首页 > 文献资料
-
2种耐药表型4种非发酵菌质粒介导的5种喹诺酮类耐药相关基因的检测
目的 检测2种耐药表型(多耐和泛耐)的4种非发酵病原菌,,鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,Sm)和脑膜炎金黄杆菌(Chryseobacterium meningosepticum,Cm)质粒介导的5种喹诺酮类耐药相关基因,为临床合理使用喹诺酮类抗菌药物提供依据. 方法 应用Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板和API 20NE鉴定条/PSE5.0药敏条对19株临床分离菌(6株Ab(多耐药2株、泛耐药4株)、6株Pa(多耐药、泛耐药各3株)、4株Sm(多耐药、泛耐药各2株)和3株脑膜炎金黄杆菌(2株多耐药、1株泛耐药))进行鉴定和药敏试验,并用PCR法检测其喹诺酮类耐药质粒介导的5种喹诺酮类相关基因,即喹诺酮类药物耐药相关基因A(quinolone resistance A,qnrA)、氨基糖苷类乙酰转移酶基因acc(6')-Ib的环丙沙星耐药变异体基因(aminoglycoside acetyhransferase ciprofloxacin resistance variant,acc (6')-Ib-cr)及3种整合子基因(intI1、2、3),扩增产物经1％琼脂糖电泳分析并测序,利用生物信息学的方法进行比对分析. 结果 本组1 9株菌中携带acc(6') Ib-cr 8株,6株为泛耐药(Ab 3株,Pa 2株,Snm 1株),泛耐菌携带率60.0％ (6/10);2株多耐菌(Ab、Pa各1株),多耐菌携带率22.0％(2/9).泛耐菌携带率与多耐菌携带率比较差异无统计学意义(P＜0.05).11株检出Ⅰ类整合子,其中6株泛耐药(Ab3株,Pa2株,Sm1株),携带率60.0％(6/10);5株多耐药菌(Pa3株,Ab、Cm各1株),携带率55.6％(5/9),泛耐菌携带率与多耐菌携带率比较差异无统计学意义(P＞0.05).6株同时检出 acc(6')-Ib cr和intI1,qnrA和intI2、intI3均阴性. 结论 本组临床分离菌喹诺酮类药物耐药与acc(6') Ib-cr和intI1有关,与qnrA,intI 2 andintI 3无关.acc(6') Ib-cr携带率泛耐菌高于多耐菌,而intI1携带率无显著差异;2种基因在Ab和Pa的检出率较高且相近.
-
含qnrA基因质粒介导不同水平环丙沙星耐药性的机制研究
目的 研究4个含qnrA基因质粒在大肠埃希菌接合子中介导环丙沙星耐药水平不同的发生机制.方法 以大肠埃希菌J53作为受体菌,通过接合试验从4株qnrA阳性的临床菌株中获得4株接合子.采用E test方法测定环丙沙星低抑菌浓度(MIC);以PCR法检测aac(6')-Ib-cr基因,采用实时RT-PCR法测定qnrA的mRNA表达水平,通过启动子探针载体pKK232-8测定qnrA启动子强度,测定、比较启动子周边序列.结果 环丙沙星对仅含qnrA质粒pHS4及pUS5的接合子的MIC为0.094μg/ml及0.125μg/ml,同时携带qnrA及aac(6')-Ib-cr质粒pUS3及pUS6的接合子的环丙沙星MIC为0.25μg/ml及1.00μg/ml.含pUS6接合子qnrA相对表达水平较其他接合子高13～32.5倍,pUS6的qnrA上游序列启动子活性强,比另3个质粒高12倍,序列分析发现与pUS3比较,pUS6中qnrA转录启始位点与启始密码之间有7 bp(GTYAGCA)的缺失.结论 1个质粒同时携带qnrA和aac(6')-Ib-cr 2个耐药基因及qnrA高表达是导致接合子对环丙沙星的耐药性不同的原因.
-
产超广谱β-内酰胺酶菌株质粒介导喹诺酮类药物耐药机制的研究
目的 明确产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株对喹诺酮类药物的耐药机制.方法 用PCR方法扩增产ESBLs的263株大肠埃希菌和99株肺炎克雷伯菌的qnrA基因.对CTX-M和qnrA基因都阳性的肺炎克雷伯菌ZJ96采用接合试验、Southern杂交进行基因定位,用鸟枪法对分离自ZJ96菌株的同时含qnrA和CTX-M基因的质粒(pKP96)进行全序列测定.结果 263株大肠埃希菌中有5株检出qnrA基因,阳性率为1.9%;99株肺炎克雷伯菌中有8株检出qnrA基因,阳性率为8.1%.ZJ96菌株含有CTX-M和qnrA基因同时阳性的大小约60 kb的接合性质粒pKP96.菌株ZJ96的接合菌质粒pKP96含有qnrA、CTX-M-24、aac(6')-Ib-cr、tetA和intⅠ 1等基因.结论 喹诺酮耐药基因qnrA和CTX-M-24型ESBLs基因同时位于可接合性质粒中,耐药质粒的广泛传播是造成临床耐药菌株大量出现的主要原因.
-
革兰阴性杆菌临床分离株质粒介导喹诺酮类耐药研究
目的 了解质粒介导耐药机制在革兰阴性杆菌临床株对喹诺酮类抗菌药耐药性形成中的作用.方法 以PCR方法筛选541株连续分离的所有环丙沙星耐药或中介革兰阴性杆菌中的耐药基因qnrA;以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性;对qnrA阳性株测定氨基糖苷乙酰化酶aac(6′)-Ib-cr基因,分析了gyrA和parC基因的喹诺酮耐药决定区的变异.结果 541株革兰阴性杆菌中,7株肠杆菌科细菌qnrA检测阳性,其中4株为阴沟肠杆菌,在不发酵糖菌中未检出qnrA基因.在7株qnrA阳性菌中,4株喹诺酮耐药性可通过质粒转移,接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升12～125倍.4个接合子中环丙沙星MIC较高的2个结合子携带aac(6′)-Ib-cr,7株qnrA阳性临床分离菌中5株耐药决定区gyrA、parC有变异.结论 qnrA在肠杆菌属临床分离株中的检出率较高,aac(6′)-Ib-cr基因及靶位改变与qnrA同时存在可能使细菌对喹诺酮类的耐药性进一步上升.
