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安徽省马鞍山市细菌性痢疾监测与耐药性分析
目的 了解马鞍山市引发痢疾的志贺菌优势菌型及其药物敏感状况,为痢疾临床治疗和预防控制提供依据.方法 采用血清凝集试验、菌种ATB鉴定仪系统生化鉴定,和MIC法(小敏感浓度)对从腹泻患者分离的志贺菌进行药物敏感试验.结果 452份病例样本实验室培养阳性病例67份,其中福氏志贺菌48株,宋内志贺菌19株.马鞍山市流行的优势菌株福氏菌株(B群)48株,有5个血清学亚型和1株不定型,分布如下:F4c 37株;Fla 5株;F2a 2株;F2b 1株;X变种2株.本次监测药敏试验按MIC法进行,药敏试验除氨苄西林(AMP)和复方新诺明(SMZ)耐药以外,其他抗生素:阿莫西林(AMC),头孢噻吩(CFT),头孢噻肟(CTX),庆大霉素(GEN),环丙沙星(CIP),四环素(TBT),利福平(RFA)均敏感.结论 马鞍山市志贺菌感染的优势菌型为福氏4c型,而新型的志贺菌福氏4c型和宋内志贺菌今后应引起足够重视.
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2013年四川省某学校一起细菌性痢疾暴发调查
2013年4月3日,四川省资阳市雁江区迎接镇小学发生一起细菌性痢疾暴发疫情,至4月5日共报告265例病例,其中学生病例264例.学生罹患率为34.4％(264/767).从16例患者粪便中分离出13株宋内志贺菌.调查结果显示暴发的可能原因为4月1日和2日学生午餐中凉拌薯条被污染.
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北京地区2010-2015年宋内志贺菌脉冲场凝胶电泳分型及耐药特征分析
目的 分析北京市2010-2015年分离的259株宋内志贺菌脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型及耐药特征.方法 收集2010-2015年分离到的宋内志贺菌259株,经生化及血清型鉴定后,应用PFGE分型并用小抑菌浓度法(minimal inhibition concentration,MIC)进行12种药物的耐药检测.结果 259株宋内志贺菌经PFGE图谱聚类分析后,发现宋内志贺菌有A、B两个优势簇,2010-2015年A簇菌株所占构成比逐年增高;耐药结果显示257株为耐药菌株,其中245株为多耐药菌株,占所有耐药菌株的95.33％.对头孢曲松(CRO)的耐药性有明显升高.结论 北京地区近年宋内志贺菌有较高的同源性,A簇菌株已经成为目前北京地区宋内志贺菌的优势簇.对三代头孢类药物CRO等耐药性上升可能与临床上大量应用三代头孢药物以及A簇菌株增多有关,多耐药谱的情况也更加复杂,提示应合理使用抗生素.
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宋内志贺菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分子分型分析
目的 通过对宋内志贺菌菌株耐药性及脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型分析,了解上海市浦东新区宋内志贺菌的耐药谱,并建立宋内志贺菌DNA指纹图谱数据库.方法 运用K-B法对34株宋内志贺菌株进行12种抗生素药敏试验,同时对菌株基因组DNA经限制性内切酶XbaⅠ酶切后进行PFGE分子分型,利用BioNumerics Version 5.10分析软件对图谱进行聚类分析.结果 34株宋内志贺菌菌株对链霉素、萘啶酸、甲氧嘧啶、复方新诺明耐药率为100％,对氨苄西林、庆大霉素、四环素耐药率分别为94.1％、91.2％和88.2％,对头孢他啶、头孢吡肟耐药率均为2.9％,对阿莫西林/克拉维酸、氯霉素、氧氟沙星为100％敏感.共获得13个PFGE带型,各带型间相似性系数在90％以上.相同PFGE带型内各菌株间药敏结果完全一致.J16X01.sh011为优势带型,不同时间、不同腹泻监测点之间存在完全相同PFCE条带.结论 宋内志贺菌多重耐药现象日趋严重,浦东新区存在遗传谱紧密相关的宋内志贺菌流行克隆系.
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广东省和广西壮族自治区部分地区2014-2016年宋内志贺菌病原学特征分析
目的 了解2014-2016年广东省和广西壮族自治区部分地区宋内志贺菌暴发分离株及散发分离株的病原学特征.方法 对2014-2016年广东省和广西壮族自治区柳州市分离的14株宋内志贺菌暴发菌株和6株散发菌株进行抗生素敏感性试验和PFGE分析,并选择其中6株代表菌株进行全基因组测序,与NCBI上获取的51株国内外宋内志贺菌的基因组进行遗传进化分析.结果 抗生素敏感性检测结果显示,试验菌株对氨苄西林、四环素、庆大霉素、复方新诺明和萘啶酸有较高的耐药性,对阿奇霉素、氯霉素和亚胺培南完全敏感.PFGE分子分型显示,不同地区不同来源的分离株之间PFGE指纹图谱有很高的相似度(93.2%),基于全基因组的遗传进化分析显示,广东省和广西壮族自治区柳州市的宋内志贺菌分离株同处在一个进化分支上,与来自韩国的菌株亲缘关系为接近.结论 广东省和广西壮族自治区部分地区分离的宋内志贺菌对常用抗生素具有较高的耐药性,对阿奇霉素、氯霉素和亚胺培南有较高的敏感性.试验菌株之间具有相似的PFGE指纹图谱,遗传进化关系相近.
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一起由宋内志贺菌引起的食物中毒调查
2006年3月26日,和田市某酒店发生一起食物中毒事件,经现场卫生学和流行病学调查、临床检查、实验室检验确认为由宋内志贺菌引起的食物中毒.经积极治疗,患者全部痊愈.
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福建宋内志贺菌临床分离株MLVA分型的初步研究
目的 评价多位点可变数目串联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)对福建地区宋内志贺菌的分型能力,为了解宋内志贺菌分子流行病学特征及疫情暴发时病原的溯源提供分析方法和基础数据. 方法 选择8个VNTR(Variable Number of Tandem Repeats)位点对68株临床分离株宋内志贺菌进行PCR扩增和毛细管电泳,利用BioNumerics软件进行聚类分析并构建小生成树(Minimum spanning tree,MST),结合流行病学资料分析分型结果. 结果 68株宋内志贺菌经MLVA分型后遗传关联度在20.647％～100％之间,按照100％的相似水平可分为66个MLVA型,呈遗传多态性,分辨系数为0.9986;有6个优势基因群(G1～G6),表现出时间地区聚集性.在小生成树中,芗城分离株显示不同程度的亲缘关系,形成本土流行的优势克隆群;新罗分离株来源分散,存在少数优势基因簇. 结论 福建临床分离株宋内志贺菌具有基因多态性,MLVA方法对该菌有较好的分型能力,可用于研究菌株间的亲缘关系.
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PCR快速检测粪便中志贺菌属和侵袭性大肠埃希菌IpaH基因及其临床应用
煮沸法从粪便标本中快速抽提出细菌DNA作为聚合酶链反应(PCR)模板,用自行设计的1对特异性引物扩增位于志贺菌和侵袭性大肠埃希菌染色体和质粒DNA上的多拷贝侵袭性质粒抗原(Ipa)H基因,扩增产物为620bp,以常规细菌培养检出率为对照.用20种常见肠道病原菌标准菌株的DNA抽提物进行PCR反应的方法来对PCR反应的特异性进行检验.用DNA序列分析的方法对PCR扩增产物的特异性进行检验.共检测81份门诊粪便标本,细菌培养阳性有27例,福氏志贺菌25株,宋内志贺菌2株,培养阳性率为33.3%,PCR检测阳性有39例,阳性率为48.1%,PCR检测阳性率比常规细菌培养阳性率高14.8%,其中细菌培养阳性的标本PCR检测均为阳性,29例住院病人经过正规治疗1周后,PCR检测12例仍然阳性.统计学分析显示两者之间差异有显著性(P<0.05).标准菌的PCR检测和PCR产物的DNA序列测定结果显示我们设计的PCR方法具有较高的特异性.本研究中采用的PCR方法是一种快速简便、特异性高和敏感性强的检测细菌性痢疾病原菌的现代分子生物学方法.
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宋内志贺菌S7株作为活疫苗受体的研究
目的了解一株自发突变的宋内志贺菌S7株作为活疫苗受体的安全性. 方法应用肠道细菌毒力和侵袭力检测、宋内菌大质粒DNA图谱分析和猴体口服耐受试验对S7株、S7R株进行安全性和稳定性分析. 结果 S7株能很好的表达宋内O抗原,有免疫原性.毒力、侵袭力试验阴性;细菌侵入HeLa细胞的侵袭百分率为4.3%,毒株S512为83.6%;Western blot结果表明无4种侵袭性外膜蛋白(IpaA、B、C、D);质粒稳定性试验表明,连续传代36次,Ⅰ相大质粒仍稳定存在.S7含的Ⅰ相大质粒、猴体口服实验等与宋内毒株S512有明显的区别. 结论宋内菌S7株作为活疫苗受体是安全的,其形态的变化代表抗原的有无,标志明显,易于检测.
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TEM型β内酰胺酶的特征及其研究进展
TEM型β内酰胺酶是目前世界上为流行且种类多的质粒编码丝氨酸蛋白酶,其中TEM-1是革兰阴性菌中常见的β内酰胺酶,约90%对青霉素耐药的大肠埃希菌都产生TEM-1[1].除肠杆菌科菌外,近年来TEM-10在葡萄牙的克吕沃尔菌属[2]、TEM-21在美国的绿脓假单胞菌[3]、TEM-52在韩国的宋内志贺菌[4]、TEM-52、TEM-63、TEM-131在韩国[5]和南非[6]的非伤寒沙门菌中也有报道.截止2006年1月30日,Bush和Jacoby在Lahey网站(http://www.lahy.org/studies/webt.htm)上已公布了150种TEM型β内酰胺酶,其中2000-2006年就发现了70多种.
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2007至2011年江苏地区宋内志贺菌整合子流行及耐药机制的研究
细菌性痢疾（以下简称“菌痢”）流行范围广、传播快、发病率高，是当前全球所面临的严重公共卫生问题，引起菌痢的病原菌为志贺菌。志贺菌属分为痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌和宋内志贺菌4个群，发达国家主要流行宋内志贺菌，而发展中国家多年以福氏志贺菌占优，但近年来宋内志贺菌呈明显增加趋势［1］，在部分地区已超过福氏志贺菌［2］。随着志贺菌多重耐药在全球引起广泛关注，耐药机制的研究已成为热点。本课题组在2006年就针对整合子在铜绿假单胞菌等株菌的流行及介导多重耐药的机制进行了探讨，发现整合子与耐药基因的水平传播密切相关［3］。严重的耐药状况和复杂的耐药机制，给志贺菌感染的临床治疗带来严峻的挑战。本课题组收集江苏地区2007至2011年宋内志贺菌携带整合子类型的检测及整合子介导耐药机制的研究，为中国江苏地区宋内志贺菌感染的临床治疗和感染防控提供依据。
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1 831株宋内志贺菌耐药性调查及其产ESBLs的研究
目的了解分离自腹泻患者的1831株宋内志贺菌的流行趋势及耐药情况,探讨宋内志贺菌多重耐药机制.方法采用志贺菌及沙门菌琼脂培养基培养及K-B法检测14种抗生素的耐药率.多重耐药菌片j纸片确认试验检测产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLq),改良三维试验检测ESBLs和Ampc β内酰胺酶(AmpC β-lactamase,AmpC酶).结果 1831株宋内志贺菌感染腹泻患者中,男女比例为1.25:1.高发季节为7～9月.1～20岁发病人数占总发病人数的71.0%.宋内志贺菌对复方磺胺甲唑、氨苄两林和头孢曲松的耐药率较高,分别达87.7%,23.0%和9.5%.且增高趋势明显;对氟喹诺酮类,头孢吡肟、头孢美唑、氯霉素、磷霉素和庆大霉索的耐药率较低,明显低于头孢曲松、头孢噻肟(P＜0.05).43株多蓖耐药菌均为ESBLs阳性株,未发现产AmpC酶株.结论在北京地区,宋内志贺菌感染腹泻患者发病年龄以青少年为主.其在志贺菌届感染的比例中有增高的趋势,对头孢曲松、头孢噻肟、复方磺胺甲唑、氨苄西林的耐药率较高且有上升趋势.宋内志贺菌耐头孢菌素者以产ESBLs为主.
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MALDI-TOF-MS鉴定宋内志贺菌的初步应用研究
目的 通过扩充基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)的数据库研究宋内志贺菌的鉴定.方法 用提取法进行宋内志贺菌质谱图的建库,建库后分别使用直接涂抹法和提取法对50株宋内志贺菌野生株进行鉴定.结果 提取法的鉴定符合率为100％,而直接涂抹法的鉴定符合率为60％.结论 MALDI-TOF-MS通过数据库的扩充和流程的优化可以鉴定宋内志贺菌到血清学水平,它将会成为临床微生物实验室的诊断和鉴别工具.
关键词： MALDI-TOF-MS 鉴定 宋内志贺菌 -
宋内志贺菌的流行及耐药趋势
感染性腹泻是全球性的公共卫生问题.据WHO公布,全球每年痢疾发病数达1.65亿人次,死亡超过100万人.随着旅游开放的不断增加,食物、水源污染和不可避免的自然灾害的出现,均使痢疾发病难以控制.
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产超广谱β-内酰胺酶宋内志贺菌的检测
目的 了解宋内志贺菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型别.方法 K-B法测定5株宋内志贺菌对常用抗菌药物的耐药性,CLSI推荐的确证试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定,并进行接合试验;采用TEM、SHV、CTX 3种β-内酰胺酶基因通用引物进行PCR扩增和DNA序列分析;同时进行指纹分析脉冲场检测.结果 5株宋内志贺菌对青霉素类、第一、二代头孢菌素、第三代头孢菌素中的头孢噻肟及庆大霉素、磺胺类显著耐药,对喹诺酮类抗菌药物中度敏感,对头孢他啶、四代头孢、阿米卡星、美罗培南敏感;这些菌株的ESBLs基因型均为CTX-M-15,CTX-M-15编码基因型可接合方式发生水平转移;4株菌株的PFGE谱型相同,1株不同.结论 5株宋内志贺菌产生CTX-M-15型ESBLs,引发对多种抗菌药物耐药,并存在克隆传播,需要加强检测.
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blaCTX-M-55介导的宋内志贺菌耐药机制研究
目的：研究 blaCTX-M-55介导的宋内志贺菌＃1083的耐药机制。方法双纸片协同扩散法验证＃1083是否为产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株；PCR 方法鉴定其耐药基因；接合转移实验验证携带 ESBL 基因的质粒是否具有可转移性；VITEK 2仪器检测菌株对多种抗生素的 MIC 值；基因组测序鉴定介导耐药基因转移的移动元件；引物延伸实验鉴定耐药基因转录起始位点。结果＃1083为 blaCTX-M-55介导产 ESBL 的菌株，携带 blaCTX-M-55的耐药质粒可通过接合转移的方式进入受体菌 EC600，并使受体菌具有相应的耐药谱；介导 blaCTX-M-55转移的转座单元为 ISEcp1-blaCTX-M-55-Δorf477，且其上游的插入序列 ISEcp1为耐药基因提供强启动子区，促进耐药基因表达，且此表达为恒定表达，不受抗生素的诱导作用影响。结论质粒携带的 blaCTX-M-55为＃1083的主要耐药基因，插入序列 ISEcp1介导此基因的表达与传播。
关键词： 宋内志贺菌 blaCTX-M-55 耐药基因 转座单元 表达与传播 -
一起由宋内志贺菌引起食物中毒的调查分析
目的 快速查找食物中毒原因,并预防类似食物性疾病的再次发生.方法 分别对2名中毒患者的粪便,3名患者肛拭进行检测.结果 从患者肛拭子及粪便中分离出宋内志贺菌.结论根据临床症状及实验室分析,确定本次食物中毒是食用受到宋内志贺菌污染的食物而引起的细菌性食物中毒.
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某幼儿园食源性细菌性痢疾暴发调查与行政处罚的分析
目的 调查某幼儿园教职工和幼儿发热、腹泻原因和责任,为有效防控疫情和行政处罚提供依据.方法 通过搜索病例,开展危险因素调查,并采集样本进行可疑致病菌的检测,依照现行法律法规实施行政处罚.结果 共搜索到99例病例,其中疑似病例94例,确诊病例5例,流行曲线分析提示为点源暴露.病儿大便样品中检出5份宋内志贺菌,幼儿园厨师肛拭样中检出与病儿同型志贺菌,卫生学调查显示,该厨师在加工午餐食物的过程中存在交叉污染现象.结论 该疫情是一起幼儿园宋内志贺菌型食源性细菌性痢疾暴发.依据《中华人民共和国食品安全法》相关条款对幼儿园实施行政处罚,法律依据充分.
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宋内志贺菌引起一起食源性疾病的调查
2011年10月10日,市卫生局接到报告:乌拉特中旗第二中学52名学生因8日进食早餐后陆续出现发热、腹痛、腹泻等症状,经现场流行病学调查,结合实验室诊断和临床表现,判定为一起宋内志贺菌引起的食源性疾病.此种因外购早餐引起的食源性疾病属我市首例,也是<食品安全法>颁布后因职能不清发生的第一起食源性疾病.现将调查情况报道如下.
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宋内志贺菌食物中毒分离株型别分析
志贺菌传统分型方法主要是生化鉴定、血清学和噬菌体分型等,由于志贺菌的血清型别与部分大肠埃希菌存在交叉凝集,因此,无法体现暴发菌株间的遗传信息.为了探讨用于细菌性传染病监测、传染源追踪、传播途径调查和识别等暴发调查的适宜技术,本研究采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法[1],对1起由宋内志贺菌引起幼儿园食物中毒中的菌株进行了分子流行病学分析.现将结果报告如下.
