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mSemcap2对HeLa细胞骨架及福氏志贺菌入侵HeLa细胞的影响
目的研究mSemcap2对HeLa细胞骨架的影响及其对福氏志贺菌(F2a)入侵HeLa细胞的影响,以了解mSemcap2的功能. 方法利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察转染重组质粒的HeLa细胞和野生HeLa细胞系微丝及微管的含量及分布;利用普通光学显微镜及激光共聚焦显微镜观察F2a对2种细胞入侵的差别. 结果转染mSemcap2后的HeLa细胞,其F-actin呈解聚状态,荧光强度减弱,actin在细胞核周集中分布的现象消失;转染mSemcap2的HeLa,其F2a入侵率明显高于野生HeLa细胞. 结论 mSemcap2可以通过细胞骨架的重排来促进细菌对上皮细胞的入侵.
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pEGFP-N1-mSemcap2重组质粒在小鼠体内的分布及对PP结淋巴细胞表型的影响
目的:利用报告系统pEGFP观察pEGFP-N1-mSemcap2重组质粒肌肉注射小鼠后mSemcap2在体内的分布情况,以及对集合淋巴结(PP结)淋巴细胞表型的影响.方法:将pEGFP-N1-mSemcap2重组质粒肌注小鼠后分别在第5,7天收集各组织细胞,利用FACS检测其在组织中的表达;取PP结淋巴细胞进行流式细胞术分析.结果:重组质粒肌注小鼠后在不同时间点从小肠、肺脏、肾脏、肝脏、PP结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结等部位检测到了蛋白表达;小鼠PP结B220+细胞比例增高.结论:肌肉注射重组质粒后mSemcap2在体内的组织分布与其天然分布不尽相同;mSemcap2可以改变PP结淋巴细胞的表型.
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小鼠Semcap2在HeLa细胞的表达及对派伊尔结淋巴细胞的影响
RT-PCR扩增获得mSemcap2全长基因并在真核细胞中表达,对其功能进行初步研究.用DNA重组法构建了真核表达质粒pEGFP-N1-Semcap2.将重组质粒利用电穿孔法转入HeLa细胞中,通过G418进行压力筛选.稳定表达mSemcap2的细胞株与pp结(Peyer's patch)淋巴细胞共培养2 d后通过FACS观察其对淋巴细胞表型的影响.结果是mSemcap2在真核细胞中得到了成功的表达.稳定表达mSemcap2基因的细胞株可改变与之共培养的PP结淋巴细胞的表型,使B220+细胞增多.说明mSemcap2分子可能与免疫系统功能相关;其稳定表达细胞株的获得为深入研究mSemcap2的功能提供了材料.
