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人多药耐药基因-1及二氢叶酸还原酶基因共转导小鼠造血细胞
耐药基因转导骨髓细胞对化疗病人造血系统的保护作用已受到人们的重视.本研究利用多药耐药基因-1(mdr-1)及二氢叶酸还原酶(dhfr)双基因转染小鼠骨髓细胞,观察造血细胞对两种耐药谱化疗药物的抵抗能力.结果表明,所用逆转录病毒载体转染率达到15%左右,转基因骨髓细胞CFU-GM对taxo1及MTX的耐药能力明显增强,说明外源基因在造血祖细胞中的正确表达;转基因骨髓细胞回输给同系小鼠7个月后,FCM技术仍可检测到外周血白细胞gp170的表达,且其基因组DNA中可检测到mdr-1及dhfr基因特异序列,表明两种基因可能已稳定整合至造血干/祖细胞中.上述结果为以骨髓细胞为靶体的耐药基因治疗提供了有用的实验室资料.
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DHFR-CD双耐药基因增强转基因小鼠对大剂量化疗毒性的抵御能力
目的:探讨将人双突变的二氢叶酸还原酶基因(DHFR)和胞苷脱氨基酶基因(CD)同时导入小鼠骨髓细胞中,观察小鼠对大剂量氨甲喋呤(MTX)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐受性,研究骨髓耐受联合化疗的可行性.方法:以反转录病毒为载体,将人双突变的二氢叶酸还原酶基因(DHFR)和胞苷脱氨基酶基因(CD)通过共培养转染入小鼠骨髓干细胞,观察共培养后的骨髓细胞及受体小鼠骨髓移植后经药物处理后的骨髓细胞耐MTX及Ara-C CFU-GM生成情况;转基因小鼠骨髓细胞提取的DNA,用PCR检测转基因小鼠骨髓细胞耐药基因的表达;观察转基因小鼠经大剂量MTX和Ara-C化疗后血象、体质量及生存率的变化.结果:骨髓移植前共培养后供体的骨髓细胞和骨髓移植后受体含有耐药基因(SFG-F/S-CD)的骨髓细胞均有耐药克隆的形成(14%,20%;x2分别为42.55,44.26;P＜0.01),并明显增加了对MTX和Ara-C的耐受;与对照组比较含双耐药基因组动物经大剂量化疗后,生存率明显提高(x2=7.42,P＜0.01),血象逐渐恢复正常;转基因小鼠骨髓细胞经PCR检测,显示有F/S-CD基因条带;耐药基因转染后小鼠骨髓对MTX和Ara-C的耐受明显增加.结论:双耐药基因可以进入小鼠骨髓细胞并且获得共表达,提高了造血细胞对MTX和Aar-C的耐药性.
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逆转录病毒载体介导的双耐药基因转染小鼠骨髓细胞的实验研究
目的:将耐药基因以逆转录病毒为载体转染骨髓细胞以解决大剂量化疗所造成的骨髓抑制.方法:以逆转录病毒为载体,将双突变的二氢叶酸还原酶基因(DH-FR)和胞苷脱氨基酶基因(CD)转染小鼠骨髓细胞,观察该细胞耐MTX及Ara-C的CFU-GM生成情况;RT-PCR检测转基因的表达情况.结果:转基因的小鼠骨髓细胞有耐药克隆形成(14%);基因转染后小鼠骨髓细胞对MTX和Ara-C的耐受明显增加,P＜0.005;RT-PCR显示转基因细胞有转染的基因条带.结论:双耐药基因通过逆转录病毒转染小鼠骨髓细胞并且获得表达,提高了骨髓细胞对MTX和Aar-C的耐药性.
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用IRES及dhfr构建哺乳动物细胞双表达载体
目的:构建同时表达抗体的重链和轻链的哺乳动物细胞双表达载体.方法:将微小RNA病毒内部核糖体进入位点(IRES),亚克隆到质粒载体pCdhfr1多克隆位点,构建了哺乳动物细胞双表达载体pCdhfr5.结果:pCdhfr5具有两处多克隆位点, 由IRES相连.能同时表达两个外源基因.把绿色荧光蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因分别亚克隆到pCdhfr5的上下游多克隆位点MCS1和MCS2构建了表达质粒pFN, 经脂质体法转染CHO细胞,筛选到同时表达新霉素磷酸转移酶和绿色荧光蛋白的表达株.结论:双表达载体的构建成功为进一步研究表达抗体全分子的CHO细胞株奠定了基础.
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美国《Emerging Infectious Diseases》2014年第8期有关人兽共患病论文摘译
P1280乌干达、坦桑尼亚和埃塞俄比亚恶性疟原虫叶酸拮抗剂超级耐药性的独立起源／／Michael Alifrangis ，Sidsel Nag ，Mette L ，等
超级耐药恶性疟原虫威胁着妊娠期磺胺多辛-乙胺嘧啶间歇预防性治疗疟疾的效果。它以恶性疟原虫二氢蝶呤合酶基因（Pf dhps）双重突变背景下的A581G Pf dhps 突变和二氢叶酸还原酶基因（Pf dhf r）三重突变为特征。我们用2004-2008年间收集的非洲东部3个地区的样本根据微卫星多样性侧翼序列的 P f d h p s三重突变等位基因（437G＋540E＋581G ）的特征，并将其与来自同一地区的双重突变等位基因（437G ＋540E ）进行比较，研究A581G突变的进化起源。在埃塞俄比亚，两种等位基因均源自一个谱系，这与乌干达和坦桑尼亚明显不同。乌干达和坦桑尼亚的三重突变源自已存在的具有特征性的非洲东南部双重突变谱系。虽然A581G突变多次出现在当地有 P f dhps双重突变的背景下；然而自2004年始一个新的微卫星等位基因并入坦桑尼亚谱系，提示新出现的三重突变谱系已在本地传播。 -
二氢叶酸还原酶基因在耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株的耐药机制探讨
目的 探索二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)基因在耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株的表达改变.方法 选择骨肉瘤原代细胞株细胞株Saos 2与耐药细胞株Saos 2/MTX4.4,用RT PCR方法半定量测定原代细胞株与耐药细胞株在DHFR基因表达改变.结果 Saos 2、Saos 2 /MTX4.4细胞系RFC基因mRNA表达与内参基因对比分别为7.54±2.14、2.13±2.24,有统计学差别.结论 耐药细胞株RFC基因表达下降可能是细胞株耐药的原因.
