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辽宁省大连市耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶基因检测及脉冲场凝胶电泳分型
目的 了解辽宁省大连市分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)的金属β-内酰胺酶携带情况,探讨该地区临床分离产金属β-内酰胺酶PA的染色体多态性特征.方法 选取2013年1月至2014年9月临床分离的400株PA进行菌种鉴定和药物敏感试验,聚合酶链反应(PCR)法扩增产金属β-内酰胺酶的基因,并对扩增阳性产物进行测序确认;脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测分析其染色体多态性.结果 药敏结果发现有89株PA对亚胺培南耐药,且多数为多重耐药菌株;金属β-内酰胺酶基因PCR扩增阳性11株,其中8株检出IMP-1基因,3株检出VIM-2基因,其余几种金属β-内酰胺酶基因均未检出.89株耐亚胺培南PA的PFGE图谱可分成15种型(A～O),其中A型46株、B型16株、C型4株、D型5株、E型4株、F型3株、G型2株、H型2株,I型至O型分别各有1株.PFGE图谱集中的A～G型各型中的菌株来源于4家不同医院,呈现多态性,每群均存在型别100％相同的克隆株.结论 大连地区耐亚胺培南的89株PA多数是多重耐药菌株,产金属β-内酰胺酶的基因型只有2种,为IMP-1和VIM-2.PFGE结果提示该地区菌株虽具有基因多态性,但仍存在相似度较高的流行优势PFGE型别,具有高度的同源性.PFGE具有很强的菌株同源性分析能力,适用于细菌耐药传染源溯源.
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老年人亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药性研究
目的 明确我院老年病人临床分离铜绿假单胞菌的耐药性、同源性及耐碳青霉烯菌株的基因型。方法 收集我院2006年5月-2009年5月自临床老年病人分离的262株铜绿假单胞菌，纸片扩散法测定其对16种抗菌药物的耐药性；琼脂稀释法和E test法测定耐碳青霉烯菌株对14种抗菌药物的MIC值，PCR扩增及克隆测序分析金属酶基因型。脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析携带金属酶基因型菌株的同源性。结果 262株铜绿假单胞菌中筛选到104株耐碳青霉烯。104株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦两个含舒巴坦制剂药物耐药率分别为78.9％和35.9％,对多黏菌素E耐药率低为6.0％，对米诺环素耐药率58.3％，其余抗菌药物耐药率均大于70.0％；104株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中12株携带金属酶基因，10株检测到有携带VIM-2基因的1类整合子。PFGE分型中12株菌株属于5个克隆株。结论 在我院流行的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中，金属酶基因不是主要的基因型，金属β-内酰胺酶均为VIM-2型金属酶，耐药基因盒分布于不同的1类整合子中，整合子播散是主要的流行方式。
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脑膜败血金黄杆菌产金属β-内酰胺酶的检测及基因型的研究
目的 了解杭州市脑膜败血金黄杆菌的流行及产金属β-内酰胺酶的情况并对其基因型进行研究.方法 对100株分离自4所综合性医院的多重耐药脑膜败血金黄杆菌,用三维试验、改良三维试验和2-巯基丙酸抑制试验检测金属β-内酰胺酶,用blaB和GOB的通用引物对表型试验阳性的菌株进行聚合酶链反应(PCR)和测序分析金属β-内酰胺酶的基因型.并用脉冲场凝胶电泳对其中的菌株进行同源性分析.结果 用三维试验、改良三维试验和2-巯基丙酸抑制试验检测到61株菌株产金属β-内酰胺酶,用blaB和GOB通用引物进行扩增和测序,有60株菌株扩增到金属β-内酰胺酶,其中有51株检测到blaB基因型,有36株检测到GOB基因型.检测到的blaB基因型主要为blaB-1、2、3、5和blaB-11这5种类型;检测到的GOB基因型主要为GOB-1、2、4、6和GOB-8这5种类型.其中产生一种金属β-内酰胺酶的有33株,产两种金属β-内酰胺酶的有27株.浙江大学医学院附属第一医院和附属第二医院主要是blaB-3和blaB-11型为主,邵逸夫医院主要是GOB-4和GOB-8为主,杭州市中医院主要是GOB-8基因型.其中1菌株表型试验检测阳性而未能检测到基因型,可能为一种新的基因型,有待以后进一步研究.菌株经同源性分析,杭州市中医院的菌株具有很好的一致性,而与其他医院的结果完全不同.结论 杭州市多重耐药的脑膜败血金黄杆菌的耐药机制证实携带的金属β-内酰胺酶基因型主要为blaB和GOB型,4所医院流行的基因型均不相同.而从PFGE结果分析中医院的脑膜败血金黄杆菌具有一定的同源性,有别于其他3所医院,可能为院内感染菌.
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吐鲁番地区铜绿假单胞菌检测及其耐药性
目的：分析本地区产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌阳性率及其耐药性。方法：2012年01月～2013年01月间本地区住院患者送检标本2247份分离铜绿假单胞菌。采用VITEK2 Compact自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏测定，同时测定MIC。并对其标本来源和病区分布进行了分析。结果：产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的分离率为9．57％（215/2247），其中检出率较高的科室为ICU、呼吸内科、普外科、脑外科、骨科。产金属β-内酰胺酶株对其他16种抗生素的耐药性具有特殊性。结论：本地区产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌检出率较高，分布科室有特殊性，产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性具有特殊性。
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人工诱导亚胺培南耐药的医院铜绿假单胞菌耐药机制研究
目的 探讨经亚胺培南(IMP)诱导产生耐药的铜绿假单胞菌(PA)的耐药表型及其耐药机制,旨在为临床有效治疗PA感染提供理论依据. 方法 收集2014年8月-2016年8月从临床送检标本中分离的抗菌药物全敏的PA株共计64株,以终抗菌药物全敏的PA 62株临床分离株为实验菌株,分析比较各耐药相关表型在其中的作用,采用WHONET软件对数据进行统计分析. 结果 经人工诱导25代后获得的菌株都具有IMP耐药性;产MBL 的IMP耐药PA(IRPA)47株,占75.8%;产ESBLs 的IRPA 21株,占 33.8%;产AmpC的IRPA 9株,占 14.5%;主动外排系统表型阳性IRPA 3株,占4.8%. 结论 PA产生IMP耐药性涉及MBL、ESBL、AmpC和主动外排系统激活等多种耐药机制,本组诱导耐药表型以MBL阳性为主.
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耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性分析及金属β-内酰胺酶检测
目的了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药谱及产金属β-内酰胺酶情况.方法 K-B法测定铜绿假单胞菌对10种抗菌药物的耐药性;亚胺培南纸片法测定铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶.结果 194株铜绿假单胞菌中44株(22.9%)对亚胺培南耐药,这44株菌对哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、左氧氟沙星耐药;对阿米卡星耐药率相对较低;对头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星部分敏感;对亚胺培南耐药的44株铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶检出率为11.3%.结论产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南及头孢类抗生素耐药的机制之一,治疗耐亚胺培南铜绿假单胞菌引起的感染宜参考实验室的细菌药敏结果选用较敏感的四代头孢或环丙沙星结合头孢哌酮/舒巴坦联合用药;实验室提高对其检出可帮助临床合理选用抗菌药物并减少耐药性的传播.
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耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的检测及耐药性分析
目的 了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶(MBL)情况及其对临床常用抗菌药物的耐药性,为临床抗感染治疗提供依据.方法 采用E-test检测铜绿假单胞菌是否产生MBL,用BD Phoenix 100全自动微生物测定铜绿假单胞菌对常用15种抗菌药物的耐药性.结果 在分离的189株铜绿假单胞菌中耐碳青霉烯类的有54株(28.6%),其中产MBL的有13株(24.1%);耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌与碳青霉烯类敏感铜绿假单胞菌对大多数常用抗菌药物的敏感性差异有统计学意义.结论 医院耐碳青霉烯类的铜绿假单胞菌检出率较高,多药耐药现象较严重,产MBL是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物耐药的主要因为之一,临床医师应参考微生物实验室的药敏结果,合理选用抗菌药物.
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ICU多药耐药鲍氏不动杆菌金属β-内酰胺酶检测
目的 调查医院ICU痰标本中分离出鲍氏不动杆菌的耐药特点及产金属β-内酰胺酶情况.方法 收集ICU2005年7月-2007年3月经VITEK-32系统GNI<'+>卡鉴定为鲍氏不动杆菌的不重复菌株42株,均为痰标本,用GNS132做常规药物敏感试验,用纸片扩散法(K-B法)补做头孢哌酮/舒巴坦、多黏菌素E、氨曲南的药物敏感试验,用Etest试验检测金属β-内酰胺酶.结果 42株鲍氏不动杆菌对18种抗菌药物的耐药率以头孢哌酮/舒巴坦、多黏菌素E低,为2.4%,亚胺培南的耐药率为66.7%;对其他药物的耐药率为69.4%～100.0%;Etest检出金属β-内酰胺酶阳性菌9株.结论 产金属β-内酰胺酶是鲍氏不动杆菌耐亚胺培南的重要机制之一,治疗多药耐药鲍氏不动杆菌引起的感染应首选头孢哌酮/舒巴坦和多黏菌素E.
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铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶因素分析
目的 分析医院2009年1月-2011年1月铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶因素.方法 收集医院2009年1月-2011年1月住院患者不同标本的铜绿假单胞菌102株,按照CLSI操作规程进行产金属β-内酰胺酶菌株的确认；采用单因素分析铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的相关因素；采用多因素logistic回归分析法确定其产酶独立危险因素.结果 102株铜绿假单胞菌中检出产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌44株,检出率43.5％;单因素分析结果显示,连续使用亚胺培南时间、联合用药和频繁更换用药是铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶相关因素(P＜0.05)；多因素logistic回归分析结果表明,连续使用亚胺培南、联合用药和频繁更换用药均为造成铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的独立危险因素,其OR值及95％ CI分别为2.32、10.23、1.38及1.12～3.37、1.86～27.41、1.32～6.81.结论 产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌具有较高的交叉耐药性和多药耐药性；长时间使用亚胺培南、联合用药和频繁更换用药者易造成细菌产金属β-内酰胺酶.
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青岛地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶检测及耐药性分析
目的 了解青岛地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶的产生及耐药特性,为临床抗感染治疗提供依据.方法 采用亚胺培南纸片法检测铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶,K-B法测定铜绿假单胞菌对15种抗菌药物的耐药性.结果 在286株铜绿假单胞菌中,有93株对亚胺培南耐药,耐药率为32.5%,在93株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,产金属β-内酰胺酶15株,产酶率为16.1%;286株铜绿假单胞菌对15种抗菌药物耐药率较低的抗菌药物有头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦,分别为16.8%、24.8%、26.6%,对环丙沙星和头孢他啶的耐药率相对较低,分别为43.7%和33.6%,耐药率＞90.0%的抗菌药物有氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢泊肟和头孢呋肟等.结论 耐亚胺培南铜绿假单胞菌的检出率较高,多药耐药现象较严重,产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南及头孢类抗菌药物耐药的主要原因之一,应参考实验室的药敏结果,合理选用抗菌药物.
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产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的检出率与药敏分析
目的 探讨铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶检出率并分析其药敏谱.方法 收集深圳南山区2007年6月-2008年6月共323株铜绿假单胞菌,采用法国生物梅里埃公司ATB-Expression细菌鉴定;药敏试验采用ATBPSE5药敏试剂条测试;对亚胺培南和美罗培南同时耐药菌株用改良纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶.结果 共分离出323株铜绿假单胞菌,产金属β-内酰胺酶46株(14.3%);铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率高达45.4%和26.3%,多黏菌素E对产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌依然有非常好的效果,敏感率达到96.9%;铜绿假单胞菌泛耐状况不容忽视.结论 加强金属β-内酰胺酶检测,按照药敏试验选择治疗药物,以防止菌株扩散是非常重要的.
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嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析
目的 了解嗜麦芽寡养单胞菌的耐药性,以指导临床用药.方法 采用法国生物梅里埃公司VITEK2全自动微生物鉴定仪进行鉴定与药敏试验,双纸片法确证试验与纸片协同法筛选超广谱β-内酰胺酶(EsBLs)和金属β-内酰胺酶(MBL).结果 嗜麦芽寡养单胞菌对亚胺培南天然耐药,对头孢菌素类、氨基糖苷类、氨曲南均高度耐药,对头孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星、复方新诺明的耐药率低,分别为12.50%、13.64%、14.77%;产ESBLs菌株占69.32%,产MBL菌株占88.64%,同时产ESBLs与MBL菌株占60.23%.结论 嗜麦芽寡养单胞菌对大多数抗菌药物有较高的耐药性,治疗上建议足量联合使用≥2种抗菌药物.
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铜绿假单胞菌的耐药性分析与金属β-内酰胺酶检测
目的 了解住院患者送检标本中分离出的铜绿假单胞菌的耐药特点及其产金属β-内酰胺酶(MBLs)情况.方法 收集2005年7月-2008年8月住院患者送检的临床标本中,共分离出的铜绿假单胞菌95株,采用德灵公司生产的NC21鉴定药敏板及配套试剂和VITEK-32进行鉴定和测定药物敏感性,并对耐亚胺培南的30株菌用K-B法确认亚胺培南的敏感性和检测美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦和多黏菌素E的敏感性,其中19株经K-B法确认为哑胺培南耐药的菌株用Etest法检测MBLs.结果 95株铜绿假单胞菌的耐药率结果显示,以阿米卡星的耐药率低,为15.4%,对其他抗菌药物的耐药率为26.7%～100.0%;经仪器检测耐亚胺培南的30株菌中,对美罗培南和亚胺培南的敏感性差异无统计学意义(u值1.04,P>0.05),头孢哌酮/舒巴坦的敏感性高于亚胺培南(u值2.6,P<0.05),多黏菌素E的敏感性高于亚胺培南(u值527.5,P<0.05);Etest从19株(经K-B法确认为亚胺培南耐药的菌株)菌中检出12株产金属β-内酰胺酶,亚胺培南耐药株金属β-内酰胺酶检出率为63.2%.结论 临床标本中分离出铜绿假单胞的多药耐药现象十分严重,亚胺培南耐药株产MBLs比例较高;多黏菌素E、头孢哌酮/舒巴坦对耐亚胺培南铜绿假单胞菌治疗可能有效,产MBLs铜绿假单胞菌有院内间歇流行趋势.
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产吲哚金黄杆菌金属β-内酰胺酶及其基因型检测
目的 了解产吲哚金黄杆菌(Chryseobacterium indologenes)耐药特性和金属β-内酰胺酶(MBL)的产酶率及其基因型.方法 琼脂稀释法检测25株产吲哚金黄杆菌的低抑菌浓度(MIC),增效法、改良三维试验法进行MBL表型检测,聚合酶链反应(PCR)筛查MBL和整合酶基因,全编码基因检测以及序列分析以确定IND型MBL的基因型;接合试验监测耐药基因是否具有可转移性,等电聚焦电泳(IEF)测定β-内酰胺酶等电点(pI).结果 产吲哚金黄杆菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率为88.0%,但利福平、加替沙星、左氧氟沙星的耐药率均＜12.0%;表型检测19株细菌产MBL,PCR初筛检测仅IND-like通用引物扩增出20株阳性,全编码基因分析,blaIND-1型9株,blaIND-2型10株,IND-like型MBL基因1株,其中5株blaIND碱基序列和演绎的氨基酸序列均发生改变;接合试验均为阴性,19株检测到1(17株)或2个(2株)pI值,携带blaIND-1的菌株(CI-5)经IEF和MBL表型检测均为阴性.结论 产吲哚金黄杆菌具有很高的MBL检出率,本地区的产吲哚金黄杆菌以产IND-1、IND-2型MBL为主,blaIND可能存在蛋白质的不表达或低水平表达.
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耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的药物敏感性与耐药机制研究
目的 研究耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的药物敏感性及铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制,为指导临床用药提供试验依据.方法 应用琼脂稀释法检测耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的药物敏感性,采用重复序列聚合酶链反应进行菌株同源性分析；应用纸片增敏协同试验筛选产金属酶的菌株,设计外排泵抑制试验对耐药菌株的外排泵进行检测.结果 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药率以环丙沙星、多黏菌素E较低；同源性研究结果显示,共有8个型别；75株碳青霉烯类耐药株中,13株为金属酶阳性；外排泵抑制剂可以使34株美罗培南耐药株的MIC值较单药时降低≥4倍.结论 该院分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌以A、B型为主；严重感染患者可以考虑使用环丙沙星等抗菌药物；产金属酶和外排泵等耐药外排系统可能是导致铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的主要原因.
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产金属β-内酰胺酶IMP-4肺炎克雷伯菌调查分析
目的 对1株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌(KPN)进行产金属β-内酰胺酶(MBLs)和产碳青霉烯酶(KPC)分析.方法 2010年4月2株KPN分别分离自天津市红桥医院1例住院患者的尿标本和痰标本,MIC法对分离菌株进行药物敏感试验,ESBLs确证试验检测其是否产ESBLs,PCR扩增blaIMP、blaVIM和KPC基因,扩增产物进行测序和分析.结果 2株KPN均为多药耐药菌,其中从尿中分离的KPN(HQU)对亚胺培南耐药,从痰中分离的KPN对亚胺培南敏感,均产ESBLs;从尿中分离的KPN携带MBLs基因blaIMP-4,且定位于质粒上;未检出blaVIM和KPC基因.结论产blaIMP-4型MBLs KPN的出现提示耐药性传播广泛,临床应加强耐药监测和严格药物使用.
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耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性与金属β-内酰胺酶的关系
目的 了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性与金属β-内酰胺酶(MBLs)的关系.方法 2-巯基丙酸协同试验筛选产MBLs菌株;PCR扩增和克隆含有MBLs基因的Ⅰ型整合子,Southern印迹分析MBLs基因的定位;随机引物多态性DNA(RAPD)分析分离株的同源性.结果 128株亚胺培南耐药株对阿米卡星、头孢他啶和环丙沙星的耐药率(31.9%、43.6%和61.0%),显著高于亚胺培南敏感株(9.8%、13.9%和24.3%)(P＜0.01);分别有6株(4.7%)或9株(7.1%)产VIM-2或IMP-1型MBLs;VIM-2基因位于染色体上的Ⅰ型整合子结构,而IMP-1基因位于23kb的质粒上;RAPD显示8株产IMP-1型MBLs菌株有相同的带谱.结论 产VIM-2和IMP-1型MBLs铜绿假单胞菌可导致医院感染.
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耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的研究
目的 检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌产生金属β-内酰胺酶的情况,对金属β-内酰胺酶进行分型.方法 收集天津医科大学总医院2005-2006年耐亚胺培南并对所有受试抗菌药物均耐药的铜绿假单胞菌16株,应用聚合酶链反应扩增金属β-内酰胺酶基因;应用限制性内切酶特异的酶切位点对聚合酶链反应产物进行酶切反应,确定金属β-内酰胺酶亚型.结果 16株铜绿假单胞菌有2株产生IMP型金属β-内酰胺酶,限制性酶切反应证实为IMP-1型金属β-内酰胺酶基因.结论 临床分离的产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌以IMP-1型为主,在碳青酶烯类抗菌药物的耐药因素中金属β-内酰胺酶的水解作用并非主要机制.
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五味子乙醇提取物对产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的体外抑菌作用研究
目的 探究五味子乙醇提取物对产金属β-内酰胺酶(MBL)铜绿假单胞菌(PAE)的体外抑菌效果,为临床治疗产MBL PAE感染寻求新的方法.方法 采用MicroScanWalkAway-40自动微生物分析仪及配套试剂筛选出多药耐药PAE,通过亚胺培南(IMP)、IMP+乙二胺四乙酸(EDTA)组合抗菌纸片增效法在多药耐药PAE中筛选出产MBL的PAE,利用70％乙醇溶液对五味子进行回流提取、浓缩,用琼脂扩散法,对此醇提物进行体外抑菌试验,再用二倍稀释法检测五味子乙醇提取物对产MBL PAE的低抑菌浓度(MIC).结果 五味子乙醇提取物对产MBL PAE的体外抑菌试验显示有抑制作用,琼脂平板扩散法测得抑菌圈直径均＞16 mm,在26～34 mm；二倍稀释法测得MIC为4～16 mg/ml.结论 五味子70％乙醇提取物对产MBL PAE有抑菌作用.
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获得性金属β-内酰胺酶初筛方法的研究
目的探讨并建立适用于临床微生物实验室常规初筛检测获得性金属β-内酰胺酶(MBL)的实验方法,为监控产酶株的流行及指导临床合理选择抗生素提供依据. 方法以EDTA和巯基乳酸(TLA)为MBL的抑制剂,以亚胺培南(IPM)和头孢他啶(CAZ)为MBL的底物,采用纸片协同法和复合纸片法作MBL初筛试验,将几种初筛试验的结果与聚合酶链反应(PCR)的结果进行比较分析. 结果应用PCR法,在 102株耐IPM和(或)CAZ铜绿假单胞菌中检出VIM型MBL阳性株11株,其中1株经DNA测序证实为VIM-2亚型;几种初筛试验中,IPM-EDTA复合纸片法的阳性预测值(90.9%)和阴性预测值(98.9%)高,敏感性(90.9%)和特异性(98.9%)都>90%. 结论 IPM-EDTA复合纸片法方法简便、结果可靠,可作为获得性MBL的初筛方法在临床微生物室日常工作中开展.
