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mSemcap2对HeLa细胞骨架及福氏志贺菌入侵HeLa细胞的影响
目的研究mSemcap2对HeLa细胞骨架的影响及其对福氏志贺菌(F2a)入侵HeLa细胞的影响,以了解mSemcap2的功能. 方法利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察转染重组质粒的HeLa细胞和野生HeLa细胞系微丝及微管的含量及分布;利用普通光学显微镜及激光共聚焦显微镜观察F2a对2种细胞入侵的差别. 结果转染mSemcap2后的HeLa细胞,其F-actin呈解聚状态,荧光强度减弱,actin在细胞核周集中分布的现象消失;转染mSemcap2的HeLa,其F2a入侵率明显高于野生HeLa细胞. 结论 mSemcap2可以通过细胞骨架的重排来促进细菌对上皮细胞的入侵.
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双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用
目的:观测双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用.方法:将用含双氢青蒿素的改良TYI-S-33培养基培养后的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,用专一性结合f-肌动蛋白(f-actin)的荧光染料罗丹明-鬼笔环肽(rhodanmine phalloidin,RDP)标记微丝,结合微管的紫杉醇(Paclitaxel,Oregen Green 488,P22310)标记微管,用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测、分析,用激光共聚焦显微镜(confocal microscopy,CFM)观察滋养体微丝和微管的变化.结果:经双氢青蒿素0.002 mg/L(LC50)作用12 h,RDP标记后,流式细胞仪检测结果显示,滋养体的微丝结构有明显的损伤,其FCM激发光荧光强度值(16.18±11.02)明显低于对照组(81.7±6.43),二者有显著性差异(P＜0.01);激光共聚焦显微镜观察显示,虫体形态及轮廓不完整.经P22310标记后,共聚焦显微镜下显示,虫体的吸盘和鞭毛轮廓不清,荧光强度降低或消失,实验组吸盘面积的荧光强度值与对照组比较有显著性差异(χ2=3.154,P＜0.01).结论:双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的细胞骨架有明显的损伤作用.
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激光共聚焦显微镜观察小鼠早期胚胎中蛋白激酶Cα的表达
目的 优化早期胚胎的免疫荧光染色方法并观察蛋白激酶C(PKCα)在小鼠着床前胚胎的表达和定位.方法 用优化的免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微术,观察小鼠早期胚胎2-细胞期到囊胚期PKCα的表达情况.结果 小鼠早期胚胎自2-细胞期到囊胚期均有PKCα亚型的表达,且主要集中在早期胚胎卵裂球的核内.结论 经优化后的免疫荧光染色可清晰地检测到胚胎内PKCα集中于细胞核内表达,且分裂间期的表达高于分裂期.
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低浓度双氢哇巴因对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响
用激光共聚焦显微镜检查研究低浓度双氢哇巴因 (DHO) 对豚鼠心室肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响.DHO 1 fmol/L ～ 1 mmol/L可增加心室肌细胞的[Ca2+]i, 尤其以 10 pmol/L DHO为显著.Nisoldipine、 EGTA或 TTX 可分别部分抑制 10 pmol/L DHO 的作用.去除胞外 K+ 和 Na+ 后,上述作用仍存在.以上结果表明,低浓度DHO可通过激活钙通道和TTX 敏感的钠通道,或许还可直接促进胞内钙释放来增加[Ca2+]i, 并有不依赖 Na+/K+泵而升高[Ca2+]i 的作用.
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激光共聚焦显微术在检测脑胶质瘤蛋白共表达中的应用
目的了解ephrinB2及其受体EphB4蛋白在脑胶质瘤中的表达规律,并评价激光共聚焦显微术在检测脑胶质瘤组织和细胞蛋白共表达中的应用性.方法利用双标免疫荧光分别检测EphB4/ephrinB2蛋白与GFAP或CD34蛋白在35例脑胶质瘤新鲜标本及人脑胶质瘤细胞系CHG-5、SHG-44中的共表达状况,以Leica SP2激光共聚焦显微镜观察、摄像并分析.结果EphB4或ephrinB2蛋白与CD34蛋白可共表达于部分间质血管,EphB4和ephrinB2在肿瘤血管的表达主要定位于血管内皮细胞.在瘤组织内肿瘤细胞及两种细胞系,亦可见EphB4或ephrinB2蛋白与GFAP的共表达.SHG-44细胞中EphB4或ephrinB2红色荧光强度强于CHG-5细胞,而CHG-5细胞GFAP绿色荧光强度较之SHG-44细胞则明显增强.结论(1)脑胶质瘤间质可能存在不同免疫表型的血管内皮,提示肿瘤血管的不同属性;(2)EphB4/ephrinB2蛋白表达可能与肿瘤细胞的分化程度有关;(3)双标免疫组化结合激光共聚焦显微术是一种可用于观测肿瘤蛋白共表达的良好方法.
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应用激光共聚焦显微术检测脑星形细胞瘤中EphrinB2及EphB4蛋白的表达
背景与目的:EphrinB2是一种新型促血管生成因子.EphrinB2与其受体EphB4可表达于多种肿瘤细胞,并与肿瘤发生及血管生成有关.本研究旨在了解EphrinB2及EphB4蛋白在脑星形细胞瘤中的表达规律,并初步探讨其可能意义.方法:利用双标免疫荧光分别检测EphB4/EphrinB2蛋白与胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilary acid protem,GFAP)或CD34蛋白在35例脑星形细胞瘤新鲜标本及人脑胶质瘤细胞系CHG-5、SHG-44中的共表达,以Leica SP2激光共聚焦显微镜观察、摄像并分析.结果:EphB4或EphrinB2蛋白与CD34蛋白可在部分间质血管内共表达,定位于血管内皮细胞.在肿瘤细胞及两种细胞系,亦可见EphB4或EphrinB2蛋白与GFAP的共表达.在分化程度较低的SHG-44细胞中,EphB4或EphrinB2平均荧光强度分别为72.48±33.78和96.80±36.98,均强于相应分化较好的CHG-5细胞(56.7±21.7和53.6±18.8),而CHG-5细胞GFAP绿色荧光强度(47.5±16.7)较SHG-44细胞(22.3±15.3)则明显增强.结论:EphB4/EphrinB2蛋白表达可能与肿瘤细胞的分化程度有关.
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人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究
目的 比较人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44的细胞骨架系统成分，以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法 利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布，并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果 除微管和微丝均被染色外，所有细胞均表达Vimentin（波形蛋白），而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似，但两种细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG-44细胞中表达较强，而GFAP在CHG-5细胞中表达较强。丙酮、75%酒精和4%多聚甲醛对微管的固定效果较好；用醛类固定后中间丝(尤其是Vimentin)染色极弱。结论 CHG-5分化程度较SHG-44高，两种细胞系细胞骨架状态的差异可能是二者生物学特性差异的结构基础。
