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与痢疾志贺菌8型发生交叉凝集的O29:K? EIEC的分离鉴定
肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)所致疾病很象细菌性痢疾,又称志贺样大肠埃希菌,主要侵犯较大儿童和成人,EIEC为国际公认的食物中毒病原菌.
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志贺菌检测技术研究进展
志贺菌引起的细菌性痢疾是目前全球面临的健康问题,该菌属包括4个种:痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌以及宋内氏志贺菌,引起的临床症状有:腹泻、痢疾性黏液脓血便、痉挛性腹痛以及里急后重等,甚至危及生命[1-3].该菌属多见于热带、亚热带地区,流行地区主要在发展中国家的印度、泰国、越南等;而发达国家较少见,其感染发病的患者50%是前往发展中国家的旅行患者[4].因此,目前志贺菌研究工作大多在东南亚和南亚的一些国家和地区开展[1,5].以下就志贺菌检测技术的研究进展作一综述.
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一起幼儿园"痢疾"爆发有关肠侵袭性大肠埃希菌的鉴定
肠侵袭性大肠埃希菌(enteroinvasive Escherichiacoli,EIEC)的生化特性、毒力基因特征和致病性等生物学特性酷似志贺菌,可导致散发或爆发性胃肠炎.其致病特点是侵袭结肠上皮组织,导致感染部位的大肠黏膜出现炎症性反应,引发类似痢疾的临床症状.2003年5月杭州地区某县幼儿园爆发了一起因水源污染引起的园内儿童群体性痢疾样腹泻.我们对从腹泻儿童粪便标本中分离到的10株疑似痢疾志贺菌菌株进行了生化特性、血清型、侵袭性及分子特征等的研究,后鉴定为血清型不明的肠侵袭性大肠埃希菌,现报告如下.
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2007至2011年江苏地区宋内志贺菌整合子流行及耐药机制的研究
细菌性痢疾(以下简称“菌痢”)流行范围广、传播快、发病率高,是当前全球所面临的严重公共卫生问题,引起菌痢的病原菌为志贺菌。志贺菌属分为痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌和宋内志贺菌4个群,发达国家主要流行宋内志贺菌,而发展中国家多年以福氏志贺菌占优,但近年来宋内志贺菌呈明显增加趋势[1],在部分地区已超过福氏志贺菌[2]。随着志贺菌多重耐药在全球引起广泛关注,耐药机制的研究已成为热点。本课题组在2006年就针对整合子在铜绿假单胞菌等株菌的流行及介导多重耐药的机制进行了探讨,发现整合子与耐药基因的水平传播密切相关[3]。严重的耐药状况和复杂的耐药机制,给志贺菌感染的临床治疗带来严峻的挑战。本课题组收集江苏地区2007至2011年宋内志贺菌携带整合子类型的检测及整合子介导耐药机制的研究,为中国江苏地区宋内志贺菌感染的临床治疗和感染防控提供依据。
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痢疾志贺菌7型感染1例报告
1 病例报告患者,男,6岁,2007年8月12日晚8时因发热、腹痛、腹泻10 h人院.入院前共解大便10余次,初为黄稀便,后变为黏液便,无里急后重,无呕吐.查体:T 39.3℃,P 113/min,R 21/min,BP 14.1/7.6 kPa;全腹无压痛、无反跳痛;肠鸣音亢进(10/min).血常规:WBC 13.8×109/L,NE%0.905;便常规可见大量白细胞.患者及其家属否认病前不洁饮食史,否认类似患者接触史.
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水中活的非可培养状态痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究
目的 建立活的非可培养(viable but nonculturable state,VBNC)状态痢疾志贺菌逆转录荧光定量PCR (reverse transcription quantitative PCR,RT-qPCR)检测方法.方法 低温寡营养诱导痢疾志贺菌进入VBNC状态,用平板计数法和荧光显微镜检法确定细菌的可培养数和活菌数,以痢疾志贺菌的志贺毒素基因stx( GenBank:M19437)、侵袭性毒力基因ipaH( GenBank:NC_007607)为目的基因设计引物,提取RNA进行RT-qPCR检测,研究检出限并建立标准曲线,用加标于环境水体中的志贺菌水样进行方法验证.结果 建立处于VBNC状态的痢疾志贺菌RT-qPCR检测技术,检测时间少于6h,复杂环境水体中每500μl水样可培养的痢疾志贺菌检出限为1~5 cfu,VBNC状态的痢疾志贺菌3~25 cfu.结论 该方法检测快速,可实现对VBNC状态志贺菌的检测,可用于复杂水样的直接检测,适用于水体污染调查和应急反应时快速筛查志贺菌.
关键词: 痢疾志贺菌 活的非可培养状态 逆转录荧光定量PCR -
志贺菌59株血清型分布及耐药分析
志贺菌感染所致细菌性痢疾是我国发病率仅次于乙型病毒性肝炎的主要传染病,严重威胁居民的健康[1,2].痢疾志贺菌菌型复杂,容易变迁,病后免疫力不持久,且易发生耐药性变异[3].痢疾志贺菌一直是黑龙江省哈尔滨市感染性腹泻的主要病原菌,为掌握痢疾志贺菌其流行变迁规律,对2000~2006年收集的黑龙江哈尔滨市59株腹泻病例分离株进行了血清型分型及菌株耐药性分析,为制定有效防治措施及临床合理用药提供科学依据.结果报告如下.
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痢疾志贺菌菌型分布和耐药性分析
细菌性痢疾是我国夏秋季常见的肠道传染病。细菌通过食物、水、日常生活接触以及蝇传播,食物及水被污染后可引起爆发流行,人群对本病普遍易感,尤其是儿童感染机会更多。病后不产生稳定持久的免疫力,且各菌型间缺乏交叉免疫,故容易再次感染。本实验室从2008-2012年收集59株志贺菌菌株进行鉴定、血清学分型及药物敏感试验,现将结果分析如下。
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检出痢疾志贺菌Ⅶ型1株
上海市徐汇区疾病预防控制中心在2004年11月10日检出1株痢疾志贺菌Ⅶ型,该菌株在本市未见报道,现就检测过程和结果作一报道.
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隔山消的抗菌作用实验研究
隔山消为白族、彝族民间习用草药,原植物为牦牛儿苗科老鹳草属植物Geranium Strictipes R. Kunth,药用其根,该药在<大理中药资源志>、<中药大辞典>、<全国中草药汇编>等书籍中均有收载.该药民间用于治疗厌食、肠炎、红白痢疾、消化不良等病症[1].有报道其化学成分有没食子酸、原儿茶酸、鞣花酸等[2],而其药理作用的研究未见报道.为了探讨隔山消在民间治疗肠炎、红白痢疾的药理作用基础,我们对隔山消的体内外抗菌作用作初步研究.
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一种可能是新血清型痢疾志贺菌的分子生物与表型特征
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痢疾疫苗研究近展
痢疾是全世界范围内流行的肠道传染病,由志贺菌属细菌引起.由于对志贺菌的致病机制和机体抗感染免疫还不十分了解,目前尚无有效的市售痢疾疫苗.此文讨论了志贺菌的致病机制,对痢疾疫苗研究的近展进行了综述,尤其是亚单位疫苗.
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痢疾志贺菌D15及其L型内毒素致细胞凋亡的研究
目的:探讨痢疾志贺菌及其L型的致病机制.方法:将痢疾志贺菌诱导为稳定L型,分别制备原菌内毒素和L型内毒素,用尾静脉注射法感染小鼠,观察小鼠的发病情况,并对死亡小鼠进行组织学检查.本实验共分三组:原菌内毒素组(A组),L型内毒素组(B组),生理盐水组(C组).结果:A组对小鼠有较强的致病性,以全身中毒症状为主;A和B、C组肝细胞凋亡差异均有显著性(P<0.01),但B、C两组差异无显著性(P>0.05).结论:内毒素可能是痢疾志贺菌致病的主要因素,而其L型,由于失去细胞壁,内毒素丢失,致病能力大大降低.
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细菌性痢疾杆菌种群分布特征及耐药分析
目的:了解本地区细菌性痢疾杆菌种群、血清型分布,并对菌株进行耐药分析,为细菌性痢疾的预防和临床治疗提供指导。方法对2008年5月~2012年12月期间我院感染病科300例确诊细菌性痢疾病例培养的菌株以及药敏试验结果进行回顾性分析。结果300例确诊病例中,男189例;女111例。检测出3个痢疾杆菌种群:福氏志贺菌(B群)290株,宋内氏志贺菌(C群)9株,痢疾志贺菌( A群)1株,分别占96.68%、3.00%和0.33%。福氏志贺菌为优势菌株。检测出福氏痢疾杆菌6个血清型以及7个血清亚型。6个血清型主要为X型变种,其次为II型.其中137例患者进行了药物敏感试验,常见药物的耐药情况:氨苄青霉素耐药率100%,复方新诺明耐药率98.44%,诺氟沙星51.79%,主要敏感抗生素:头孢曲松钠95.59%,头孢哌酮钠89.71%。结论淮北地区3种痢疾杆菌株流行,以福氏痢疾杆菌为优势株,其中福氏痢疾杆菌血清型以X型为主,其次为II型。志贺氏菌对各种抗生素均有不同程度耐药,其中氨苄青霉素和复方新诺明为严重,第三代头孢菌素敏感性较高。
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1起由痢疾志贺菌2型引起的食物中毒调查
2003年7月14日,山东省淄博市临淄区某一中型饭店发生一起食物中毒事件,接到疫情报告后,临淄区卫生防疫站立即组织人员进行调查.经流行病学调查、临床诊断、实验室检验表明是一起由该店厨师自身带菌污染食物引起的,现将调查结果报告如下.
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乌兰察布市人体肠道致病菌菌型分布情况调查
肠道致病菌在人群中的分布有其地域性特点,它与人们的生活环境有着密切的关系,在不同时间段内其菌型分布规律不同,为了了解乌兰察布市人体肠道致病菌菌型分布情况,我们分别于1993年、1994年与2003年、2004两个时间段内对本地区公共卫生从业人员进行肠道致病菌分离与鉴定,发现10年间志贺菌一直占主导地位,但其菌型分布由过去的鲍氏志贺菌占绝对优势变为目前的福氏志贺菌、鲍氏志贺菌和痢疾志贺菌并存的格局.
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志贺菌和侵袭性大肠杆菌(EIEC)的检测与注意点
2001年7月,我们对腹泻患者便样进行分离鉴定志贺菌时,检出一株具有A群痢疾志贺菌3型抗原的侵袭性大肠杆菌(EIEC)O124:K72血清型.现将检测过程和体会叙述如下.
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仙鹤草-马齿苋联用治疗细菌性痢疾的实验研究
目的:观察仙鹤草-马齿苋药对提取物对福氏志贺菌2a、福氏志贺菌4、宋内志贺菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌等致病菌株的联合抗菌作用.方法:采用棋盘试验法测定药对的不同浓度、不同溶媒提取物对各菌株的低抑菌浓度,计算部分抑菌浓度(fractional inhibitory concentration,FIC)指数并判定联合效应,评价仙鹤草-马齿苋的联合抗菌作用.结果:仙鹤草-马齿苋药对水提液联合应用对福氏志贺菌2a、福氏志贺菌4、宋内志贺菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌的FIC指数分别为:0.675、0.486、0.236、0.115、0.236;醇提液联合应用时的FIC指数分别为:0.245、0.200、0.250、0.571、0.300.结论:仙鹤草-马齿苋药对提取液对福氏志贺菌4、宋内志贺菌、痢疾志贺菌菌株均表现为协同作用;其中水提液对福氏志贺菌2 a表现为相加作用,对大肠埃希菌表现为协同作用,而醇提液只对大肠埃希菌表现为相加作用;药对之间配伍均无拮抗作用.
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LAMP和PCR法检测痢疾志贺菌的特异性和灵敏性比较
目的 建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测痢疾志贺菌,并对其特异性、灵敏度与传统PCR进行比较.方法 以痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)为靶序列,设计6条特异性引物(内引物、外引物和环引物各2条),优化LAMP反应体系及反应条件,检测LAMP反应的灵敏度、特异性及模拟样品,同步与PCR进行比较.结果 LAMP法和PCR均能特异性地扩增出志贺菌靶DNA,而其他非志贺菌均未扩增出特有条带.检测细菌纯培养物和模拟食品的灵敏度LAMP法分别为5.3×101 cfu/ml、6.8× 101 cfu/ml,PCR法分别为5.3× 102 cfu/ml和6.8× 102 cfu/ml.结论 利用LAMP技术,可快速、灵敏、简便地检测痢疾志贺菌,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望发展成为快速检测痢疾志贺菌的有效手段.
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LAMP技术用于志贺菌的检测
目的 依据环介导的恒等温扩增技术,建立一种新型的快速、准确、简单并方便检测食物中志贺菌的方法,为全面防治志贺菌导致的食物中毒提供依据.方法 本实验针志贺菌侵袭性质粒抗原ipaH基因的6个区域设计6条引物,利用链置换DNA聚合酶,在65℃左右的条件下反应60 min,短时间内快速完成核酸的扩增.反应结束后依据扩增副产物产生的焦磷酸镁沉淀的浊度,或使用SYBR Green Ⅰ颜色反应,判断ipaH是否为阳性,同时通过,琼脂糖凝胶电泳检测判断扩增产物的大小.结果 13例标准菌中,只有痢疾志贺菌LAMP产物呈混浊,加入SYBR Green Ⅰ显绿色且琼脂糖凝胶电泳有梯状亮带;痢疾志贺菌稀释106倍(约5 CFU/ml)之后仍然可以被LAMP检出而普通PCR检测不到.结论 LAMP技术可以快速、准确、特异性的检出志贺菌且方法简单、方便、灵敏度高于PCR,适合于室外现场使用.
关键词: 环介导恒等温扩增技术 PCR 痢疾志贺菌 检测体系