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1例罕见β地中海贫血基因突变及其家系分析
目的 鉴定1种罕见的β地中海贫血突变类型.方法 血液学分析采用血细胞分析仪及全自动快速电泳分析系统；α珠蛋白常规突变检测采用Gap-PCR；β珠蛋白常规突变检测采用反向点杂交法；样品的基因突变及基因型用β珠蛋白基因全长测序技术确定.结果 先证者具有典型的β地中海贫血临床特点和血液学特性,HbF为5.8％,其父母各项指标均正常.未发现先证者及其家庭成员有已知的α-/β-地中海贫血基因突变,测序发现先证者及其母亲均为CD2 (CAT-CAC)杂合子,父亲为CAC纯合子；先证者有β珠蛋白exon1 CD27 (GCC-GAC)突变,编码的氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸,未发现其父母有CD27突变.结论 CD27 (GCC-GAC)突变是罕见的β珠蛋白基因点突变,有助于指导人群筛查、遗传咨询和临床诊断.
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β地中海贫血基因治疗的研究进展
基因治疗是根治β地中海贫血研究的重点方向.位点控制区(LCR)的发现以及新型基因转移系统不断开发研制,给导人正常β珠蛋白基因以实现基因治疗的设想带来了希望但同时也产生了新课题;与此同时,分别从DNA和RNA水平对受损的β珠蛋白基因进行修正治疗的研究也在开展当中.随着珠蛋白基因表达调控机制研究不断深入,同时开发出安全高效的新型病毒载体,有可能终实现β地中海贫血基因治疗.
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PCR-DGGE技术检测β珠蛋白外显子Ⅰ及相邻片段突变的研究
目的建立用于分析β珠蛋白基因外显子1及相邻片段突变的变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术. 方法应用巢式PCR扩增20例β地贫病人的β珠蛋白基因外显1及相邻片段,通过垂直DGGE及time-travel DGGE确定并优化平行DGGE条件,然后对样本进行平行DGGE分析. 结果 20例样本β珠蛋白外显子1及相邻片段上的三种突变均能被检出. 结论所建立PCR-DGGE技术可用于准确检测β珠蛋白基因外显子1及相邻片段突变.
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一个少见的β地中海贫血突变家系
目的鉴定中国人中1个少见的β地中海贫血 (β-地贫)家系成员的基因转录突变 (-90 C→T). 方法表型分析采用常规的红细胞指数和血红蛋白电泳分析技术;反向点杂交技术用于检测中国人18种已知类型的β-地贫突变;β珠蛋白基因全长DNA测序技术用于确定样品的基因突变及其基因型;RT-PCR半定量法分析该突变对β-珠蛋白基因转录水平的影响. 结果家系分析发现:先证者、先证者之兄和其母亲为有典型β-地贫特征的个体,反向点杂交筛查未发现已知的β-地贫突变,DNA直接测序分析发现该家系的这3个成员均携带有1种中国人中未见报道的β地贫等位基因--β-珠蛋白基因启动子区近侧CACCC盒中-90位的C→T转录突变.RT-PCR分析显示该突变引起β-珠蛋白基因转录水平下降 (突变:2.233±0.01 vs正常:3.779±1.19;95%CI:3.060, 4.499),与其他类型的β-地贫杂合子β-基因的表达水平相当 (2.110±0.53,95%CI:1.732,2.488). 结论 -90位的C→T转录突变是中国人中未见报道的稀少类型的β-地贫转录突变.
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一种改进的大引物PCR定点诱变方法
目的建立一种改进的、简便易行的大引物PCR定点诱变技术.方法在两轮PCR中设计了两种不同的质粒DNA模板,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增.第1轮PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第2轮PCR.第2轮PCR的第1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物,两条外侧引物则在第2阶段指数扩增,所有终产物均含所需致突变位点.结果用此方法对中国人β地中海贫血15种稀少突变类型进行定点诱变,并将诱变得到的全长人β珠蛋白基因克隆到pGEM○ R-T载体后全长测序,所有克隆均鉴定为所需突变型.结论这种改进的大引物PCR定点诱变技术省时、省工,诱变的成功率可00%,适于实验室常规应用.
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地中海贫血实验诊断进展
在人类遗传疾病中,地中海贫血较为常见,它是一种隐性遗传病.地中海贫血作为一种溶血性贫血症,具有较大的地域性差异,我国南方为地中海贫血的多发地区,其具有胎儿死亡率高、发病率高的特点,临床上目前还没研究出彻底治愈地中海贫血的方法.所以选择合理的实验方法诊断地中海贫血,是预防重型地中海贫血的一项有效措施,在产前诊断中,可诊断出重型地贫胎儿,预防患儿出生.本文主要对地中海贫血的各种实验诊断方法进行了综述.
