首页 > 文献资料
-
在β地中海贫血着床前遗传学诊断中应用多重置换扩增进行预处理的临床分析
目的 分析应用多重置换扩增技术(multiple displacement amplification,MDA)进行全基因组扩增的预处理是否影响β地中海贫血着床前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)的准确效能. 方法 回顾性地分析2009年1月至2013年6月,因双方均为β地中海贫血携带者而行PGD治疗的周期资料,其中34个周期采用多重巢式聚合酶链反应(PCR)结合反向斑点杂交技术对单细胞进行诊断,另有38个周期行MDA进行全基因组扩增的预处理后,再结合反向斑点杂交技术进行诊断. 结果 两组患者在年龄、获卵数等实验室指标上无统计学差异.MDA组未检出(扩增失败)率为9.79％,低于行巢式PCR组的15.24％,而杂合子率46.33％则略高,但两种方法在诊断结果上并无统计学差异. 结论 应用MDA技术进行全基因组的预扩增可有效增加检测模板,实现多位点及多种疾病的诊断,而且不影响β地中海贫血地贫基因的诊断效能.
-
植入前遗传学诊断中心与其它中心合作模式的初步探讨
目的 研究植入前遗传学诊断(PGD)中心接收外送标本进行诊断模式的可行性. 方法 回顾性对比分析外接标本与本中心同期地中海贫血PGD周期的诊断结果. 结果 外接标本与本中心的a地中海贫血和β地中海贫血患者的胚胎实验室指标无统计学差异(P＞0.05).外接标本a地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为27.92％、35.10％、36.98％、16.93％,本中心α地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为27.10％、38.01％、34.89％、14.63％,两组间比较无显著性差异(P＞0.05);外接标本p地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为30.48％、44.28％、25.24％、9.87％,本中心p地中海贫血患者的正常胚胎率、杂合子胚胎率、异常胚胎率、诊断失败率分别为25.71％、46.43％、27.86％、7.28％,两组间比较亦无显著性差异(P＞0.05). 结论 外接标本经过当地生殖中心的处理,运输至我中心检测不会显著影响诊断结果,PGD诊断中心接收外送标本进行合作的模式是可行的.
-
血红蛋白A2微柱层析检测方法
地中海贫血是一种对人类健康危害较大的遗传性疾病,我国南方较常见.本文应用美国HELENA实验室的微柱层析法试剂盒测定血红蛋白A2(HbA2)含量,并结合其他方法可方便地初筛出患者是α地中海贫血或β地中海贫血,该法具有简便、准确、重复性好的特点,易于推广应用.
-
降低贵州省出生缺陷危害的思考和建议
贵州省在执行国家科技部<贵州少数民族主要出生缺陷发生的影响因素及防治研究>及省科技厅<贵州农村β地中海贫血、新生儿溶血症出生缺陷综合干预模式建立及评估研究>两项重大攻关项目过程中,在省内33个县、市、区进行了出生缺陷现状及相关因素调研,现提出我们的思考和建议.
-
HPLC法筛查中、重型β地中海贫血的结果分析
目的:总结用高效液相色谱分析法(HPLC)筛查中、重型β地中海贫血(简称地贫)的经验,为临床诊断和治疗提供参考.方法:分析45例HPLC法胎儿血红蛋白F(HbF)明显偏高,结果提示为中间型或重型β地贫患者的地贫筛查和基因诊断结果.结果:45例地贫筛查结果提示为中间型或重型β地贫的患者,有42例基因诊断为中间型或重型β地贫,共有12种基因型；另有3例基因诊断结果为轻型β地贫,其中2例基因型为β 41-42/N,另外1例为β 17/N.此外,45例患者地贫筛查结果显示,有3种基因型共5例患者的血细胞分析结果出现MCV和MCH高于截断值的情况.结论:HPLC法是筛查中间型和重型β地贫理想的方法,地贫筛查除了使用红细胞参数外,好也能进行血红蛋白分析.
-
分析筛查新生儿干血斑β地中海贫血的方法及效果
目的:探讨全自动毛细管微量血红蛋白电泳技术在新生儿β地中海贫血筛查中的应用价值.方法:收治新生儿145902例,采用Sebia全自动毛细管电泳仪进行血红蛋白电泳.对95058例标本以HbA界值法读出β地中海贫血筛查结果,对50844例标本根据HbA值结合HbA2/HbA比值读出β地中海贫血筛选结果.随机选取598份结果判读β地中海贫血筛选结果,同时基因检测为β地中海贫血金标准.结果:HbA界值法β地中海贫血符合率45.2%、假阳性率54.8%;综合分析法β地中海贫血符合率73.5%,假阳性率26.5%.HbA与综合分析敏感度与特异度分别54.54%、90.90%和97.57%、99.30%.综合分析法在阳性预测值与筛选准确性等方面高于HbA界值法.结论:综合分析法在筛选新生儿β地中海贫血,判断电泳结果上灵敏度与精确度等较高.
-
胎血HbA定量分析诊断β地中海贫血的价值
目的探讨胎儿脐血HbA定量在孕中、晚期诊断β地中海贫血(β地贫)的价值. 方法应用全自动电泳分析系统对75例胎儿脐血行血红蛋白(Hb)电泳并作HbA定量分析;用反向点杂交(RDB)法检测β地中海贫血基因DNA为诊断的金标准. 结果电泳法对重型、中间型β地贫及HbE的检出灵敏度、特异度和符合率较高,误诊率及漏诊率为0,而对轻型β地贫及其他类型的检出灵敏度、特异度及符合率较低,误诊率、漏诊率较高. 结论胎儿脐血HbA定量结合家系史可实现生化水平上对孕中晚期胎儿β地中海贫血的初步诊断,反向点杂交法结合HbA定量分析有利于提高β地贫的诊断准确率.
-
β珠蛋白生成障碍性贫血聚合酶链反应-反向点杂交法基因诊断
β珠蛋白生成障碍性贫血亦称β地中海贫血是由于β珠蛋白基因座位突变导致β珠蛋白肽链合成减少或缺乏所引起的一类遗传性溶血性疾病.该病呈常染色体隐性遗传,在中国华南及西南地区是一种常见病,广东地区人群发生率达1.36 %～4.90 %.本病的轻型患者可以没有临床症状,重症患者一般在出生后一年内开始表现出严重的贫血,终身需要输血治疗.由于缺乏有效的根治性手段,目前对β地中海贫血以预防为主.通过对人群中地中海贫血突变基因携带者的筛查,有针对性地指导婚育,开展产前诊断工作,从而杜绝重症患儿的出生.本文利用聚合酶链反应-反向点杂交技术(PCR-RDB)对广东中山地区的288例可疑患者进行了基因水平的分析,结果报道如下.
-
定点诱变法构建β地中海贫血IVS-2-654(C＞T)突变基因质粒
目的 构建含β地中海贫血(简称β地贫)IVS-2-654 (C＞T)突变基因的质粒.方法 以含β珠蛋白野生型基因的质粒DNA为模板,采用重叠延伸PCR (OE-PCR)定点诱变后行TA克隆的方法构建含IVS-2-654 (C＞T)突变基因的质粒.结果 双向测序结果表明:重组质粒的确含β地贫IVS-2-654 (C＞T)突变基因,β珠蛋白IVS-2-654处的碱基已由C突变成T,其余序列与野生型完全相同,成功实现了定点诱变.结论 成功地构建了含β地贫IVS-2-654 (C＞T)突变基因的质粒,进一步为该病基因诊断与筛查技术的研究奠定了实验基础；OE-PCR定点诱变法简便、经济,值得推广应用.
-
广西三城市7岁以下儿童β地中海贫血发生率及其基因突变类型的研究
目的 对广西南宁、柳州、百色地区7岁以下儿童进行β地中海贫血发生率及基因突变类型分析.方法 按分层整群随机抽样方法,抽取南宁、柳州和百色地区7岁以下儿童共2261名,进行血常规检测、血红蛋白(Hb)分析和β珠蛋白基因分析.结果 2261名儿童中,Hb分析显示125名HbA2升高,经基因分析诊断为β地中海贫血杂合子.β地中海贫血的发生率为5.53%.共检出CD41-42基因突变59例,CD17基因突变33例,TATA box nt-28基因突变18例,IVS-Ⅱ-654基因突变7例,CD43基因突变3例,HbE基因突变3例,CD71-72基因突变1例,及TATAbox nt-29基因突变1例.基因型频率依次为:CD41-42为47.20%、CD17为26.40%、TATAbox nt-28为14.40%、IVS-Ⅱ-654为5.60%、CD43为2.40%、HbE为2.40%、CD71-72为0.80%和TATAbox nt-29为0.80%.结论 研究显示调查的3个地区地中海贫血发生率较高;7岁以下儿童中存在β地中海贫血基因突变携带者.
-
补气益精生血方药治疗儿童β地中海贫血随机对照研究
目的 评价补气益精生血方药对儿童β地中海贫血的临床疗效.方法 采用随机对照双盲双模拟临床研究,将64例β地中海贫血患儿随机分为中药组和对照组,中药组口服黄芪、党参及龟甲颗粒,对照组口服安慰剂颗粒,疗程12周.观察治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、胎儿血红蛋白比例(HbF)等血液学指标及中医四诊症状.结果 疗程结束时,中间型患儿中药组Hb为(9.02±0.98) g/dL,对照组为(7.27±0.95)g/dL,组间比较差异有统计学意义(t=6.729,P=0.003);中药组HbF较治疗前显著升高(t=-3.341,P=0.011),RBC、MCH及中医四诊症状均有一定改善;中药组总有效率为59.1％(13/21),对照组为4.5％(1/21),中药组显著优于对照组(P＜0.01).重型患儿有类似疗效,但逊于中间型患儿.结论 补气益精生血方药治疗儿童β地中海贫血具有较好疗效.
-
1例罕见β地中海贫血基因突变及其家系分析
目的 鉴定1种罕见的β地中海贫血突变类型.方法 血液学分析采用血细胞分析仪及全自动快速电泳分析系统；α珠蛋白常规突变检测采用Gap-PCR；β珠蛋白常规突变检测采用反向点杂交法；样品的基因突变及基因型用β珠蛋白基因全长测序技术确定.结果 先证者具有典型的β地中海贫血临床特点和血液学特性,HbF为5.8％,其父母各项指标均正常.未发现先证者及其家庭成员有已知的α-/β-地中海贫血基因突变,测序发现先证者及其母亲均为CD2 (CAT-CAC)杂合子,父亲为CAC纯合子；先证者有β珠蛋白exon1 CD27 (GCC-GAC)突变,编码的氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸,未发现其父母有CD27突变.结论 CD27 (GCC-GAC)突变是罕见的β珠蛋白基因点突变,有助于指导人群筛查、遗传咨询和临床诊断.
-
利用反向斑点杂交技术检测β-地中海贫血基因突变
目的探讨反向斑点杂交技术(RDB)在β地中海贫血基因突变检测中的应用,并了解广东顺德地区β地中海贫血基因突变类型及其发生频率.方法应用RDB对48例受检者进行β地中海贫血基因突变检测,并分析其类型及发生频率.结果 161例可疑β地中海贫血患者共检出37例β地中海贫血基因突变,其中包含6种基因突变类型,其发生频率高低排列依次为:CD41/42 21例(43.8%)、IVS-nt654 9例(18.8%)、CD17 9例(18.8%)、TATAnt-28 6例(12.5%)、CD71/72 2例(4.2%)、CD27/28 1例(2.1%).结论 RDB用于β地中海贫血基因诊断效率较高,是目前检测β地中海贫血基因突变的一种较好的方法.研究结果对该地区开展遗传咨询、基因分析及产前诊断具有重要意义.
-
β地中海贫血的γ珠蛋白诱导治疗及其与microRNA关系
β地中海贫血是β珠蛋白基因突变引起的慢性溶血性贫血,属于遗传性血红蛋白病.此疾病在我国好发于广东、广西、福建等地区,其治疗主要包括输血、铁螯合剂、造血干细胞移植、脾脏切除、诱导HbF生成以及基因治疗等.该疾病的死亡率仍然较高.近十几年来,针对β珠蛋白合成不足进行的研究主要集中在正常β珠蛋白基因的导入和内源性γ珠蛋白等基因的再次诱导激活两个方面.随着小分子RNA(microRNA,miRNA)的研究成为热点,发现在β地中海贫血中存在多种miRNA的失调表达,部分miRNA参与诱导γ珠蛋白的合成,对β地中海贫血起到治疗作用.因此,研究miRNA与β地中海贫血的关系,可望为靶向治疗β地中海贫血提供理论依据.本文就地中海贫血的γ珠蛋白诱导治疗及其与miRNA的关系作一综述.
-
β地中海贫血的珠蛋白基因诱导疗法
珠蛋白基因诱导疗法是目前针对β地中海贫血一种仍在不断探索中的新型治疗手段.本文对β地中海贫血珠蛋白基因诱导治疗的具体原理及目前的γ珠蛋白基因诱导药物作一综述.
-
HLA 2个位点不合同胞脐血移植治疗1例重型β地中海贫血
造血干细胞移植是目前治疗重型β地中海贫血有效手段.本研究是国内第一次运用新的预处理和GVHD防治方案进行了HLA 2个位点不合同胞脐血移植,并成功地治疗1例重型β地中海贫血患儿.男性病例,3.4岁,体重14kg,生后6个月诊断为重型β地中海贫血(HbA1 1.7%,HbA21.7%,HbF 86.6%,基因突变型为CD17,A→T/IVS-II-654,C→T),其母再次怀孕5个月时行产前诊断和HLA配型,胎儿为杂合子17/N,HLA 2个位点与患儿不合.收集脐血120毫升,有核细胞1.830×109,CFU-GM16.653×105,CD34+细胞3.11×106.预处理方案:大剂量输血,连续静脉注射去铁胺,马利兰16 mg/kg+环磷酰胺200 mg/kg+抗胸腺细胞球蛋白90mg/kg加用羟基脲30mg/(kg@d)×33,氟哒拉宾20 mg/(m2@d)×3.输入有核细胞12.06×107/kg,CFU-GM1.098×105/kg,CD34+细胞2.04×106/kg.GVHD预防:环孢菌素A+骁悉(MMF).结果表明,移植后15天出现Ⅰ度急性GVHD,第17天中性粒细胞＞0.5×109/L,第50天血小板＞50×109/L,第80天后血红蛋白≥12.5g/L,停止输血.移植后60天和200天作HLA分型及地中海贫血基因检测,HLA分型与脐血一致,基因突变型已由重型地中海贫血纯合子转变为与供者一样的杂合子CD17,A→T/N,第120天红细胞血型由A型转变成O型.结论:新的预处理和GVHD防治方案使此例获得移植成功,此结果有助于进一步降低移植失败率和严重GVHD的发生率,扩大脐血移植范围.
关键词： β地中海贫血 脐血移植 HLA 2个位点不合同胞 -
东南亚缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症伴β地中海贫血一个家系的产前诊断
目的:对1例东南亚缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(SEA-HPFH)合并β地中海贫血的家系进行产前诊断.方法:采用跨越断裂点聚合酶链反应技术(Gap-PCR)和反向斑点杂交(RDB)方法对该家系进行产前诊断.结果:母亲血液学表型符合缺失型HPFH基因携带者,基因型为SEA-HPFH基因携带者,而父亲血液学表型符合β地中海贫血基因携带者,基因型为IVS-Ⅱ-654杂合突变,胎儿基因型为未见异常.结论:SEA-HPFH基因携带者与β地中海贫血基因携带者婚配后有生育出中、重型β地中海贫血患儿的风险,可通过常见地中海贫血基因检测及缺失型β地中海贫血基因检测进行产前诊断.
-
β地中海贫血伴髓外造血组织瘤样增生的探讨
为了研究β地中海贫血伴髓外造血组织瘤样增生细胞形态特点其及诊断,对纵隔髓外造血组织瘤样增生用细针抽吸活组织行细胞学检测(FNAC),并与骨髓片进行比较分析.结果表明:纵隔肿块的细针抽吸活组织的细胞学涂片显示粒系细胞中可见中性中幼粒细胞、中性晚幼粒细胞、中性杆状粒细胞、中性分叶核粒细胞;红系细胞中可见早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞;并可见颗粒巨核细胞、产血小板的巨核细胞、散在血小板及成熟淋巴细胞;细胞形态及各期细胞分布与骨髓片相似,为髓外造血组织.结论:β地中海贫血伴髓外造血组织瘤样增生为罕见病,细针穿刺活检方法为一种快速、方便、有效诊断该病的方法.
-
移植后中枢神经系统淋巴组织增生性疾病一例
患儿男，5岁。患儿因确诊地中海贫血4年，拟行造血干细胞移植于2013年3月入院。2008年6月因“发热伴腹泻”就医，诊断为“β地中海贫血”。2013年4月初予Flu＋ATG＋CTX＋BU（福达拉滨＋抗胸腺球蛋白＋环磷酰胺＋马利兰）预处理后行异体造血干细胞移植术。术前查体未触及肿大淋巴结。患儿移植7d后解黑便，大便潜血阳性，临床考虑消化道出血，移植14 d后开始发热，腹泻，背部、腹部及四肢均出现皮疹，考虑消化道及皮肤急性移植物抗宿主病（GVHD）。移植后查外周血EB病毒（EBV）阴性。9月10日患儿开始出现头痛（前额明显）、伴恶心呕吐、抽搐、血压升高。头颅MRI结果显示（图1）：右侧小脑、桥脑右侧、左侧枕叶及两侧额顶叶多发异常信号影，结合临床诊断出血性脑炎。10月10日出现脑疝，昏迷，行开颅手术。术中见：脑内黄色坏死物及咖啡色陈旧性出血病变，出血较多，边界不清。
-
血红蛋白毛细管电泳筛查α地中海贫血的研究
目的 探讨应用血红蛋白毛细管电泳技术对α地中海贫血筛查方案.方法 采用荧光PCR熔解曲线技术对1000例早孕妇女进行α地中海贫血基因诊断,将α地贫基因携带者和正常孕妇分为地贫组和正常组,比较两组孕妇的血红蛋白成分差异.结果 地贫组HbA2均值为1.96,标准差为0.386,HbF均值为0.01,标准差为0.098;正常组HbA2均值为2.79,标准差为0.418,HbF均值为0.01,标准差为0.105.两组间HbA2值的差异有统计学意义(P＜0.05),HbF值无提示作用.如果取HbA2值＜2.2为α地中海贫血筛查截断值,则α地贫基因携带检出率为9/16,假阴性率为7/16;如果取HbA2值＜2.4为a地中海贫血筛查截断值,则α地贫基因携带检出率为10/16,假阴性率为6/16.结论 血红蛋白毛细管电泳方法对α地中海贫血的筛查效率不及β地中海贫血,但选择一个合理的截断值再组合其他指标仍是临床可接受的筛查方案.
