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胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白成核活性及糖链结构的比较
目的 比较胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白促成核活性,并分析其糖链结构特点.方法 进行胆固醇结晶生长试验,检测胆石症病人和正常人相对分子质量为33 500的泡蛋白成核时间,并计算其促成核活性.采用HRP凝集素探针介导的Western-Blot印迹法分析不同来源泡蛋白糖链的结构特点.结果 胆石症病人来源的33 500泡蛋白具有明显的促成核活性,其平均成核时间为(3.75±0.66)d,成核活性为0.303±0.075;而正常人来源者则仅具较弱的促成核活性,平均成核时间为(8.38±0.86)d,成核活性为0.677±0.086,两者比较,差异显著(P＜0.05).胆石症病人来源的33 500泡蛋白DSA(+)、ConA(-),属于复杂型多天线聚糖;而正常人来源者为ConA(+)、DSA(-)的二天线糖链.结论 胆石症病人来源的33 500泡蛋白较正常人来源者具有更强的促成核活性,两者糖链结构特点亦有明显不同,提示泡蛋白促成核活性的改变可能由于其糖链结构特点的变化引起.
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胆汁泡蛋白促成核作用及其主体活性成分的分析
目的分析33.5×103泡蛋白促成核活性以及多肽、糖链改变对其活性的影响. 方法制备人工模拟胆汁,在偏光显微镜下观察结晶成核生长过程,计算成核活性;酶法水解蛋白多肽与糖链结构,通过结晶生长试验检测33.5 ×103泡蛋白促结晶生长作用以及糖链水解、多肽降解产物的活性改变. 结果 33.5 ×103泡蛋白具有强促成核活性,成核活性强达0.310,在不同模拟胆汁体系中,成核活性基本相同;其结晶生长试验活性指数It、Ig、Ic分别为0.57、1.52及1.63(P<0.05).糖苷酶切、肽链酶解后其成核活性均几乎丧失. 结论 33.5×103泡蛋白可能参与成石过程,其中多肽、糖链调节其成核活性.
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胆汁泡相与微胶粒相的蛋白质表达谱对比观察
目的 采用比较蛋白质组学技术研究胆固醇结石患者胆囊汁汁的胆汁泡相与微胶粒相的蛋白质表达谱的差异,为探索胆石成因提供实验依据.方法 密度梯度超速离心法制备胆汁泡相和微胶粒相,提取蛋白,构建相应的蛋白质表达谱,ImageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息,质谱鉴定差异表达蛋白.结果 胆汁泡相与微胶粒相总蛋门浓度分别为(1.5358 4±0.0682)mg/ml、(7.1222 4±0.2022)mg/ml(P<0.01).两组组内蛋白质平均匹配点数分别为120 4±24和198 4±37,组间72 4±16个蛋白质点相互匹配,匹配率为45.30%.胆汁泡相与微胶粒相成功鉴定出差异蛋白质点8个,泡相中6个点表达上调,2个点表达下调.视黄醇结合蛋白(RBP)和白蛋白(HSA)丰度差异为免疫印迹法证实.结论 初步建立了胆同醇结石患者胆囊胆汁的胆汁泡相和微胶粒相蛋白表达谱,分析、鉴定了差异蛋白点,为筛选胆固醇结石形成关键调控子提供依据.
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凝集素染色分析胆汁成核活性蛋白的研究
目的探讨促成核蛋白中糖链的结构与类型及其在胆石形成中的作用.方法凝集素探针介导的点印迹法分析相对分子质量为33 500的泡蛋白糖链组成与结构、筛选出强结合凝集素,并借助透射电镜观察泡蛋白参与模拟胆汁泡聚集、融合的微观过程.通过结晶生长试验检测33 500泡蛋白及其脱糖基产物的促成核活性.结果33 500泡蛋白糖链为DSA强结合、ConA(-),属复杂型多天线聚糖.HRP-DSA标记泡蛋白糖链可直接反映泡蛋白促胆汁泡聚集、融合及胆固醇单水结晶析出的动态过程.33 500泡蛋白具有明显的促成核活性,其成核时间指数、结晶生长速度指数及结晶终浓度指数分别为0.57,1.52及1.63(P<0.05),脱糖基后其成核活性几乎完全丧失.结论糖链影响33 500泡蛋白促成核活性,提示其可能参与成核效应蛋白的致石作用过程.
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视黄醇结合蛋白的促胆固醇成核效应
目的 检测视黄醇结合蛋白(RBP)在体外模拟胆汁体系中的促胆固醇成核作用,观察胆固醇成核及结晶过程.方法 构建Small和综合模拟胆汁体系.于Small模拟胆汁中分别加入RBP(RBP组)、α1-酸性糖蛋白(AAG,AAG组)和Alb(Alb组),运用Busch法测定成核时间指数、结晶生长速度指数和结晶终浓度指数.于Small和综合模拟胆汁中分别加入Alb(对照组)和RBP(实验组),采用Holan法测定成核时间、Holzbach法计算成核活性,并于光镜下观察胆固醇成核、结晶的形态学动态变化过程.两两比较采用t检验,多组比较采用方差分析.结果 AAG组成核时间指数为0.66,结晶生长速度指数为1.29,结晶终浓度指数为1.01.RBP组成核时间指数为0.73,结晶生长速度指数为1.02,结晶终浓度指数为0.95.Small模拟胆汁体系中,对照组的平均成核时间为(12.2±1.2)d,实验组为(8.2±1.5)d,两组比较,差异有统计学意义(t=2.97,P ＜0.05).RBP在Small模拟胆汁体系中成核活性为0.67.综合模拟胆汁体系中,对照组的平均成核时间为(9.5±1.1)d,实验组为(7.5±1.1)d,两组比较,差异有统计学意义(t=2.35,P＜0.05).RBP在综合模拟胆汁体系中的成核活性为0.79.胆固醇成核、结晶过程分为4个阶段.第21天时整个胆汁体系中出现分割现象.结论 RBP在体外模拟胆汁体系中具有促成核活性.
