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甲基化敏感限制酶结合定量PCR检测DNA甲基化方法的建立与应用
启动子CpG岛高甲基化是抑癌基因失活的重要机制之一,对于肿瘤的早期诊断、分子分型、预后判断等均具有较大的价值[1-2].目前较常用的DNA甲基化检测技术是基于亚硫酸氢盐处理的甲基化特异PCR方法(MSP),但该技术需使用强碱对DNA进行处理,导致绝大多数DNA分子发生断链.
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限制酶分析在假单胞菌及其L型鉴定中的应用
假单胞菌是临床常见的致病菌之一,铜绿假单胞菌为医院内感染常规检测菌.为建立对其快速、准确鉴定的方法,我们对获自中国科学院AS菌种保藏中心的14株假单胞菌标准株(包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌和嗜麦芽假单胞菌等)及临床分离到的铜绿假单胞菌,用EcoRⅠ、 HindⅢ、SmaⅠ和PstⅠ(Promega及华美公司)等限制性内切酶分析其染色体的限制酶图谱(REP),其中EcoRI和SmaI对这些菌种的鉴别效果较好.
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血红蛋白病产前诊断的方法主要有哪些?
问:血红蛋白病产前诊断的方法主要有哪些?答:产前诊断出严重的血红蛋白病,及时终止妊娠是预防的重要方法.目前可采用的新方法是:(1)抽取胎血,检查珠蛋白链合成速率及异常肽链合成诊断地中海贫血和某些异常血红蛋白病.(2)DNA点杂交以诊断缺失型α-地中海贫血.(3)限制酶酶谱分析和RFLP连锁分析诊断胎儿血红蛋白病.(4)寡核苷酸杂交诊断β-地中海贫血.(5)基因体外扩增产前诊断α及β地中海贫血.
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糖原合成激酶-3在心血管疾病中的研究进展
糖原合成激酶-3(glycogen synthase kinase 3,GSK-3)在体内广泛表达,属于丝氨酸/苏氨酸激酶,在1980年其首次被确认具有调控糖原合成的作用,是一种糖原合成的限制酶。基于部分肽链的测序结果,在1990年GSK-3第一次被克隆合成[1]。GSK-3高度保守,在其蛋白激酶结构域上苍蝇和人类显示>90%同源性序列[2]。GSK-3家族已知有两个亚型为GSK-3α(51KD)和GSK-3β(47KD),二者激酶结构域有98%的同源性,而其激酶结构域非常高的同源性也限制了各亚型特异性的小分子抑制剂发展前景。大量研究表明GSK-3参与调控多种心血管疾病的病理过程,如心肌老化、心肌细胞增殖、缺血性损伤与心肌肥厚及纤维化。因此本文重点阐述GSK-3各异构体生物化学特征,及其在心血管疾病中的作用。
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乙型肝炎病毒基因型与治疗
一、HBV基因型检测方法分析病毒全碱基基因序列以分子系统树判定HBV基因型的方法,需时、费力且欠实用.作者早年研究证实,单依S基因序列即完全可以确定.然而这也需要处理大量检体,颇为繁琐,遂行深入探索,终于开发出了应用S基因区为引物的PCR检测法.此即采用能识别各基因型特异性序列的限制酶并依其限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymor-phism:RFLP)而确定基因型的技术.尔后,又研究成功采用识别前-S2区基因型特异性区氨基酸的单克隆抗体的EIA检测法,更简化了检测手续.只是采用本法由于引物结合部位的甚微变异或抗体识别部位变异,仍可有百分之几病例不能获得确定.对于此类病例,则必须根据S基因序列的实测结果再依系统树分析判定.
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孕妇及新生儿巨细胞病毒感染的聚合酶链反应及限制酶分析
目的 建立套式-聚合酶链反应(Nested-PCR)加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒(HCMV).方法 在HCMV直接早期蛋白EcoRIJ DNA片段内,自行设计两对引物,建立Nested-PCR检测HCMV DNA,同时结合病毒分离检测临床标本.结果 23例新生儿肝炎综合征患儿中,10例病毒分离及Nested-PCR均阳性;1例病毒分离阴性,但Nested-PCR阳性.对58例妊娠早期孕妇血标本进行检测,Nested-PCR阳性率为9%,病毒分离阳性率则为7%.结论 Nested-PCR加限制性酶切分析是一种临床检测HCMV的快速有效手段.
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限制性内切酶的命名及正斜体
已发现的限制酶种类众多,Smith Ho和Nathans D于1973年提出了一个命名系统,已被学术界接受,其他名原则是根据分离出这种酶的细菌的分类学上的属名,种名和菌株名来命名。限制性内切酶的命名分别为宿主属名第一个字母、种名头两个字母、菌株号、后是菌株中分离出酶的序列号。前3个字母应该斜体,首字母大写,序列号为罗马数字。
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他汀类药物临床应用的多效性
他汀类药物是内源性胆固醇合成限制酶——三羟基三甲基戊二酰辅酶A(HMG-COA)还原酶抑制剂,该类药物以其有效的降脂作用广泛应用于临床.近年来,随着人们对他汀类药物的深入研究,发现其还具有降脂以外的其他作用,并且其降脂外作用日益受到广大专家、学者的重视.因此,他汀类药物在临床治疗中的作用和地位日益显现.本文就其临床应用的多效性综述如下.
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复合PCR-RFLP技术检测ABO基因型
目的 研究复合聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分型人类ABO基因型.方法 在每一个反应管内同时扩增ABO糖基转移酶基因中2个特异性片段,然后于同一管内进行Kpn Ⅰ和Alu Ⅰ限制酶消化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染,对武汉地区125例汉族无关个体作ABO基因型分型.结果 ABO的6种基因型分型明确,125例汉族人ABO基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡.结论 该方法操作简单,分型明确,重复性好,适用于法医学鉴定.