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152例细菌型与L型培养结果的分析
目的了解细菌常规分布情况,为临床用药提供科学依据.方法对送检标本152份在进行普通细菌培养的同时增加L型的培养.结果总阳性71例(46.8%).其中细菌42例(27.7%);L型阳性58例(38.2%)(p<0.01).结论为提高培养的阳性分离率,有必要增加L型培养.
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胃癌患者幽门螺杆菌L型感染的临床研究
目的:探讨胃癌与幽门螺杆菌L型(Hp-L)感染的关系.方法:取186例胃癌患者胃窦和胃体黏膜组织常规切片后经革兰氏染色和免疫组化染色镜检Hp-L型细菌.结果:Hp-L型检出率为56.45%(105/186),革兰染色和免疫组化染色法检出率分别为60.22%(112/186)和58.60%(109/186),差异无显著性(x2=0.1,P＞0.05),男女患者阳性率依次为69.16%(74/107)和39.24%(31/79),前者明显高于后者(x2=16.55,P＜0.01).30岁以下、30岁～、40岁～、50岁～患者Hp-L型阳性率分别为33.33%(4/12)、41.38%(12/29)、52.73%(29/55)、66.67%(60/90),差异有显著性(x2=9.39,P＜0.05).Hp-L型阳性率在肠型胃癌患者中为75.42%(89/118),明显高于弥漫型患者为23.53%(x2=47.26,P＜0.01);胃窦部胃癌患者(64.71%)高于贲门部患者(41.79%).结论:GC患者Hp-L型感染率较高,且男性高于女性.Hp-L型检出率随年龄增长而增高,且主要作用于胃窦部,是引起肠型胃癌的重要致病因子之一.
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大鼠在体心肌缺血再灌注损伤组织间液钙离子动态与胞膜L型电压依赖性钙通道表达
目的 检测大鼠心肌在体缺血再灌注损伤(IR)组织间液钙离子浓度,比较IR前后心肌胞膜L型电压依赖性钙通道(LVDCC)mRNA表达水平,探讨其对钙超载的意义.方法 12只SD大鼠随机分为IR组和对照组,以微透析技术连续收集心肌组织间液标本,原子吸收光谱法检测钙离子浓度.IR组通过结扎(20 min)后松解(60 min)前降支造成心肌缺血再灌注,结束时收取左心室缺血区和右心室心肌行LVDCC mRNA定量PCR检测,实验前后采血检测血钙和肌钙蛋白T(cTnT).对照组免除结扎松解前降支,其余操作与IR组一致.结果 IR组血浆cTnT浓度显著升高[对照组vs.IR组:(1.62±0.60)ng/ml vs.(4.29±2.22)ng/ml,P=0.031].IR组心肌组织间液钙离子浓度在缺血期无变化,再灌注20 min显著下降,心肌析出液钙离子浓度与对照组存在显著性差异[对照组vs.IR组:(224.25±31.75)μmol/L vs.(136.25±39.50)μmol/L,P=0.031].血浆钙离子浓度实验前后无显著差异.心肌细胞膜LVDCC mRNA表达水平在组间和组内均无显著差异.结论 大鼠在体心肌缺血20 min再灌注60 min,组织间液钙离子浓度在缺血期无明显变化,再灌注期迅速下降,这种变化趋势与胞膜LVDCC表达无关.
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替米沙坦对胰岛素抵抗大鼠心房肌L型钙通道α1C亚单位表达的影响
目的：探讨胰岛素抵抗（IR）大鼠心房肌L型钙通道α1C亚单位（Cav1.2）的表达水平以及替米沙坦对其表达的影响。方法32只IR OLETF大鼠随机分为2组，每组16只：IR模型组（M）；IR+替米沙坦（5 mg·kg-1·d-1）组（T）。LETO大鼠16只为对照组（N）。20周后测定3组大鼠的血清胰岛素（FINS）、空腹血糖（FBG）、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；用Western blot技术检测心房肌中Cav1.2的表达。结果与N组相比，M组FBG、TC、TG、LDL-C、FINS及HOMA-IR水平明显增高（P＜0.05），而HDL-C水平明显降低（P＜0.05），心房肌中Cav1.2表达水平明显降低（P＜0.05）；与M组相比，T组FBG、TC、TG、LDL-C、FINS及HOMA-IR水平明显降低（P＜0.05），而HDL-C水平无明显变化（P＝0.384），心房肌中Cav1.2表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 IR大鼠心房肌中Cav1.2表达降低；经替米沙坦干预后，IR大鼠心房肌中Cav1.2的表达水平回升。
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射频消融术改变心房颤动患者外周血微小RNA表达谱
目的 探讨心房颤动(房颤)射频消融术是否通过对调控离子通道蛋白的微小RNA(microRNA,miRNA)的影响,实现心房离子流再平衡和逆重构,并试图发现有价值的调控miRNA.方法 选择行房颤射频消融术患者(阵发性、持续性和永久性房颤各10例)30例作为房颤组,健康体检者10例作为正常对照组.正常对照组体检时,房颤组射频消融术前和术后3个月分别取外周血,使用miRNA芯片(miRNA v18.0)进行全基因组miRNA表达谱微阵列分析,2组miRNA表达比值≥1.5倍为显著上调,实时定量PCR验证miRNA表达差异结果,并通过mirbase、miranda、targetscan数据库进行靶基因分析.结果 与正常对照组比较,房颤组射频消融术前主要参与离子通道蛋白调控的21个miRNA差异表达均有显著意义(P＜0.01);房颤组术后3个月与自身术前比较,上述21个miRNA表达亦有明显差异(P＜0.01).其中miR-1266等5个miRNA术前表达上调≥1.5倍,术后明显下调≥10倍;仅miR-3664-5p术前下调8.88倍,术后进一步下降46.06倍;其余15个miRNA均术前表达下调,术后显著上调.结论 房颤射频消融术通过影响调控离子通道蛋白的主要miRNA,实现了心房离子流逆重构.调控多个离子流的miR-1266,miR-377-5p,miR-101-5p和miR-151-3p有望成为房颤治疗新靶点.
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咪达普利对舒张性心力衰竭大鼠心房肌细胞L型钙通道电流及相关基因蛋白表达的影响
目的 探讨咪达普利对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠心房肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)和ICa-L相关基因Cav1.2蛋白表达的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组、DHF组、低、中、高剂量组,每组6只.后4组采用腹主动脉缩窄建立DHF模型,对照组和DHF组予等量生理盐水,低、中、高剂量组依次给予咪达普利1.5、3和6 mg/(kg·d)干预.各组干预4周后,采用心脏超声检测心功能,急性酶解法获得单个大鼠心房肌细胞和标准全细胞膜片钳技术记录通道电流,凝胶电泳法记录心房肌细胞ICa-L相关基因Cav1.2的蛋白表达.结果 与对照组比较,DHF组大鼠心房肌细胞ICa-L电流密度峰值和Cav1.2蛋白表达明显减少;与DHF组比较,低、中、高剂量组大鼠心房肌细胞ICa-L峰值电流密度和Cav1.2蛋白表达明显增加,该作用随着咪达普利剂量增加而增加.结论 咪达普利明显抑制DHF大鼠心房肌ICa-L下调,此作用与增加心房肌Cav1.2蛋白表达水平有关.
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β3肾上腺素能受体通过微小RNA对慢性心力衰竭大鼠左心房肌L型钙离子通道的调控
目的 探讨β3肾上腺素能受体(β3-AR)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心房肌L型Ca2+通道亚单位α2δ-2编码基因CACNA2D2的调控是否与微小RNA(miRNA)-1及miRNA-328存在关联.方法 22只雄性Wistar大鼠随机选6只为正常对照组(NC组),另16只采用皮下注射异丙肾上腺素建立CHF动物模型,将存活的12只大鼠再随机分为CHF组6只和BRL组(在大鼠尾静脉注射β3-AR特异性激动剂BRL-37344)6只.采用超声心动图检测大鼠左心房内径(LAD)、左心房射血分数(LAEF)及LVEF.采用苏木精-伊红染色检测大鼠左心房肌病理学变化.采用实时荧光定量PCR检测大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2以及miRNA-1、miRNA-328表达水平.结果 BRL组大鼠LAD显著大于NC组和CHF组[(4.42±0.15)mm vs (3.50±0.21)mm和(4.09±0.17)mm,P＜0.01];BRL组LAEF显著低于NC组和CHF组[(34.91±1.51)％ vs (59.89±3.17)％和(40.09±0.95)％,P＜0.01].与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌细胞水肿进一步加重,可见明显肥大细胞等病理学改变更显著.与NC组比较,CHF组大鼠左心房肌ββ3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达上调(P＜0.01);与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达进一步上调(P＜0.01).miRNA-1、miRNA-328、CACNA2D2与β3-AR表达呈正相关(r=0.870、0.904、0.911,P＜0.01);CACNA2D2与miRNA-1、miRNA-328表达呈正相关(r =0.880、0.954,P＜0.01).结论 β3-AR对左心房CACNA2D2的正性调控可能与miRNA-1、miRNA-328存在关联.
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L型钙离子通道蛋白α1 D亚基与老年性耳聋关系的研究
目的 研究L型钙离子通道蛋白α1D亚基(Cav1.3)在老年性耳聋小鼠耳蜗组织中的表达和意义. 方法 应用听性脑干反应(ABR)分别检测4、14、24、48周龄的C57BL/6小鼠的听力,苏木素-伊红(HE)染色观察内耳形态的变化.免疫荧光方法观察Cav1.3在内耳组织中的分布,同时采用反转录聚合酶链反应(RT PCR)检测其基因CACNA1D在内耳组织的mRNA表达. 结果 Cav1.3主要分布在小鼠耳蜗内外毛细胞、螺旋神经节、螺旋韧带、血管纹、螺旋(板)缘细胞.与4周龄小鼠比较,[短声(27.08±9.19)dB SPL、4 KHz(23.79±13.31)dB SPL、8 KHz(18.83±12.18)dB SPL],14、24、48周龄ABR反应阈值提高(F=95.86,P＜0.05);48周龄小鼠ABR反应阈值[短声(87.81±8.36)dB SPL、4 KHz(85.63±9.88)dB SPL、8 KHz(79.50±9.83) dB SPL],较4、14、24周龄大鼠均提高(F=115.97,P＜0.01).随着鼠龄的增长,内耳毛细胞和螺旋神经节细胞逐渐出现缺失;血管纹和螺旋韧带也呈现萎缩;Cav1.3表达含量逐渐减少,4周218.94±11.29,14周184.67±11.92,24周148.18±8.35与48周98.04±4.52比较,差异有统计学意义(F=119.17,P＜0.01).结论 老年性耳聋小鼠Cav1.3钙离子通道蛋白表达含量随年龄增长而减少,其功能的异常和缺失可能在老年性耳聋的发病中起一定作用.
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胰淀素对大鼠胰岛β细胞电压门控L-型钙通道的影响
目的 观察胰淀素对大鼠胰岛β细胞电压门控L-型钙通道的影响.方法 用全细胞膜片钳技术观察胰淀素作用前后胰岛β细胞电压门控L-型钙通道门控特性、电流变化.结果 在葡萄糖5.5 mmol/L条件下,大鼠胰岛β细胞L-型钙通道电流约在-40 mV激活,+20 mV左右达高峰,峰值约为-120 pA,胰岛素分泌量为(0.76±0.12)μg/L;16.7 mmol/L葡萄糖刺激下峰电流电压左移、峰电流达-140 pA左右,胰岛素分泌量为(1.78±0.13)μg/L.用0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度胰淀素分别孵育胰岛β细胞,在5.5、16.7 mmoL/L葡萄糖条件下,0.5、1.0μmol/L胰淀素浓度的峰电位激活电压、电流、胰岛素分泌与对照组相比,差异均无统计学意义,在5.5 mol/L葡萄糖条件下,5.0、10.0μmol/L胰淀素浓度的激活电雎增加为-30 mV,峰电流分别减小至-80 pA、-60 pA左右,胰岛素分泌量分别降低至(0.49±0.11)、(0.36±0.12)μg/L;在16.7 mmol/L葡萄糖条件下,激活电压由-40 mV增加到-30 mV,峰电流分别减小至-80 pA、-40 pA,胰岛素分泌量分别降低至(1.20±0.13)、(0.89±0.14)μg/L,与对照组相比差异具有统计学意义.结论 葡萄糖刺激胰岛β细胞电压门控L-型钙通道开放与胰岛素分泌同步,胰淀素抑制胰岛β细胞电压门控L-型钙通道开放和抑制胰岛素分泌作用同步并与其作用浓度正相关.
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增龄引起犬心房L型电压依赖型钙通道离子重构的分子机制
目的 探讨增龄导致犬心房L型电压依赖型钙通道离子重构的分子机制.方法 采用全细胞膜片钳技术记录犬左心房肌细胞L型电压依赖型钙通道动作电位时限(APD90)、动作电位平台期电压和L型钙离子电流(ICa-L)特性.应用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定犬左心耳L型电压依赖型钙通道α1亚单位(CaV1.2)、钙离子释放通道兰尼碱受体(RYR2)、肌浆网钙调控-Ca2+ ATP酶基因(SERCA2)、钙激活蛋白酶-Ⅰ(Calpain-Ⅰ)、磷酸受钠蛋白(PLN1)等的mRNA表达,用Western blot检测蛋白表达.结果 老年犬与成年犬比较,心房肌细胞L型电压依赖型钙通道APD90较长[(340.5±10.1)ms 比(320.0±7.9) ms,P＜0.05]；动作电位平台期电压较低[(-9.5±1.7)mV比(-6.4±1.1)mV,P＜0.05]；ICa-L电流密度较低[(-14.04±0.82)pA/pF比(-8.11±0.54)pA/pF,P＜0.05].老年犬与成年犬比较,CaV1.2基因表达明显下调(0.90±0.35比2.38±0.40,P＜0.05),RYR2基因表达明显上调(4.39±4.68比1.49±1.69,P＜0.05),两组犬SERCA2、Calpain-Ⅰ、PLN1基因表达差异无统计学意义；CaV1.2蛋白表达明显下调(0.13±0.10比0.29±0.12,P＜0.05),RYR2蛋白明显上调(0.18±0.21比0.08±0.36,P＜0.05),两组犬SERCA2、Calpain-Ⅰ、PLN1蛋白表达无明显改变.结论 增龄导致犬心房肌细胞钙通道CaV1.2和RYR2基因和蛋白表达的改变是L型电压依赖型钙通道离子重构的分子机制,可能是老年相关性心房颤动的潜在机制之一.
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辛伐他汀对大鼠心肌肥厚的防治作用及其与钙通道的关系
目的 探讨辛伐他汀对心肌肥厚的防治作用及其与钙通道活动的关系.方法 采用腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚动物模型.尾动脉无创测量大鼠收缩压.称量心脏重量/体重(HW/BW)、左心室重量/体重(LVW/BW)比值.采用超声心动图检测动物心脏构型及射血功能.应用RT-PCR和Western blot分别检测心肌L-型钙通道亚单位Cav1.2(α,C)、T-型钙通道亚单位Cav3.1 (α1G)、Cav3.2(α1H)mRNA及其蛋白表达的变化.结果 (1)腹主动脉缩窄+辛伐他汀组(AAC+SIM组)大鼠收缩压130 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)明显低于腹主动脉缩窄组(AAC组)189mm Hg,P<0.05.HW/BW比值AAC+SIM组3.37 mg/g明显低于AAC组3.94 mg/g,P<0.01.LVW/BW比值AAC+SIM组2.33 mg/g明显低于AAC组2.95 mg/g,P<0.01.室间隔厚度AAC+SIM组2.01 mm明显低于AAC组2.31 mm,P<0.01.左心室后壁厚度AAC+SIM组1.89 mm明显低于AAC组2.19 mm,P<0.01.(2)AAC+SIM组大鼠心肌T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白表达均显著低于AAC组,P均<0.01,但L-型钙通道亚单位α1 C mRNA和蛋白表达两组间比较差异无统计学意义.结论 辛伐他汀对腹主动脉缩窄所致的心肌肥厚具有明显的防治作用,其作用机制可能与其抑制T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白的重新再表达有关,但与L-型钙通道亚单位α1C mRNA和蛋白表达无关.
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肝炎病毒诱导的抗β1肾上腺素能受体抗体致钙电流和胞内钙增加的研究
目的研究肝炎病毒诱导的抗β1肾上腺素能受体抗体对心肌细胞L型钙电流和胞内钙的影响.方法利用膜片钳和激光共聚焦技术观察抗β1,肾上腺素能受体抗体对豚鼠心肌细胞动作电位、L型钙电流和胞内钙的影响以及美托洛尔的药物干预情况.结果1:80抗β1肾上腺素能受体抗体分别使APD20、APD50和APD90延长39.2%、29.1%和15.2%.1:80、1:100和1:120抗β1肾上腺素能受体抗体分别使L型钙电流峰值和胞内钙荧光强度增加(55.87±4.39)%和(140.00±13.30)%、(46.33±5.01)%和(1074.00±14.10)%、(29.29±4.97)%和(57.00±5.96)%,呈现浓度依赖性.该抗体致胞内钙增加与钙内流和肌浆网钙释放有关.经1 μmol/L美托洛尔预先阻断β1肾上腺素能受体后,1:80抗β1肾上腺素能受体抗体仅能使APD20、APD50和APD90延长7.2%、5.3%和4.1%,L型钙电流峰值和胞内钙荧光强度增加(6.81±1.61)%和(10.97±2.55)%.结论肝炎病毒诱导的抗β1肾上腺素能受体抗体所介导的心肌细胞L型钙电流和胞内钙增加可能是其导致心律失常和(或)心肌损伤的机制之一.
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卡维地洛对氧自由基所致心肌细胞L型钙电流异常的保护作用
目的研究卡维地洛对氧自由基引起的豚鼠单个心室肌细胞L型钙电流异常的保护作用.方法采用全细胞膜片钳技术,观察0.5 mmol/L的H2O2引起单个豚鼠心室肌细胞L型钙电流改变及预先应用0.5 μmol/L卡维地洛对这种改变的影响. 结果 0.5 μmol/L卡维地洛对正常豚鼠心室肌细胞L型钙电流及其通道动力学影响不显著.0.5 mmol/L H2O2作用下, 豚鼠心室肌细胞L型钙电流峰值明显降低(P<0.001),电流-电压曲线上移,通道稳态激活曲线和稳态失活曲线左移,通道恢复时间明显延长(P<0.001).预先给予 0.5 μmol/L卡维地洛,明显减轻H2O2对L型钙电流的抑制作用(P<0.01);并且可减轻H2O2对L型钙通道动力学的异常影响. 结论卡维地洛可减轻氧化应激对心肌细胞L型钙电流的影响,这可能是其治疗心力衰竭的机制之一.
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不同药物对晚孕鼠子宫平滑肌及左心室心肌细胞电压依赖性钙通道-L亚型mRNA表达的影响
目的探讨缩宫素、米索前列醇及尼莫地平3种药物对晚孕鼠子宫平滑肌与左心室心肌细胞电压依赖性钙通道-L亚型( VDCC-L) mRNA表达的影响.方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别测定自然分娩鼠(自然分娩组)、缩宫素诱导分娩鼠(缩宫素组)、米索前列醇诱导分娩鼠(米索前列醇组)及尼莫地平作用48 h后分娩鼠(尼莫地平组)的子宫平滑肌与左心室心肌细胞VDCC-L α1、β2亚单位mRNA的表达.结果 (1)自然分娩组、缩宫素组、米索前列醇组及尼莫地平组孕鼠的子宫平滑肌细胞VDCC-L α1 mRNA的相对表达量依次为0.800 3±0.165 9、0.863 1±0.192 1 、0.812 0±0.173 4 及0.742 6±0.182 6,缩宫素组与米索前列醇组虽高于自然分娩组及尼莫地平组,但4组之间比较,差异均无显著性(P＞0.05);VDCC-L β2 mRNA的相对表达量依次为0.646 9±0.130 4、0.506 2±0.147 2、0.500 5±0.135 6及0.492 9±0.127 6,自然分娩组虽高于其他用药的3组,但差异无显著性(P＞0.05).(2)自然分娩组、缩宫素组、米索前列醇组及尼莫地平组孕鼠的左心室心肌细胞VDCC-L α1 mRNA相对表达量依次为0.662 5±0.180 1、0.636 5±0.157 8、0.591 7±0.141 3及0.542 6±0.143 6;VDCC-L β2 mRNA相对表达量依次为0.670 2±0.140 5、0.606 2±0.143 9、0.591 4±0.121 9及0.585 2±0.131 0.自然分娩组VDCC-L*#α1、β2mRNA的相对表达量均高于其他用药的3组,但其差异均无显著性(P＞0.05).结论缩宫素、米索前列醇和尼莫地平组,通过调节孕鼠子宫平滑肌VDCC-L α1、β2亚单位mRNA的表达诱发或延迟分娩,且对分娩期正常孕鼠的心脏功能状态无明显不良影响.VDCC-L可能是各种内外因素诱发分娩的共同通路.
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胃癌组织中核不均一核糖核蛋白K的表达及其与幽门螺杆菌L型感染的关系
目的 探讨人胃癌组织中核不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)的表达及其与幽门螺杆菌L型(Hp-L)感染的关系.方法 应用革兰氏染色和免疫组化法检测100例胃癌组织、50例癌旁组织及30例正常组织的Hp-L型感染情况,应用免疫组化Elivision法检测hnRNPK蛋白的表达,原位杂交方法检测hnRNPK mRNA的表达.结果 胃癌组、癌旁组和正常组Hp-L型感染的阳性率分别为67.0％、58.0％和23.3％,胃癌组与癌旁组差异无统计学意义(P＞0.05),但与正常组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌组hnRNPK蛋白和mRNA的表达阳性率分别为82.0％和86.0％,均明显高于癌旁组和正常组(均P＜0.05).胃癌组织中hnRNPK蛋白的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移、临床分期有关(均P＜0.05).胃癌组Hp-L型感染阳性者的hnRNPK蛋白表达阳性率为92.5％,高于Hp-L型感染阴性组(60.6％,P＜0.05).相关分析表明,胃癌组hnRNPK蛋白表达与Hp-L型感染呈正相关(r=0.391,P＜0.01).结论 胃癌组织中hnRNPK高表达,Hp-L型感染可促进hnRNPK的表达,两者在胃癌发生、发展过程中可能具有协同作用.
关键词： 胃肿瘤 核不均一核糖核蛋白K 幽门螺杆菌 L型 -
L-钙离子通道参与大鼠黑质致密部多巴胺能神经元暴发式放电模式产生和维持的机制
目的 研究钙离子通道对大鼠黑质致密部(SNc)多巴胺能神经元暴发式放电模式产生和维持的机制.方法 应用全细胞膜片钳的方法,施加N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导神经元放电模式转变,观察并记录其相应放电模式的特点,记录并比较加入10 μmol/L NMDA前后全钙离子流和L-钙电流的变化情况,通过外液加入河豚毒素、维拉帕米、氯化镍后,分析暴发式放电产生和维持与L-钙通道激活之间的联系.结果 加入NMDA后神经元放电模式转变为暴发式放电,该暴发式放电为平台电位及其上的动作电位构成;L-钙通道电流密度峰值在加入NMDA后明显增加,从(2.86±0.26) pA/pF(n =28)增加到(3.75 ±0.18) pA/pF(n =34),差异具有统计学意义(t=7.52,P=0.0028);采用L-钙阻断剂维拉帕米后暴发式放电中的平台电位几乎消失.结论 NMDA能够诱导SNc多巴胺能神经元转变为暴发式放电模式,而L-钙通道参与暴发式放电产生和维持的过程.
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水杨酸钠对大鼠下丘神经元L-型钙通道的影响
目的 了解L-型钙通道在水杨酸钠导致耳鸣的机制中所起的作用.方法 利用全细胞膜片钳技术研究水杨酸钠对急性分离的大鼠下丘神经元L-型钙通道的影响.结果 水杨酸钠抑制L-型钙通道电流(ICa,L),且具有浓度依赖性.水杨酸钠抑制ICa,L的半抑制浓度值为1.99 mmol/L.水杨酸钠不影响ICa,L的电导-电压曲线和稳态激活曲线,水杨酸钠将ICa,L的稳态失活曲线向超极化方向移动8 mV,并且延长ICa,L失活后恢复的时间.结论 水杨酸钠对ICa,L的抑制作用,可能通过减少下丘部位γ-氨基丁酸的释放,从而导致耳鸣.
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豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞乙酰胆碱敏感性大电导钙依赖性钾通道与L型钙通道共存
目的 研究豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)敏感性大电导钙依赖性钾通道(big conductance,calcium-dependent potassium channel,BK)激活过程中的钙离子内流机制.方法 健康杂色豚鼠52只,断头后取出前庭终器,经胶原酶IA消化后获取Ⅱ型前庭毛细胞.采用全细胞膜片钳技术检测新鲜单离的Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性BK电流对细胞外钙通道阻断剂和激动剂的敏感性.结果 ①细胞外ACh激活一缓慢持久的外向性电流,其反转电位为(-70.5±10.6)mV(-x±s,下同,n=10);-50 mV钳制电压下,100 μmol/L ACh激活电流的幅值为(267±106)pA(n=11).②ACh-敏感性钾电流对细胞外IBTX(iberiotoxin,200 nmol/L)敏感,而细胞外蜂毒明肽(apamin,1 μmol/L)对ACh-敏感性钾电流幅值无抑制作用.③ACh-敏感性BK对细胞外钙通道阻断剂NiCl2敏感,可被细胞外钙通道阻断剂CdCl2强力阻断.NiCl2和CdCl2对ACh-敏感性BK的半数抑制浓度分别为(135.5±18.5)μmol/L(n=7)和(23.4±2.6)μmol/L(n=7).④L型钙通道激动剂(-)-Bay-K 8644激活Ⅱ型前庭毛细胞产生一种与ACh-敏感性BK类似的外向性电流,并能被IBTX强力阻断.结论 Ⅱ型前庭毛细胞中ACh-敏感性BK与细胞膜L型钙通道共存,可能具有重要的生理学作用和意义.
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硝普钠对豚鼠耳蜗外毛细胞全细胞钙电流作用的实验研究
目的探讨一氧化氮供体--硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对豚鼠单离耳蜗外毛细胞钙电流的影响及作用机制.方法利用急性分离的豚鼠耳蜗外毛细胞,在全细胞膜片钳电压钳记录技术下,通过分离离子电流成分的方法,记录豚鼠耳蜗外毛细胞全细胞钙电流.结果 SNP对内向钙电流有抑制作用,在钳制电位为-60 mV,刺激电压为+10 mV的条件下,10 mmol/L的SNP能抑制(61.12±1.99)%的内向钙电流(±s,n=5).从5～8个细胞得到的量效关系曲线中,其半数作用浓度为1.9 mmol/L,大抑制浓度为100 mmol/L,斜率为0.98.作用的机制为SNP可选择性地阻断外毛细胞膜上的L-型钙通道(n=6).结论 SNP作为一氧化氮的一种供体,能影响豚鼠耳蜗外毛细胞的生理功能,是通过阻断外毛细胞L-型钙通道电流的内流来实现的.
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小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位分析
目的分析小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位的类型.方法手术分离新生小鼠的耳蜗螺旋神经节细胞进行培养,24 h后提取RNA.逆转录后获得螺旋神经节细胞cDNA,根据电压依赖性钙通道7种亚单位序列设计的引物进行聚合酶链反应扩增,通过聚合酶链反应结果分析和DNA测序确定螺旋神经节细胞表达的亚单位类型.结果逆转录聚合酶链反应扩增出α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的片段,测序进一步证明小鼠螺旋神经节细胞中有这几种亚单位的存在.结论小鼠螺旋神经节细胞中有α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的表达.α1D和α1E亚单位的共表达证明在哺乳动物的螺旋神经节细胞中有L型和R型电压依赖性钙通道.
