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养殖动物分离的大肠埃希菌质粒介导喹诺酮耐药机制的研究
目的 调查养殖业动物大肠埃希菌对喹诺酮类抗生素的耐药情况,阐明耐药机制,为控制畜牧养殖业滥用抗生素提供依据.方法 从7省市9家养殖场采集鸡和猪的肛门拭子样本,分离并鉴定其中的大肠埃希菌,PCR扩增筛选其中的质粒上的喹诺酮耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD和aac(6')-I 6-cr,并进行测序和药敏试验,通过接合试验以确定耐药基因的可转移性以及在喹诺酮耐药中的作用.结果 在818株大肠埃希菌中检出38株qnr阳性菌株和75株aac阳性菌株,其中gyrA突变的有15株,parC突变的有13株.结论 养殖业动物分离大肠埃希菌对喹诺酮的耐药性较为普遍,质粒介导的喹诺酮耐药作为一个重要的机制参与其中,提示应加强食源性细菌耐药性的监测.
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临床常见的革兰阴性杆菌耐药情况及其aac(6')-Ib-cr基因检测结果分析
目的 了解我院临床常见的革兰阴性杆菌的耐药状况及其质粒介导的能使喹诺酮类和氨基糖甙类药物同时耐药的基因aac(6')-Ib-cr的流行分布状况和比较分析.方法 用微量肉汤稀释法测定2010年从临床分离的299株临床常见的革兰阴性杆菌(53株鲍曼不动杆菌、66株铜绿假单胞菌、83株大肠埃希菌和97株肺炎克雷伯菌)的MIC值.采用PCR检测所有菌株的aac(6')-Ib基因;并以内切酶BtsCI酶切消化aac(6')-Ib的PCR阳性产物以确定aac(6')-Ib-cr.结果 氨苄西林耐药率高,达75.3%,其次是头孢唑林,耐药率为58.5%;环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为25.1%和16.7%;哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和亚胺培南的敏感率均在90%以上.共检出aac(6')-Ib基因29株,其中有21株变异为 aac(6')-Ib-cr,变异率为72.4%(21/29);aac(6')-Ib-cr的总阳性率为7.0% (21/299),其中大肠埃希菌有9株及肺炎克雷伯菌有22株,其阳性率为11.67%(21/180),而在鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中未检出aac(6')-Ib-cr(0.0%,0/119);经χ2检验,两者间的差异具有统计学意义(χ2 =14.932,P＜0.01).结论目前哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和亚胺培南为抗感染治疗的首选药;环丙沙星的耐药率较高,要慎选,而左氧氟沙星耐药率相对低一些,可优先于环丙沙星选用.aac(6')-Ib- cr基因在肠杆菌科细菌与非发酵细菌中的分布差异具有统计学意义.
关键词： 革兰阴性杆菌 耐药 质粒介导耐药 喹诺酮类 aac(6')-Ib-cr -
革兰阴性杆菌临床分离株质粒介导喹诺酮类耐药研究
目的 了解质粒介导耐药机制在革兰阴性杆菌临床株对喹诺酮类抗菌药耐药性形成中的作用.方法 以PCR方法筛选541株连续分离的所有环丙沙星耐药或中介革兰阴性杆菌中的耐药基因qnrA;以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性;对qnrA阳性株测定氨基糖苷乙酰化酶aac(6′)-Ib-cr基因,分析了gyrA和parC基因的喹诺酮耐药决定区的变异.结果 541株革兰阴性杆菌中,7株肠杆菌科细菌qnrA检测阳性,其中4株为阴沟肠杆菌,在不发酵糖菌中未检出qnrA基因.在7株qnrA阳性菌中,4株喹诺酮耐药性可通过质粒转移,接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升12～125倍.4个接合子中环丙沙星MIC较高的2个结合子携带aac(6′)-Ib-cr,7株qnrA阳性临床分离菌中5株耐药决定区gyrA、parC有变异.结论 qnrA在肠杆菌属临床分离株中的检出率较高,aac(6′)-Ib-cr基因及靶位改变与qnrA同时存在可能使细菌对喹诺酮类的耐药性进一步上升.
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大肠埃希菌临床分离株对喹诺酮类抗菌药的质粒介导耐药
目的 了解近年来发现的质粒介导耐药机制在大肠埃希菌临床株对喹诺酮类耐药中所起的作用.方法 78株环丙沙星耐药菌株分离自上海5所教学医院.以克隆斑点杂交及Southern杂交方法筛选质粒介导耐药基因qnr;以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性;对qnr基因进行序列分析,以引物步移法对qnr周边质粒DNA进行测序、分析.结果 78株大肠埃希菌中,6株(7.7%)qnr检测阳性.在6株阳性菌中,喹诺酮耐药性均可通过质粒转移,接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升16～250倍.qnr基因与早报道的序列一致,qnr位于In4族的I类整合子上,本研究中的2个新整合子命名为In36及In37.结论 与qnr相关的质粒介导喹诺酮类耐药性在大肠埃希菌临床分离株中有一定程度流行,这可能是我国细菌对喹诺酮类耐药性上升迅速的原因之一.
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基因qnr与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药水平的相关性研究
目的 研究耐药基因qnr(qnrA,qnrB和qnrS)在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌环丙沙星敏感株与耐药株中与ESBLs阳性株和阴性株中的分布状况和比较分析.方法 从2006年全国美平耐药监测网点中收集241株非重复的大肠埃希菌(122株)和肺炎克雷伯菌(119株),用琼脂对倍稀释法测定所有菌株对药物环丙沙星、头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸的MIC值.采用PCR检测所有菌株的质粒介导喹诺酮耐药基因qnr.结果 在241椿筛选出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,环丙沙星的敏感率为36.9%,耐药率为61.4%.头孢噻肟的敏感率为45.2%,耐药率为39.0%.头孢他啶的敏感率为74.3%.耐药率为19.9%.ESBLs阳性株占56.8%.qnr共检出46株,总阳性率为19.1%(46/241).其中qnrA有2株(0.8%,2/241),qnrB有25株(10.4%,25/241),qnrS有19株(7.9%,19/241).一株从痰标本分离的肺炎克雷伯菌同时检出qnrB和qnrS.在肺炎克雷伯菌中,qnr共检出39株,阳性率为32.8%(39/119);在大肠埃希菌中,qnr共检出6株,阳性率为4.9%(6/122).在环丙沙星敏感菌株中,qnr基因的阳性率为13.5%(12/89);在环丙沙星耐药菌株中,qnr基因的阳性率为21.6%(32/148).经X2检验,qnr基因在环丙沙星敏感菌株与耐药菌株检出率的差异无统计学意义(X2=2.435,P＞0.05).在ESBLs阳性的菌株中,qnr的阳性率为23.4%(32/137);在ESBLs阴性菌株中,qnr的阳性率为12.5%(13/104).经X2检验,qnr基因在ESBLs阳性株与ESBLs阴性株中检出率的差异具有统计学意义(X2=4.590,P＜0.05).结论 质柱介导喹诺酮类耐药基因qnr在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛.qnr基因与环丙沙星的耐药水平没有相关性,而与细菌是否产ESBLs有相关性.
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中国大陆地区肠杆菌科细菌aac(6')-Ib-cr基因检出率与常见药物不同耐药水平关系的研究
目的 研究中国大陆地区质粒介导的耐药基因aac(6')-Ib-cr在肠杆菌科细菌环丙沙星和阿米卡星敏感株与耐药株中及在ESBL阳性株和阴性株中的分布状况和比较分析.方法 从2006年全国美平耐药监测网点中收集241株非重复的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用琼脂对倍稀释法测定所有菌株对环丙沙星等药物的MIC值.采用PCR检测所有菌株的aac(6')-Ib基因;并以内切酶BtsCI酶切消化aac(6')-Ib的PCR阳性产物和/或DNA测序以确定aac(6')-Ib-cr.结果 在241株筛选出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,环丙沙星的耐药率为61.4%(148/241);阿米卡星的耐药率为10.0%(24/241);ESBL阳性株占56.8%(137/241).aac(6')-Ib-cr的总阳性率为12.4%(30/241).经χ2检验,aac(6')-Ib-cr基因在环丙沙星敏感菌株与耐药菌株中的检出率差异具有统计学意义(0.0%和20.3%,χ2=20.655,P<0.05);在阿米卡星敏感菌株与耐药菌株中的检出率差异无统计学意义(12.0%和16.7%,χ2=0.112,P>0.05);在ESBL阳性株与ESBL阴性株中的检出率差异无统计学意义(16.1%和7.7%,χ2=3.797,P>0.05).结论 质粒介导喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib-cr在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分布广泛,而且该基因在环丙沙星敏感菌株与耐药菌株的检出率差异具有统计学意义,而在阿米卡星敏感菌株与耐药菌株中的检出率差异无统计学意义,在ESBL阳性株与阴性株中的检出率亦无统计学意义.
