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Hoxa-10基因与生殖
1984年,McGinnis等[1]和Scott等[2]发现在果蝇同源异型复合物(homeotic complexes, HOM-C)基因中存在一段长183 bp的保守序列,命名为同源异型框(homeobox),其编码产物是带有一螺旋-转折-螺旋DNA结合基序的同源结构域(homeodomain)。
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细胞周期素与卵巢癌关系的研究进展
卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤,其发病率有逐年上升的趋势,尽管卵巢癌的治疗已取得显著进展,但由于不能早期及时准确诊断,5年存活率始终徘徊在30%~40%,而且不同期别患者预后差异很大[1].本文就细胞素蛋白与卵巢癌的关系研究作一综述.细胞周期素是一组在结构上同源均含有一个保守序列-周期素盒(Cyclinˊs box)的蛋白质分子,它们可能与CDKs形成复合体,在不同的细胞周期中发挥调节作用,使细胞完成各个时机转换.Cyclins作为Cdks的调节亚基,在不同细胞周期时相中合成、积累并于相应的CDKs结合,进而激活Cdks,促进细胞周期进展.在整个细胞周期中,CDKs的量保持恒定,Cyclins则在不同时相中周期性的积累与分解,调节Cdks的激酶活性[2].
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利用广谱细菌聚合酶链反应-DNA测序技术进行细菌病因学诊断
16S核蛋白体RNA基因(16S rRNA gene, 16S rDNA)存在于所有细菌中,其基因序列由保守性序列和多样性序列相间排列而成.其中高度保守的序列几乎在所有细菌中都是一致的,而多样性序列随细菌种类不同而不同.因此,在16S rDNA 多样性序列两侧的高度保守序列中设计聚合酶链反应(PCR)引物,便可将多种细菌的多样性(特异性)基因片段扩增,再通过DNA测序技术,就能确定细菌的种类.
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铜绿假单胞菌检出特殊1型整合子结构
1型整合子是造成铜绿假单胞菌广泛耐药的重要原因,其基本结构为:5'端保守序列(1型整合酶)-特异识别位点(attI或attC)-3'端保守序列(qacE△1耐药基因盒-sul1耐药基因盒),在5'端与3'端之间可插入其他耐药基因盒,并将其整合在其中,形成各种组合的多重耐药整合子.
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丙型肝炎病毒武威地方株核心区全基因片段的克隆与分析
丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus)是一种高度异质性的单股正链RNA病毒,不同地区所克隆的HCV株,无论是核苷酸序列,还是氨基酸序列都有很大不同。对各地HCV流行株核苷酸序列的克隆,可为开展HCV的分子流行病学研究、HCV的基础研究工作及其疫苗的研制提供资料。本文克隆了武威地方株HCV核心区基因全片段,对其进行了序列测定,并与河北株、美国株进行了比较。现将结果简报如下。用兰州生物制品研究所诊断用品二室提供的抗-HCV ELISA诊断试剂盒,从武威地区献血员供血中筛选出抗-HCV阳性血清,再从此阳性血清中用HCV PCR试剂盒(购自华美生物工程公司)筛选出HCV RNA阳性血清,按酚/氯仿法用Trizol(Gibco-BRL)试剂提取病毒RNA。用Random Primer,参照HCV-Hebei、HCV-Tai、HCV91序列,选取保守序列,用oligo 4.0设计待扩增区域引物。
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344株葡萄球菌耐消毒剂基因gacA/B检测及耐药性分析
葡萄球菌是临床重要的致病菌群,目前已成为医院感染和社区感染的主要病原菌.同抗生素对细菌的作用一样,消毒剂的大量使用,细菌对消毒剂产生抗性亦不可避免.mecA基因检测阳性预示该类细菌对B内酰胺类药物临床无效[1],femB是金黄色葡萄球菌中高度保守序列,但在凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)中不表达.
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同源盒基因在急性髓系白血病中的表达
同源盒基因(homeobox genes)初发现于果蝇体内,以包含一段被称为同源盒的183 bp的保守序列为特征[1].
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耐药铜绿假单胞菌携带的整合子及其耐药基因盒检测分析
整合子系统是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)产生耐药的重要因素,其包括5'保守序列(CS,包括整合酶基因int、重组位点att Ⅰ和1个启动子)和3'CS(由qacE△1和sul1组成);整合子携带的耐药基因盒包括1个单独的基因和1个下游的重组位点attC;整合子通过att Ⅰ和attC位点之间或2个attC位点之间的重组而捕获耐药基因.本研究对临床分离的13株耐药PA菌行药物敏感试验后,对整合子和基因盒的携带情况进行检测,并对序列、定位及质粒接合试验进行分析.
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肠道上皮特异性基因CDX2
同源异型框基因及相关蛋白是指在生物体中一个具有相对保守序列的基因及蛋白家族,广泛存在于从酵母到乳动物的所有真核生物,对生物的发育和细胞分化具有重要的调节作用.本文主要从各个方面对肠道hui特异性表达的同源异型框转录因子-CDX2(caudal-related homeodomain transcripdon 2)做一简单概述.
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肝癌相关cDNA片段的快速克隆和表达
目的:克隆原发性肝癌相关新基因.方法:利用抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH)已经发现了1条新的肝癌相关基因片断表达序列标签(EST),长447 bp,经Genebank检索,90%无同源性.在其保守序列区设计了2条用于3'Race扩增的寡聚核苷酸引物(3'GSP2:5'-CGCATAGTACCAGTATCGAC AAAGG-3',3'NGSP2:5'-TCCACATTACGGACC CGACGGATT-3'),利用cDNA末端快速扩增法(RACE)进一步克隆该基因的全长cDNA序列.人原发性肝癌细胞株HepG2,体外传代培养,培养基为RPMI1640培养基.提取HepG2总RNA,方法参照SV Total RNAIsolation System 的说明进行.RACE法扩增采用Clontech公司的Smart TM Race cDNA Amplification Kit.将3'RACE-PCR扩增的目的片段以Race自带的产物纯化试剂盒进行纯化、回收,然后将其克隆到PMD18-T Vector中,提纯质粒后进行酶切鉴定,确认质粒内有插入片段,由宝生物工程(大连)有限公司协助完成测序,将克隆所得cDNA片段用NCBI提供的BLASTN与GeneBank与dbEST、 nr数据库进行同源性比较,确认代表新基因的EST并且登录GeneBank(http://www.ncbi.nlm.nih.GOV/submission).3便病理标本取自西南医院肝胆科,病理证实均为原发性肝细胞肝癌,分别提取肝癌及远端正常肝组织总RNA.将酶切回收的克隆插入片段分别进行同位素标记获得cDNA探针,利用Clontech公司的 ExpressHYBTM杂交液通过RNA印记法检测克隆片段在肝癌及正常肝组织中的表达,方法参照ExpressHYBTM Hybridization Solution user manual说明进行.同时,利用一联网的基因表达分析序列数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SAGE(series analysis of gene expression,SAGE)对基因的表达及其表达水平进行分析,从而确定其组织分布.结果:得到5条3'EST(694 447-3,724 447-3,697 447-3,711 447-3 692 447-3;大小500-550bp),5条3'EST均为登录GenBank(登录号:CK730344,CK730345,CK730346,CK730347,CK730348).对其中2条带有poly-A尾的3'EST(694 447-3 724 447-3)进行序列分析后,发现他们是代表新基因或不同剪接体的EST,且具有共同的保守序列.RNA印记分析显示694 447-3,724 447-3在3例肝癌组织中的表害强度时显高于对应的正常组织.通过SAGE文库分析基因的表达谱,发现694 447-3和724 447-3在神经系统肿瘤、结肠癌、胃癌、乳腺癌肿瘤文库的表达高于对应的政党组织文库.结论:克隆所得的2条带有poly-A尾的3'EST可能是新的肝癌多期因家庭成员.利用RACE技术可以快速、高效的克隆疾病相关基因.
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鼠肝炎冠状病毒非结构蛋白1内保守序列LLRKxGxKG的功能研究
目的 研究鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)内的保守氨基酸序列LLRKxGxKG的功能.方法 扩增并构建MHV NSP1正常基因及LLRKxGxKG序列缺失突变的NSP1基因,分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得真核表达质粒.用所构建的真核表达质粒转染L929细胞,经新城疫病毒(NDV)刺激诱导后,采用ELISA法检测IFN-β的表达水平,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β表达的影响.通过与含CAT和Luc报告基因的重组质粒进行共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对IEF-β启动子活性和干扰素刺激应答元件(ISRE)活性的影响.通过与三种报告基因(pRLuc-CMV、pGL3-basic、pGL3-control)共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对共转染基因表达的影响.结果 MHV NSP1对真核细胞产生干扰素有一定的影响,并可显著抑制IFN-β启动子或ISRE应答元件的活性,且该抑制作用不受LLRKxGxKG序列缺失的影响.同时,MHV NSP1还可强烈抑制多种共转染报告基因的表达.该抑制作用在LLRKxGxKG序列缺失后显著降低.结论 MHV NSP1对Ⅰ型干扰素信号通路有特异的抑制作用.LLRKxGxKG序列是MHV NSP1的一个重要功能域,在抑制共转染基因表达过程中发挥着重要作用.
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应用PCR对散发性脑炎进行病毒学检查的临床价值
多年来对于散发性脑炎的发病原因一直不甚明了,国内外有关这方面的报道也很少,为了探讨其发病原因,我们对34例散脑患者的脑脊液进行了病毒学分析,采用PCR方法扩增HSV、EBV和CMV三种病毒的DNA保守序列,现报告如下.
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基于甲型流感病毒血凝素的广谱流感疫苗研究进展
目前使用的流感疫苗都是针对现行流行株设计的,因此难以有效应对病毒快速变异出现的新病毒株,而开发能同时抵抗多个流感病毒株感染具有交叉保护作用的通用疫苗是今后流感疫苗研发的趋势.本研究对近年来基于流感病毒血凝素构建的通用流感疫苗作一综述.
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干扰素保守序列结合蛋白在白血病中表达的研究
干扰素保守序列结合蛋白(ICSBP)是一种转录抑制因子,通过酪氨酸磷酸化过程发挥其生物活性[1].
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流感通用疫苗的研究进展
流感是一种呼吸道传染性疾病.目前制备流感疫苗主要利用流感病毒的HA和NA诱导相应的抗体,但存在抗原漂移和抗原转换等问题.解决办法之一就是研制流感通用疫苗.M2e是流感病毒M2蛋白的胞外区,它的序列相对保守.利用HBc作为病毒样颗粒包装M2e是至今为止制备流感通用疫苗可行的方法.实验证明,M2e-HBc融合蛋白不仅能诱导出足够的抗体,还能增强T细胞反应,产生交叉性保护效应,大大降低流感病毒的致病率、致死率,促进疾病的恢复.此外,还有流感病毒的NP和HA等保守序列,结合佐剂及黏膜给药方式都不失为通用疫苗的可行选择.
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干扰素保守序列结合蛋白在急性白血病中的表达及意义
我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究了干扰素保守序列结合蛋白(ICSBP)在急性白血病中的表达情况,探讨该基因的表达在急性白血病中的临床意义.
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MicroRNA-155在免疫调控中的作用
microRNAs ( miRNAs )是一种具有高度保守序列的非编码微小RNA分子,能在转录后通过与靶基因的特异性相互作用来降解mRNA或者抑制靶基因的翻译,也可以在特定条件下上调靶基因的翻译和转录水平、microRNA-155与micRNA家族中的一员,介导多种生理病理过程,在炎症反应、免疫反应、肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。现就miRNA-155的主要特点及其功能的研究进展予以综述。
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结核杆菌热休克蛋白肽段对胶原诱导性关节炎保护作用的研究
目的:研究结核杆菌HSP65肽段(P256-270)和结核杆菌HSP70肽段(P111-125)对类风湿关节炎动物模型--胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的保护性作用.方法:结核杆菌HSP肽段滴鼻免疫大鼠,观察其对CIA的防治效果,观察指标包括关节炎指数评分、关节病理学分析、酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测脾脏淋巴细胞分泌细胞因子(IL-4、IFN-γ)水平、流式细胞术分析外周血T淋巴细胞亚群及酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清中抗CⅡ抗体水平.结果:分别经结核杆菌HSP65和HSP70肽段滴鼻免疫的实验组大鼠,与阳性对照组比较,关节炎指数明显下降(P<0.05),病理变化减轻,抑制性细胞因子IL-4水平升高(分别为P<0.05和P<0.01),而炎性细胞因子IFN-γ水平降低(P<0.01),CD4+/CD8+T细胞比值降低(P<0.05),血清中抗CⅡ抗体水平也降低(分别为P<0.05和P<0.01).结论:应用结核杆菌HSP65肽段或HSP70肽段能减轻CIA大鼠的症状和体征,其作用机制与调节T细胞的功能有关,此研究可为探讨人类RA新的免疫治疗方法提供依据.
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基于流感病毒血凝素的通用流感疫苗研究进展
目前使用的流感疫苗都是针对现行流行株设计的,因此难以有效应对病毒快速变异出现的新病毒株,而开发能同时抵抗多个流感病毒株感染的具有交叉保护作用的通用疫苗是今后流感疫苗研发的趋势.随着对流感病毒研究的深入,人们发现将传统认为具有高度变异性的流感病毒血凝素蛋白合理设计成疫苗靶抗原,也可以在一定程度上起到抗多个流感病毒株感染的保护作用,这表明流感病毒血凝素也具有作为通用流感疫苗候选抗原的潜力.此文对近年来基于血凝素构建的通用流感疫苗的研究进行综述.
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沃氏葡萄球菌尿素酶基因保守序列的克隆
目的:克隆沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列.方法:通过脲酶试验,定性检测沃氏葡萄球菌的尿素分解活性,应用PCR克隆其尿素酶基因中的保守序列,测序并分析.结果:沃氏葡萄球菌具有尿素分解活性,其基因组中含有尿素酶基因,与已知的尿素酶基因具有高度同源性.结论:本研究证实沃氏葡萄球菌具有尿素分解活性,并克隆出具有该活性的沃氏葡萄球菌尿素酶基因的部分保守序列.