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某社区医院感染患者常见致病菌耐药性与整合子分布关系初步分析
目的 分析某社区医院感染常见致病菌对临床常用抗菌药物的耐药性与整合子的关系,为合理应用抗生素提供参考.方法 经VITEK-AMS鉴定仪鉴定分离株,用K-B纸片测试细菌对临床常用抗生素耐药性;双纸片协同法筛选β-内酰胺酶(ESBLS)阳性菌;通过特异引物聚合酶链反应(PCR)扩增调查整合子分布.结果本社区医院分离的76株感染菌以G-菌为主(61株),其中大肠埃希菌(24株)和肺炎克雷伯菌(19株)多见;G+菌(15株)主要为表皮葡萄球菌(10株).检出了I、Ⅱ类整合子,前者阳性率44.7%(34/76),主要分布于G-菌中,且于肺炎克雷伯菌中多,占检出整合子的47.1%(16/34).后者检出较少,阳性率仅6.5%(5/76),但也主要分布在肺炎克雷伯菌中(3株).多数分离菌(40.0%以上)对常用抗生素耐药,整合子及ESBLS均阳性的菌株呈多重耐药.肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌对β-内酰胺类药耐药为突出,耐药率分别高达46.0%(11株)和90.0%(17株),其次为喹诺酮、氨基糖苷、氯霉素类药物,耐药率平均也在49.0%以上.结论本社区医院分离的致病菌以G-菌的肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌为主,主要呈I类整合子分布.多数分离株对临床常用抗菌素表现耐药,且耐药性与整合子的存在相关.
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整合子介导的沙门菌耐药性水平播散机制的初步研究
目的 分析南通地区沙门菌的耐药性,初步阐明定位于质粒上的整合子介导的耐药性传播的分子机制.方法 收集2008-2011年南通地区食品中分离的沙门菌67株,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,确定其耐药谱；筛选出多重耐药性菌株,并以大肠杆菌为受体菌进行接合试验.PCR分析受体菌整合子特异序列,并进行分型检测.结果 南通地区检测出的沙门菌中有74.6％的沙门菌株(50/67)对抗生素产生耐药性,其中31.3％ (21/67)对超过1种抗生素有耐药性,发展成为多重耐药性沙门菌；沙门菌Ⅰ类整合子检出率为20.9％(14/67).结合实验还发现沙门菌Ⅰ类整合子可以介导耐药性向大肠杆菌的传播.结论 南通地区食品分离的沙门菌Ⅰ类整合子检出率较高.沙门菌携带的Ⅰ类整合子是引起耐药性在种间和种内传播的重要因素.
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广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子及其携带耐药基因的研究
目的 研究广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子携带现状及其耐药基因与菌株耐药的关系.方法 采用基因扩增法,对广东省5所医院临床分离的铜绿假单胞菌三类整合子及耐药基因进行了检测,并检测阳性菌株整合子可变区.结果 在30株铜绿假单胞菌中检出23株携带Ⅰ类整合子,有7株携带Ⅱ类整合子,有1株携带Ⅲ类整合子的基因.随机选取三类整合子携带菌各1株进行测序及序列分析,Ⅰ类整合子得到aac -3 +aad2的组合形式；Ⅱ类整合子得到CmlA耐药基因盒；Ⅲ类整合子得到bla - MAP耐药基因盒.结论 广东地区医院分离铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子的检出率高,检出1株携带Ⅲ类整合子基因.
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广东地区医院分离肺炎克雷伯菌整合子及其携带耐药基因的研究
目的：研究广东地区医院分离肺炎克雷伯菌整合子和耐药基因携带现状及其与耐药性关系。方法采用基因扩增法和药敏试验方法，对广东省5所医院临床分离的肺炎克雷伯菌三类整合子及耐药基因进行了检测，同时对其耐药性进行了分析。结果共对30株临床分离肺炎克雷伯菌携带耐药基因进行了检测，检出11株携带I类整合子、17株携带II类整合子，未检出携带III类整合子。随机选取携带I类和II类整合子该菌各1株进行测序及分析，确认为cmlA和 aadA4耐药基因盒的组合形式。肺炎克雷伯菌对对氨苄西林等8种常用抗菌药物的耐药率超过50％。结论广东地区医院分离肺炎克雷伯菌II类整合子的检出率高，此类菌株普遍耐药。
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医院泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素的耐药机制
目的 探讨医院泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素的耐药机制.方法 应用PCR方法对2010年12月至2012年3月期间本院从临床痰标本中分离的36株泛耐药鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶IMP、OXA23基因和整合子基因检测；提取细菌膜蛋白行SDS-PAGE电泳分析其组成.结果 36株泛耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶OXA23基因扩增均为阳性；14株碳青霉烯酶IMP基因扩增阳性,22株阴性.12株整合子PCR产物约1200 bp,10株约3000 bp,14株整合子PCR产物约3500 bp.与碳青霉烯抗生素敏感鲍曼不动杆菌膜蛋白比较,22株泛耐药鲍曼不动杆菌存在相对分子质量为25 000、36 000的膜蛋白缺失.结论 医院泛耐药鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯抗生素机制与产IMP、OXA23碳青霉烯酶及膜蛋白缺失有关.
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整合子介导产生超广谱β-内酰胺酶志贺菌的多重耐药研究
目的 探讨产生超广谱β-内酰胺酶(ESBL)志贺菌的耐药特性及其耐药机制. 方法 采用K-B法药敏试验筛选可疑产ESBL志贺菌株;通过改良三维试验、E-test试验及相对水解率测定对可疑产ESBL志贺菌进行鉴定;采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组和CTX-M-9组β-内酰胺酶通用引物进行PCR检测,并对TEM和CTX-M-9组全编码基因引物等PCR扩增产物进行DNA序列分析;对产ESBL志贺菌进行结合传递试验,供体菌和接合子用稀释法进行MIC测定.对ESBL菌株进行Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子的多重PCR检测,Ⅰ类整合子可变区PCR扩增产物进行DNA测序,确定耐药基因盒的种类和数量. 结果 275株志贺菌中有12株为产ESBL志贺菌,其基因型为CTX-M-14和 CTX-M-1组;产ESBL志贺菌结合传递试验全部阳性,其结合子只对β-内酰胺类抗生素耐药.12株ESBL志贺菌只含Ⅰ类整合子,整合子可变区含有dfrA17-aadA5耐药基因盒. 结论 济南地区志贺菌对β-内酰胺类抗生素的交叉耐药由质粒介导,对磺胺类和氨基糖苷类多重耐药由整合子介导.
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天津地区福氏志贺菌整合子携带及耐药性研究
目的 了解天津地区不同年份福氏志贺菌血清型分布,整合子携带情况,耐药性及其变化趋势. 方法 采用血清学方法对天津地区不同年份分离的56株福氏志贺菌进行分型;PCR扩增整合子整合酶及可变区,并测序;采用KB法测定其对16种抗菌药物的敏感性. 结果 1981～1983年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为87.50％(28/32),其中27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;2009～2011年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为91.67％(22/24),可变区及3'末端扩增均阴性.1981～1983年分离株福氏志贺菌2类整合酶均阴性;2009～2011年分离株福氏志贺菌2类整合酶阳性率79.17％(19/24),可变区含dfrA1、sat1、aadA1,介导对甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药.有17株福氏志贺菌1、2类整合酶均阳性.1981～1983年分离株福氏志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率高,多重耐药率为65.63％;2009～2011年分离株福氏志贺菌对氨苄西林、链霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、哌拉西林和四环素耐药率高,多重耐药率为83.33％. 结论 1、2类整合子广泛存在于天津地区福氏志贺菌中,其中1类整合子3 '保守末端可能缺失或存在变异.2009～2011年分离株福氏志贺菌对抗菌药物耐药性较1981～1983年分离株增强,多重耐药率增高.福氏志贺菌优势血清型发生转变,血清型分布呈现多样化.
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整合子介导鲍曼不动杆菌耐药机制的研究
目的 研究鲍曼不动杆菌1类整合子和2类整合子的携带情况,并对比分析其与临床耐药率的关系. 方法 收集中南大学湘雅二医院2008年9月～2009年9月分离的70株鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行临床常见15种抗生素药物敏感试验.利用聚合酶链反应检测1类整合子和2类整合子基因. 结果 药敏试验显示鲍曼不动杆菌对氨曲南的耐药率高,为72.86％；对头孢哌酮/舒巴坦耐药性低,为15.71％.PCR检测鲍曼不动杆菌1类整合子携带率为57.14％(40/70),2类整合子携带率为7.14％(5/70).与1类整合子阴性菌株相比,阳性菌株对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率相近(x2=1.47,P＞0.05),对其他14种抗菌药物的耐药率为55.00％～82.50％,其中对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南耐药率两组菌间差异无统计学意义(P＞0.05),对其余抗菌药物耐药率差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 鲍曼不动杆菌主要携带1类整合子,且1类整合子与不动杆菌多重耐药关系密切.
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耐药志贺菌1类整合子的研究
目的 分析我院志贺菌的流行菌株类型和耐药特点,研究志贺菌1类整合子的检出率、与耐药的相关性及其携带的耐药基因盒.方法 从本院肠道门诊腹泻患者的粪便标本分离出70株志贺菌,以K-B琼脂法测定药敏情况;PCR扩增1类整合子可变区并进行序列测定和基因盒分析.结果 70株志贺菌对四环素、复方新诺明、氨苄西林、利福平、萘啶酸的耐药率均＞60%;对喹诺酮类常用药诺氟沙星耐药率较低,为12.8%;对头孢菌素类的耐药率≤10%.多重耐药率较高,达到77.1%.16株(22.9%)志贺菌中检出1类整合子.其中8株检出大小约为1 900 bp的1类整合子,测序显示含有编码对甲氧苄啶耐药的基因盒dhfrXⅡ和对氨基糖苷类耐药的基因盒aadA2,另8株检出大小约为1 000 bp的1类整合子,测序显示含有编码对氨基糖苷类耐药的基因盒aadA2.结论 本院志贺菌流行株主要是福氏和宋内氏志贺杆菌,多重耐药率较高.志贺菌中存在1类整合子,与志贺菌的耐药具有相关性
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牡蛎污染耐药性细菌调查及整合子检测
目的 对水产品牡蛎污染耐药性细菌进行调查,并检测其携带整合子类型,为细菌耐药机制研究提供依据.方法 利用抗性培养基平板筛选牡蛎标本中的耐药性细菌,用K-B法进行药敏试验,PCR法扩增Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型整合酶基因. 结果 34份牡蛎标本分离出76株耐药株,其中超过90％的分离菌对四环素、氨苄西林耐药,诺氟沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、环丙沙星、头孢唑啉和氯霉素耐药＞50％,有2株对耐亚胺培南细菌.整合酶基因检测结果显示80.26％耐药细菌携带Ⅰ型整合子,其中6株同时携带Ⅱ型整合子,未检测到Ⅲ型整合子.所有携带整合子的耐药细菌是多重耐药,不携带整合子耐药细菌中多重耐药占60％. 结论 牡蛎污染细菌的耐药性严重,且多重耐药与携带整合子有关,携带整合子细菌更易产生多重耐药,提示整合子可作为食品分离菌的耐药性检测靶标.
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2种耐药表型4种非发酵菌质粒介导的5种喹诺酮类耐药相关基因的检测
目的 检测2种耐药表型(多耐和泛耐)的4种非发酵病原菌,,鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,Sm)和脑膜炎金黄杆菌(Chryseobacterium meningosepticum,Cm)质粒介导的5种喹诺酮类耐药相关基因,为临床合理使用喹诺酮类抗菌药物提供依据. 方法 应用Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板和API 20NE鉴定条/PSE5.0药敏条对19株临床分离菌(6株Ab(多耐药2株、泛耐药4株)、6株Pa(多耐药、泛耐药各3株)、4株Sm(多耐药、泛耐药各2株)和3株脑膜炎金黄杆菌(2株多耐药、1株泛耐药))进行鉴定和药敏试验,并用PCR法检测其喹诺酮类耐药质粒介导的5种喹诺酮类相关基因,即喹诺酮类药物耐药相关基因A(quinolone resistance A,qnrA)、氨基糖苷类乙酰转移酶基因acc(6')-Ib的环丙沙星耐药变异体基因(aminoglycoside acetyhransferase ciprofloxacin resistance variant,acc (6')-Ib-cr)及3种整合子基因(intI1、2、3),扩增产物经1％琼脂糖电泳分析并测序,利用生物信息学的方法进行比对分析. 结果 本组1 9株菌中携带acc(6') Ib-cr 8株,6株为泛耐药(Ab 3株,Pa 2株,Snm 1株),泛耐菌携带率60.0％ (6/10);2株多耐菌(Ab、Pa各1株),多耐菌携带率22.0％(2/9).泛耐菌携带率与多耐菌携带率比较差异无统计学意义(P＜0.05).11株检出Ⅰ类整合子,其中6株泛耐药(Ab3株,Pa2株,Sm1株),携带率60.0％(6/10);5株多耐药菌(Pa3株,Ab、Cm各1株),携带率55.6％(5/9),泛耐菌携带率与多耐菌携带率比较差异无统计学意义(P＞0.05).6株同时检出 acc(6')-Ib cr和intI1,qnrA和intI2、intI3均阴性. 结论 本组临床分离菌喹诺酮类药物耐药与acc(6') Ib-cr和intI1有关,与qnrA,intI 2 andintI 3无关.acc(6') Ib-cr携带率泛耐菌高于多耐菌,而intI1携带率无显著差异;2种基因在Ab和Pa的检出率较高且相近.
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老年人亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药性研究
目的 明确我院老年病人临床分离铜绿假单胞菌的耐药性、同源性及耐碳青霉烯菌株的基因型。方法 收集我院2006年5月-2009年5月自临床老年病人分离的262株铜绿假单胞菌，纸片扩散法测定其对16种抗菌药物的耐药性；琼脂稀释法和E test法测定耐碳青霉烯菌株对14种抗菌药物的MIC值，PCR扩增及克隆测序分析金属酶基因型。脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析携带金属酶基因型菌株的同源性。结果 262株铜绿假单胞菌中筛选到104株耐碳青霉烯。104株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦两个含舒巴坦制剂药物耐药率分别为78.9％和35.9％,对多黏菌素E耐药率低为6.0％，对米诺环素耐药率58.3％，其余抗菌药物耐药率均大于70.0％；104株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中12株携带金属酶基因，10株检测到有携带VIM-2基因的1类整合子。PFGE分型中12株菌株属于5个克隆株。结论 在我院流行的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中，金属酶基因不是主要的基因型，金属β-内酰胺酶均为VIM-2型金属酶，耐药基因盒分布于不同的1类整合子中，整合子播散是主要的流行方式。
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仅黏菌素敏感鲍曼不动杆菌多重耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究
近年来,仅黏菌素敏感鲍曼不动杆菌(COS-AB)引起的医院感染倍受关注.我们对2004年5月18日分离自我院烧伤病人创面分泌物的1株COS-AB(编号为HZ8999)进行多重耐药基因和整合子、转座子遗传标记检测.
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铜绿假单胞菌检出特殊1型整合子结构
1型整合子是造成铜绿假单胞菌广泛耐药的重要原因,其基本结构为:5'端保守序列(1型整合酶)-特异识别位点(attI或attC)-3'端保守序列(qacE△1耐药基因盒-sul1耐药基因盒),在5'端与3'端之间可插入其他耐药基因盒,并将其整合在其中,形成各种组合的多重耐药整合子.
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产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中整合子与多重耐药的研究
目的探讨整合子介导的耐药机制在产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药中的作用.方法5株产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离自2002年1月-2004年5月间我院呼吸科住院的患者,采用E-test试验条进行药敏试验、电转化试验,筛选、分离耐药质粒.PCR扩增Ⅰ型整合子基因盒插入序列,分子克隆和序列分析.结果所有产酶菌株通过电转化试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌,5个产AmpC酶耐药质粒中,有4个检出整合酶序列,其中3个携带2种抗药性基因盒,包括氨基糖苷乙酰转移酶基因aacA4;氨基糖苷腺苷转移酶基因aadA5;二氢叶酸还原酶基因dfrA17;氯霉素外排蛋白编码基因cmL44.结论整合子介导的抗药性基因盒参与了产质粒AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药的形成,应引起高度重视.
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一株铜绿假单胞菌中检出两种新的整合子
目的研究铜绿假单胞菌多重耐药的临床分离株RJ217中发现的两个新整合子的结构,并分析其在多重耐药性中的作用. 方法用改良三相试验分析RJ217产β-内酰胺酶的情况,用常规和长片段PCR法扩增耐药基因和整合子,并对PCR产物进行序列分析. 结果发现铜绿假单胞菌RJ217携带两个新的整合子,其中一个携带veb-1型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因,这两个整合子的结构分别为IS10-like-veb-1-aadB-oxa10/aadA1和aadB-oxa10/aadA1. 结论整合子介导的耐药基因在RJ217的多重耐药性中发挥了重要的作用.
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肺炎克雷伯菌多重耐药机制的研究
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoni-ae,Kpn)是引起医院内感染的常见病原菌之一.用PCR法检测9种氨基糖苷类修饰酶基因、9种β-内酰胺酶编码基因及Ⅰ类整合酶基因并对整合子进行分析,采用纸片扩散法选出58株多重耐药的Kpn,测定对亚胺培南等17种抗菌药物的敏感性.
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应用高分辨熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子
目的：应用高分辨率熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子。方法收集99株2011年8月—2012年8月非重复分离自临床标本的第2类整合酶阳性变形杆菌，以基因组DNA为模板，PCR扩增包含第2类整合酶基因突变位点一段60 bp的片段，高分辨率熔解曲线分析后测序验证。结果功能性第2类整合子与普通第2类整合子高分辨熔解曲线具有显著差别，测序结果与高分辨率熔解曲线法鉴定结果一致。结论应用高分辨率熔解曲线法可快速准确进行功能性第2类整合子的筛查鉴定。
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耐药鲍曼不动杆菌获得性耐药基因和可移动遗传元件检测与指标聚类分析
为了探讨一组耐药鲍曼不动杆菌获得性耐药相关基因和可移动遗传元件的关系.我们收集2009年1月至12月医院住院患者痰标本中分离的耐药鲍曼不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)方法进行了54种水平转移获得的β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药基因和12种接合性质粒、转座子、插入序列、整合子等可移动遗传元件遗传标记检测,并对检测结果作指标聚类分析(UPGMA法).
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沙门菌中第一类整合子的鉴定及特性分析
目的基于整合子在细菌耐药机制中的重要作用,对来自正常人体内耐药沙门菌的整合子分布及其结构特征进行分析. 方法应用PCR方法,设计第一类整合酶基因intI1和耐药基因盒的特异性引物,用PCR方法检测整合子阳性菌株并对其整合的耐药基因进行测序和序列分析. 结果发现1株S.hadar和3株S.tshiongwe为第一类整合酶阳性菌株.耐药基因盒进行扩增的结果,从2株中分别得到1009bp的扩增产物.1株得到1664bp的扩增产物.1株菌得到1009bp和1664bp的扩增产物.序列分析结果表明,1009bp的扩增产物为携带aadA2,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒;1664bp为携带aadA5和dfr17,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧氨苄嘧啶产生耐药的基因盒. 结论首次揭示了健康人携带由整合子介导的耐药菌这一现象,提示我们要从基因水平上监测细菌的耐药情况.
