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安徽省马鞍山市细菌性痢疾监测与耐药性分析
目的 了解马鞍山市引发痢疾的志贺菌优势菌型及其药物敏感状况,为痢疾临床治疗和预防控制提供依据.方法 采用血清凝集试验、菌种ATB鉴定仪系统生化鉴定,和MIC法(小敏感浓度)对从腹泻患者分离的志贺菌进行药物敏感试验.结果 452份病例样本实验室培养阳性病例67份,其中福氏志贺菌48株,宋内志贺菌19株.马鞍山市流行的优势菌株福氏菌株(B群)48株,有5个血清学亚型和1株不定型,分布如下:F4c 37株;Fla 5株;F2a 2株;F2b 1株;X变种2株.本次监测药敏试验按MIC法进行,药敏试验除氨苄西林(AMP)和复方新诺明(SMZ)耐药以外,其他抗生素:阿莫西林(AMC),头孢噻吩(CFT),头孢噻肟(CTX),庆大霉素(GEN),环丙沙星(CIP),四环素(TBT),利福平(RFA)均敏感.结论 马鞍山市志贺菌感染的优势菌型为福氏4c型,而新型的志贺菌福氏4c型和宋内志贺菌今后应引起足够重视.
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福氏志贺菌gtrⅠ基因突变导致的血清型回复转换
目的 研究携带O抗修饰基因gtrⅠ的福氏志贺菌Y血清型菌株特征.方法 采用血清型多重聚合酶链反应(PCR)分型方法检测携带gtrⅠ基因但Ⅰ型抗原表位阴性的福氏志贺菌Y血清型菌株,并对其gtrⅠ基因簇进行序列分析,对其基因组进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果 5株福氏志贺菌基因组携带gtrⅠ基因簇,但是Ⅰ型抗血清凝集阴性,表现为Y血清型特征;测序发现这5株菌株中的gtrl基因均发生了功能失活性突变;PFGE分析显示这5株菌株与福氏志贺菌血清型1a菌株具有相同或相近的PFGE带谱.结论 携带O抗修饰基因gtrⅠ的福氏志贺菌Y血清型菌株来源于血清型1a.
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一起福氏志贺菌2a亚型导致的细菌性痢疾暴发调查
目的 对一起细菌性痢疾暴发进行流行病学调查,以查明疫情暴发的原因,为采取相应控制措施提供依据.方法 建立病例定义,进行个案调查,描述病例的三间分布特点,并对疾病流行的地点开展卫生学调查,寻找导致疾病暴发流行的原因.结果 共搜索到病例111例(罹患率为3.50%),喝生水是发病的危险因素.结论 这是一次由水源与食源混合传播的福氏志贺氏2a亚型细菌性痢疾暴发,主要原因是侗族人群习惯饮用未经消毒的饮用水和卫生习惯不良.
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灵川县九屋镇初中一起痢疾暴发流行调查报告
2003年9月11-26日广西灵川县九屋镇初中发生一起痢疾暴发流行,县防疫站于23日接到疫情报告后,立即组织流病、临床专业人员赶赴疫区开展一系列调查处理.经流行病学调查分析及病原学检测判定,此次疫情为福氏志贺菌Ⅱ型痢疾杆菌污染水源引起.现报告如下.
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一起细菌性痢疾暴发的调查分析
随州市某镇中学自2004年5月17日起学生中先后出现发热、头痛、恶心、腹痛、腹泻等症状.至5月30日共发病84例,罹患率5.09%.根据流行病学调查、临床症状和实验室检查,确定为一起福氏志贺菌引起的痢疾暴发,现将调查结果报告如下.
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福氏志贺菌Xv血清型聚合酶链反应鉴定方法的建立及应用
目的 建立福氏志贺菌Xv血清型聚合酶链反应(PCR)鉴定方法.方法 根据福氏志贺菌Xv血清型O抗结构,针对O抗合成基因wzx、7;8群抗原决定基因gtrX和MASF Ⅳ-1抗原决定基因opt,建立PCR扩增鉴定方法.并应用该方法对139株福氏志贺菌临床分离株进行血清型检测.结果 建立一种福氏志贺菌Xv血清型PCR鉴定方法,该体系在一个反应中包括3对引物,Xv血清型PCR扩增全部为阳性,可将Xv血清型与目前已知的其他18种福氏志贺菌血清型完全区分.非福氏志贺菌菌属及腹泻相关菌属菌株检测结果发现无任何PCR扩增产物.对139株不同血清型福氏志贺菌临床分离株的鉴定结果显示,该方法可将Xv血清型鉴定,与血清凝集结果一致.结论 本研究建立的福氏志贺菌Xv血清型PCR鉴定方法具有快速、特异的优点,可以用于检测和监测.
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福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺修饰特异抗血清的制备
目的 制备针对福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺(PEtN)修饰的抗血清.方法 用血清型Yv菌株036_Yv(O-抗原PEtN修饰)免疫兔子制备抗血清,用036_Yv的宿主菌036(O-抗原无PEtN修饰)吸附后,制备针对O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,并用135株福氏志贺菌检测血清的特异性.结果 制备的血清能够特异地与O-抗原存在PEtN修饰的福氏志贺菌发生凝集,效价为1∶32;除了O-抗原携带PEtN修饰的福氏志贺菌血清型Xv,Yv和4av外,制备的血清不能与其他血清型发生交叉凝集,具有很好的特异性.结论 成功制备了针对福氏志贺菌O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,可应用于痢疾检测和监测.
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中国福氏志贺菌优势序列型ST91获得SRL和Tn7多重耐药岛分析
目的 分析中国福氏志贺菌优势序列型ST91(sequence type 91)中志贺菌耐药岛(Shigella resistance locus,SRL)和Tn7耐药岛的分布及变化情况.方法 对包括14种血清型(la[7株],lb[1株],ld[1株],2a[5株],2b[1株],3a[3株],3b[1株],4a[1株],4av[1株],4b[1株],X[9株],Xv[25株],Y[2株]和Yv[1株])和7种ST型(ST91 [50株],ST109[1株],ST18[3株],ST142[1株],ST143[1株],ST103[2株],ST16[1株])的59株中国福氏志贺菌基因组中SRL、Tn7耐药岛的编码基因及核酸序列进行分析,并与参考菌株2002017和YSH600的SRL和Tn7岛进行比较.结果 所有50株中国分离的福氏志贺菌ST91菌株,1株ST109和1株ST142菌株均携带SRL和Tn7岛.1株ST18菌株仅携带2个耐药岛的3个耐药基因.其他ST型菌株均未发现耐药岛.与参考菌株2002017相比,9株ST91菌株的SRL耐药岛发生了插入或缺失.其中,7株ST91菌株缺失了编码四环素耐药性的tet基因;1株ST91菌株缺失了编码β-内酰胺酶的oxa-1和编码氯霉素乙酰转移酶的cat基因;1株ST91的SRL岛上插入了1个编码广谱β-内酰胺酶的bla TEM-1基因.所有50株STgl、1株ST109和1株ST142菌株携带的Tn7岛的核酸序列和编码基因与参考菌株相比未发现差异.结论 福氏志贺菌ST91型中国分离菌株均携带SRL和Tn7耐药岛.在SRL岛上发生了基因的插入和缺失.处于进化早期的ST18菌株,在获得耐药岛的过程中可能发挥了重要作用.
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北京市海淀区1999～2005年细菌性痢疾流行特征
目的 了解海淀区7年来细菌性痢疾发病规律、流行特征.为2008年北京奥运会传染病保障工作提供基础本底资料,为细菌性痢疾防治策略提供科学依据.方法 根据海淀区1999～2005年细菌性痢疾传染病疫情报告作描述性分析,对2004年60株志贺菌进行血清学分型.结果 1999～2005年细菌性痢疾发病率波动在134.05/10万～353.98/10万之间,年均发病率在234,02/10万,总体呈下降趋势;发病以5～9月份为主,发病高峰在每年的8月份;0～4岁组婴幼儿发病率高达938.15/10万;不同职业发病数前三位是学生、干部职员、散居儿童.志贺菌60株分型,福氏志贺菌37株占61.67%,宋内氏志贺菌23株占38.33%,福氏37株以福氏4为主(15株,占40.52%).结论 海淀区近7年来细菌性痢疾发病率呈下降趋势,但发病率远远高于全国平均水平,始终占据法定传染病发病首位.夏秋季为细菌性痢疾发病高峰期;0-4岁组、学生、干部职员为重点防治对象.以福氏志贺菌、宋内氏志贺菌两型为流行株.
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山莨菪碱辅助治疗小儿急性细菌性痢疾抗复发疗效分析
细菌性痢疾简称菌痢,是山痢疾杆菌(志贺菌属)引起的肠道传染病,以福氏志贺菌和宋内志贺苗占优势.临床实践中发现,部分患儿在给予正规有效抗生素治疗后,临床症状好转明显,但停药后短期内又可见脓血便复发.如何防止和减少复发,查阅有关文献,药物保留灌肠等方法较多见,未见山莨菪碱在防止细菌性痢疾复发方面的文献报道.为防止和减少复发,本人于2001年8月-2005年10月间,在抗生素治疗同时,给予山莨菪碱同时静脉滴汁,在减少停药后复发方面取得较好疗效,现总结如下,供临床医师参考.
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新型福氏志贺菌的研究进展及流行现状
福氏志贺菌在发展中国家是引起细菌性痢疾的主要志贺菌种,了解新型福氏志贺菌的新血清学特征、流行现状及耐药情况,对疾病的预防和疫苗的研发是非常必要的.本文对新型福氏志贺血清型(1d,Xv,1c)以及一些非典型血清型(4s,7b)的新研究进展和流行现状进行了归纳总结.
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志贺菌检测技术研究进展
志贺菌引起的细菌性痢疾是目前全球面临的健康问题,该菌属包括4个种:痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌以及宋内氏志贺菌,引起的临床症状有:腹泻、痢疾性黏液脓血便、痉挛性腹痛以及里急后重等,甚至危及生命[1-3].该菌属多见于热带、亚热带地区,流行地区主要在发展中国家的印度、泰国、越南等;而发达国家较少见,其感染发病的患者50%是前往发展中国家的旅行患者[4].因此,目前志贺菌研究工作大多在东南亚和南亚的一些国家和地区开展[1,5].以下就志贺菌检测技术的研究进展作一综述.
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福氏志贺菌致食物中毒18例报告
2002年6月11日,利津县发生一起因食用一流动摊贩猪肴肉后,出现腹痛、腹泻、呕吐、发热、脓样便,发病集中在食用后14～16 h,共计18例,其中5例患者住院,其余13例经抗炎、补液治疗2～4 d全部治愈,无死亡.流行病调查和微生物检验,确定为福氏志贺菌所致食物中毒.现报告如下.
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福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法的建立及应用
目的 建立基于O抗修饰基因的福氏志贺菌血清型PCR鉴定方法.方法 根据福氏志贺菌O抗原合成及修饰特异基因设计引物,以常见的14种福氏志贺菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6)为标准菌株,建立福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法；并以痢疾志贺菌、宋内志贺菌、鲍氏志贺菌和腹泻相关的其他菌属菌株验证特异性；应用该方法对106株福氏志贺菌临床分离株进行PCR血清分型.结果 建立一种福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法,通过8个PCR反应,能够鉴定目前已知的15种血清型中的14种(Xv除外).检测灵敏度在10 pg至1 ng DNA(20μl反应体系).对106株福氏志贺菌临床分离株的检测结果提示,PCR分型方法与玻片凝集法具有很高的一致性.结论 本研究建立的福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法具有特异性、灵敏性,可用于临床检测.
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福氏志贺菌O-抗原修饰及血清型转换机制研究进展
志贺菌(Shigella)是细菌性痢疾(菌痢)的主要病原菌.其感染病例主要发生在发展中国家,且多为5岁以下儿童[1].志贺菌属包含4个亚群,其中福氏志贺菌(Shigella flexneri,B 群)是包括中国在内发展中国家的优势血清群.根据细菌外膜脂多糖(LPS)的O-抗原结构差异,福氏志贺菌又分为众多血清型,目前报道的福氏志贺菌血清型至少有19种(la、lb、lc、ld、2a、2b、3a、3b、4a、4av、4b、5a、5b、Y、Yv、X、Xv、6和7b)[2-6],其中除血清6型外,其他血清型O-抗原具有共同结构:1个N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)和3个鼠李糖(rhammose,Rha)构成的四糖骨架重复单元[7].四糖骨架中特定糖的糖基化或/和乙酰化修饰决定了福氏志贺菌型特异性抗原决定簇(如Ⅰ～Ⅴ和ⅠC)和群特异性抗原决定簇(如3,4;6和7,8),从而形成了福氏志贺菌血清型的多样性[8](图1).血清Y型的O-抗原具有基本的四糖骨架,无任何修饰.人体对志贺菌感染的免疫反应为血清型特异,即只对同一血清型病原菌的再次感染具有免疫保护作用.因此,O-抗原多样性是福氏志贺菌一个重要的毒力因素.
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唐山地区福氏志贺菌超广谱β-内酰胺酶基因型和同源性的分析
目的 了解唐山地区福氏志贺菌的耐药特征,明确其所携带超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的基因型和菌株之间的相关性.方法 用纸片扩散法作ESBLs确证试验;对产ESBLs的菌株用微量肉汤稀释法测定其MICs;用PCR扩增ESBLs基因并测序;通过可变数目串联重复序列(VNTR)进行同源性分析.结果 用纸片扩散法检出具有ESBLs表型的19菌株,经琼脂稀释法检测,同样具有ESBLs表型.菌株对头孢曲松、头孢噻肟、头孢哌酮、哌拉西林、阿莫西林-克拉维酸和环丙沙星的不敏感率为95％～100％,对其他药物敏感率均在84％以上.其型别主要为CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-57和TEM-1.同源性分析19株福氏志贺菌分为4个克隆系.结论 唐山地区儿童福氏志贺菌呈多重耐药,对第3代头孢菌素耐药性有增加趋势,所携带基因型主要为CTX-M-14,首次检出CTX-M-57基因型.唐山地区存在遗传紧密相关的福氏志贺菌流行克隆,也存在不相关克隆.
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天津地区福氏志贺菌整合子携带及耐药性研究
目的 了解天津地区不同年份福氏志贺菌血清型分布,整合子携带情况,耐药性及其变化趋势. 方法 采用血清学方法对天津地区不同年份分离的56株福氏志贺菌进行分型;PCR扩增整合子整合酶及可变区,并测序;采用KB法测定其对16种抗菌药物的敏感性. 结果 1981～1983年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为87.50％(28/32),其中27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;2009～2011年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为91.67％(22/24),可变区及3'末端扩增均阴性.1981～1983年分离株福氏志贺菌2类整合酶均阴性;2009～2011年分离株福氏志贺菌2类整合酶阳性率79.17％(19/24),可变区含dfrA1、sat1、aadA1,介导对甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药.有17株福氏志贺菌1、2类整合酶均阳性.1981～1983年分离株福氏志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率高,多重耐药率为65.63％;2009～2011年分离株福氏志贺菌对氨苄西林、链霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、哌拉西林和四环素耐药率高,多重耐药率为83.33％. 结论 1、2类整合子广泛存在于天津地区福氏志贺菌中,其中1类整合子3 '保守末端可能缺失或存在变异.2009～2011年分离株福氏志贺菌对抗菌药物耐药性较1981～1983年分离株增强,多重耐药率增高.福氏志贺菌优势血清型发生转变,血清型分布呈现多样化.
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多维液相色谱质谱组合体系在志贺菌蛋白质组学研究中的应用
目的 建立多维液相色谱质谱组合体系,用以获得福氏志贺菌更完整的蛋白质组信息. 方法 对福氏2a志贺菌301株(Sf2a301)全菌蛋白进行预分离,顺序抽提胞浆蛋白和膜蛋白.应用二维液相色谱基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱(2D LC-MALDI-TOF/TOF)和二维液相色谱电喷雾串联质谱(2D LC-ESI-MS/MS)构成的多维液相色谱质谱组合体系进行蛋白分离和鉴定,分别应用MASCOT和SEQUEST软件搜索NCBI上Sf2a301的蛋白质数据库,并对两种串联质谱的互补性及组合后优势进行分析. 结果 MALDI-TOF/TOF和ESI-MS/MS分别鉴定到Sf2a301株的960个蛋白和729个蛋白,总共鉴定1 231个蛋白;两种技术方法鉴定蛋白质的平均氨基酸序列覆盖率分别为14.3％和13.9％,组合鉴定后覆盖率升高为15.7％.MALDI和ESI两种离子化方式具有互补性,表现为MALDI更倾向于离子化分子质量偏小、碱性、胰酶消化后羧基末端为精氨酸的肽段;ESI更倾向于离子化分子质量偏大、疏水、胰酶消化后羧基末端为赖氨酸的肽段. 结论 应用2D LC-MALDI-TOF/TOF和2D LC-ESI-MS/MS鉴定Sf2a301全蛋白质组,既互相确认又相互补充.多维液相色谱质谱组合体系无论在蛋白质鉴定数量还是可信程度上都优于单一串联质谱,可作为复杂样品的蛋白质组学研究技术平台.
关键词： 福氏志贺菌 基质辅助激光解吸电离 电喷雾电离 蛋白质组学 -
双歧杆菌介导的福氏志贺菌Bb-ipaB疫苗免疫机制研究
目的 探讨双歧杆菌(Bi fidobacterium bi fidum,Bb)介导的福氏志贺菌(Shigella flexneri)Bb-ipaB疫苗的免疫机制. 方法 雌性BALB/c小鼠随机均分为3组:疫苗组(Bb-ipaB)、Bb组和PBS组.每周灌胃免疫1次,共4次.未次免疫1周后检测小鼠血清特异性IgG、IgE、IgA及小肠黏液sIgA；取小鼠胸腺和脾脏,称重,计算胸腺和脾指数；采用MTT法检测脾细胞增殖活性,采用ELISA法检测脾细胞因子IFN-γ和IL-4水平. 结果 疫苗组小鼠血清特异性IgG、IgE、IgA,小肠黏液sIgA,胸腺脾指数,脾细胞增殖能力及脾细胞IFN-γ和IL-4水平均显著高于对照组(P＜0.01).结论 Bb-ipaB疫苗免疫可刺激小鼠产生高水平的特异性抗体和细胞因子,并能促进脾细胞增殖,具有开发潜能和研究价值.
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PCR快速检测粪便中志贺菌属和侵袭性大肠埃希菌IpaH基因及其临床应用
煮沸法从粪便标本中快速抽提出细菌DNA作为聚合酶链反应(PCR)模板,用自行设计的1对特异性引物扩增位于志贺菌和侵袭性大肠埃希菌染色体和质粒DNA上的多拷贝侵袭性质粒抗原(Ipa)H基因,扩增产物为620bp,以常规细菌培养检出率为对照.用20种常见肠道病原菌标准菌株的DNA抽提物进行PCR反应的方法来对PCR反应的特异性进行检验.用DNA序列分析的方法对PCR扩增产物的特异性进行检验.共检测81份门诊粪便标本,细菌培养阳性有27例,福氏志贺菌25株,宋内志贺菌2株,培养阳性率为33.3%,PCR检测阳性有39例,阳性率为48.1%,PCR检测阳性率比常规细菌培养阳性率高14.8%,其中细菌培养阳性的标本PCR检测均为阳性,29例住院病人经过正规治疗1周后,PCR检测12例仍然阳性.统计学分析显示两者之间差异有显著性(P<0.05).标准菌的PCR检测和PCR产物的DNA序列测定结果显示我们设计的PCR方法具有较高的特异性.本研究中采用的PCR方法是一种快速简便、特异性高和敏感性强的检测细菌性痢疾病原菌的现代分子生物学方法.
