窍液组,分别灌胃干预(剂量1mL/100g体重,模型组等量生理盐水).连续干预7天.采用改良Bederson's评分法,观察大鼠神经行为学改变.实时定量PCR方法检测VEGF与HIF-1 αmRNA表达,Western blot方法检测蛋白表达.[结果]VEGF mRNA尼莫地平组、醒脑开窍液组3d高于模型组(P<0.05),不同时间(1d、3d、7d)醒脑开窍液组均与尼莫地平组无显著性差异(P>0.05);HIF-1 α mRNA表达醒脑开窍液组7d高于模型组(P<0.05),不同时间(1d、3d、7d)醒脑开窍液组均与尼莫地平组无显著性差异(P>0.05).[结论]醒脑开窍液、尼莫地平均可提升大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织VEGF、HIF-1 0[表达,干预时间越长,提升幅度越大,具有时效关系.
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红嘴鸥中肠致病性大肠埃希菌快速检测及其系统进化分析
目的 用PCR法快速检测红嘴鸥(Larus ridibundus)中的肠致病大肠埃希菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC),调查昆明红嘴鸥中致病性大肠埃希菌(EPEC)的流行情况并对其进行系统进化分析.方法 采集87份新鲜红嘴鸥粪便样品,PCR方法扩增EPEC bfpA基因,对所分离到的菌株进行测序,并对其中1株菌的核苷酸序列进行系统进化分析.结果 87份红嘴鸥粪便中检测到34份阳性样品,阳性率为39.08%.利用PCR方法检测EPEC特异性强、敏感性高.系统进化分析表明本研究所检测到的大肠埃希菌为EPEC.结论 利用PCR法首次从红嘴鸥粪便中检测到EPEC,并且具有较高的感染率.调查结果表明EPEC可能是导致红嘴鸥腹泻的病原菌之一.本研究为EPEC的监测及流行病学调查提供了一种简便而快速的检测手段.
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应用荧光定量PCR检测急性白血病微小残留病的临床意义
对于完全缓解的白血病患者,体内存在的微小残留病(MRD)是复发的主要根源?本实验是通过双链DNA结合SYBR Green I的实时PCR方法应用免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)基因重排作为ALL微小残留病的检测靶基因,实验证明: MRD可以作为预后风险的一个独立指标.SYBR Green Ⅰ实时PCR是一种更适于临床应用的简单、快速、便宜、可行,特异性好、敏感性又高的技术方法.
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9年内质粒介导喹诺酮类耐药决定子发生率
近年来,一些导致低水平喹喏酮类药物耐药的质粒介导耐药(PMQR)基因陆续被发现.本研究选取1998-2001年和2005-2006年韩国一所三级医院血标本中分离的261株大肠埃希菌、135株肺炎克雷伯菌和65株阴沟肠杆菌,采用多重PCR方法筛检qnrA、qnrB、qnrC、qnrS、aac(6′)-Ib和qepA 6个PMQR基因,并直接测序,aac(6′)-Ib阳性PCR产物使用BtsCI酶切,以明确aac(6′)-Ib-cr变异体.结果,461株中37株(8%)携带有上述6种PMQR中的1种,其中13株(5%)为大肠埃希菌,13株(10%)为肺炎克雷伯菌,11株(17%)为阴沟肠杆菌.
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PCR方法检测犬细小病毒生长动态及与其它方法的比较
将可疑犬细小病毒(CPV)粪样分别接种于FK81、MDCK、BHK21、Vero细胞及鸡胚成纤维细胞中,用PCR、HA、ELISA三种方法检测在上面5种细胞中CPV的生长动态,结果表明:PCR方法能在第1、2、3代FK81细胞中检出CPV的生长,而HA、ELISA则只在第3代FK81细胞中才能检出CPV的生长;PCR方法能在MDCK、BHK21、Vero细胞及鸡胚成纤维细胞中检出CPV的生长,而HA、ELISA则均不能.因此,PCR方法可作为培养细胞中检测病毒生长动态的一种灵敏、快速的方法.
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温州市夏秋季69例病毒性脑膜炎病原学特点分析
病毒性脑膜炎(VE)是临床常见的一类中枢神经系统病毒感染性疾病,由多种病毒感染引起.国内外文献报道其致病原多以肠道病毒(EV)及疱疹类病毒为主.本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及探针PCR方法对温州市夏秋季节69例临床诊断为病毒性脑膜炎患儿进行病原学检测,并结合临床特点,作如下报告.
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福氏志贺菌4av和Yv血清型PCR鉴定方法的建立及应用
目的 建立福氏志贺菌4av和Yv血清型PCR鉴定方法.方法 根据福氏志贺菌4av和Yv血清型O抗结构,针对O抗合成基因wzx、Ⅳ型抗原决定基因gtrⅣ和MASF Ⅳ-1抗原决定基因opt,建立血清型4av和Yv的PCR鉴定方法.并应用该方法对126株福氏志贺菌临床分离株进行血清型检测.结果 建立了一种福氏志贺菌4av和Yv血清型PCR鉴定方法,在一个反应中包括4对引物,Yv血清型PCR扩增为wzx及opt阳性;4av血清型PCR扩增为wzz、opt及gtrⅣ阳性.该方法可将4av和Yv血清型与目前已知的其他福氏志贺菌血清型完全区分.对126株不同血清型福氏志贺菌临床分离株的鉴定结果显示,该方法具有很好的特异性.结论 本研究建立的福氏志贺菌4av和Yv血清型PCR鉴定方法,可以用于志贺菌检测和监测.
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RAPD技术在寄生虫分类和鉴定中的应用
RAPD技术是由Williams[1]和Welsh[2]两个研究小组于1990年后发展起来的一种以PCR为基础的基因分析方法,是对标准PCR方法的一种改进.该技术具有简便、快速、实验成本低的优点,可作为基因标志用来鉴别生物种群的种株、型,构建世系发育树状图以及用于耐药性研究[3].在寄生虫学领域RAPD技术已广泛应用于蠕虫、原虫及昆虫的分类鉴定[4].为此,本文就RAPD技术的原理、特点及其在寄生虫的分类鉴定等方面的应用作一综述.
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不同方法检测血清HBV DNA水平的比较
目前,检测慢性乙型病毒性肝炎血清或血浆病毒的几种分子生物学技术均建立在靶序列或者信号扩增的基础之上,如Quantiplex HBV DNA(bDNA)技术即是基于分支链DNA技术的信号扩增,而COBAS Amplicor则是基于引物特异的靶序列扩增.其他尚有基于核苷酸交联技术的定量检测方法也为实验室所常用.然而以上方法对于开展临床大规模检测来说成本昂贵,不适用于经济不发达地区.实时定量PCR方法因其灵敏度高、检测范围宽、定量值准确、成本低而为临床检测所常用.本研究采用两种实时定量PCR(LightCycler及Mx3000p)方法进行HBV DNA定量检测,同时与COBAS Amplicor方法进行对照.
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免疫组化和PCR方法检测乳癌腋窝淋巴结微转移的比较
目的:对乳癌腋窝淋巴结微转移患者采用免疫组化和PCR方法检测,观察和分析其的诊断效果。方法此次研究中,一共收集了216个采用常规组织学检查为阴性的腋窝淋巴结,然后分别采用免疫组化和PCR方法进行检测,分别检测MUC1蛋白和MUC1mRNA表达。结果经过检测发现,MUC1mRNA阳性检出率为66.0%与蛋白表达检出率21.0%相比较,差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论临床上,采用PCR方法检测乳癌腋窝淋巴结微转移更为敏感,进而为患者预后和临床治疗提供一定的参考。
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粉丝中植物源性成分的PCR定性检测方法研究
本研究针对绿豆、豌豆、玉米、红薯与马铃薯这5个物种的特异基因序列,设计出多对引物,并分别从每个物种中选择特异与扩增效率好的一对引物进行实验.通过特异性实验、重复性实验及灵敏性实验后,终获得5对引物,即绿豆引物MP4、豌豆引物PEP2、玉米引物CP1、红薯引物SP2、马铃薯引物POP2.采用这5对引物进行PCR扩增,就可以检测出粉丝中这5种植物源性成分.本方法准确、灵敏、快速,检测的灵敏度达5%.