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MEK1／2抑制剂U0126体内外抗流感病毒研究
目的：观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的激酶MEK1/2抑制剂U0126对甲型H1 N1流感病毒PR/8/34株感染正常小鼠肺炎模型和人肺泡上皮细胞（A549）感染模型的作用。方法采用PR/8/34株感染ICR小鼠模型，通过肺指数评价感染后第2天和第5天U0126的抗病毒作用，采用实时荧光定量PCR技术观察U0126对小鼠肺脏组织病毒载量的作用。采用PR/8/34株感染A549细胞模型，通过观察细胞病变（CPE）法研究U0126对细胞病变的作用。结果 PR/8/34株流感病毒感染小鼠第2天，U0126组与模型对照组比较肺指数和病毒载量均显著降低（P＜0．05）；U0126对A549细胞病变作用具有明显的抑制作用。结论 U0126对体内外甲型流感病毒感染模型均具有抗病毒作用。结果提示，药物抗病毒作用可能通过抑制MAPK（Raf/MEK/ERK）信号反应途径实现的设想，为研究新的抗病毒药物提供新思路，为进一步揭示药物抗病毒机理提供药效学研究基础。
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大黄提取液体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的实验研究
目的:研究大黄提取液在体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用.方法:用hela细胞做体外培养实验,以不同剂量的大黄提取液作用于病毒复制周期的各个阶段,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变(CPE)、MTT染色细胞保护率(MTT法)作为评价指标,判断药效,对大黄提取液抗HSV-Ⅱ作用进行评价.结果:大黄提取液对hela细胞的增殖无明显作用,且对hela细胞毒性极低,对病毒有直接灭活作用;可干扰病毒向宿主细胞吸附,还可有效抑制病毒复制.结论:大黄提取液在体外对HSV-Ⅱ有显著的抑制和杀伤作用,并且有效抑制病毒复制.
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治咳川贝枇杷滴丸体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用
目的:研究治咳川贝枇杷滴丸体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的作用.方法:采用CPE法和MTT法在细胞水平上检测治咳川贝枇杷滴丸抗HSV-Ⅰ的作用;观察不同时间段的含药血清抑制HSV-Ⅰ的情况,在血清水平上进一步验证治咳川贝枇杷滴丸抗HSV-Ⅰ的作用.结果:细胞水平上,治咳川贝枇杷滴丸对HSV-Ⅰ有直接灭活作用、侵入阻断作用、生物合成抑制作用,高抑制率分别为75.41％、60.76％和56.71％(P＜0.05).在TC0范围以下,随着药物浓度的增加,病毒抑制率明显升高,呈量效关系.血清水平上,含药血清具有明显的抗HSV-Ⅰ作用,抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性.结论:治咳川贝枇杷滴丸具有一定的体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型作用.
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清咽滴丸抗柯萨奇病毒B3,B5的实验研究
目的:探讨清咽滴丸在细胞水平及血清水平对柯萨奇病毒B3、B5(CVB3、CVB5)的抑制作用.方法:利用CPE法和MTI法在细胞水平上检验清咽滴丸抗CVB3、CVB5感染的作用;观察不同时间段的含药血清抑制CVB3、CVB5的情况,进而在血清水平上验证清咽滴丸的抗病毒作用.结果:(1)细胞水平上,清咽滴丸在7.81×10-5 g/mL时对CVB3的抑制作用好,在3.91×10-4 g/mL时对CVB3的治疗作用强.血清水平上,当血药浓度1∶10且在灌胃65 min时对CVB3呈现好的抑制作用,抑制率达到58.74%(P＜0.05).(2)细胞水平上,清咽滴丸在7.81×10-5 g/mL时对CVB5的抑制作用好,在3.91×10-5 g/mL时对CVB5的治疗作用强.血清水平上,当血药浓度1∶10且在灌胃85 min时对CVB5呈现好的抑制作用,抑制率达到74.23%(P＜0.05).结论:清咽滴丸有一定的抗柯萨奇病毒B3、B5的功效.
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松针油抗甲型流感病毒的实验研究
目的 研究松针油抗甲型流感病毒的作用.方法 采用细胞病变抑制实验、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,以治疗指数(TI)为评价指标,观察松针油在MDCK细胞中对甲型流感病毒的抑制作用.结果 松针油的细胞毒性较低,松针油在一定浓度范围内对流感病毒有直接灭活作用;在吸附阶段和合成阶段都能抑制流感病毒的复制,但松针油不能阻止病毒侵入细胞.结论 松针油具有很好的抗甲型流感病毒的作用.
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地不容粗提物体外抗柯萨奇B3病毒活性作用的实验研究
目的:研究地不容粗提物体外抗柯萨奇B3病毒活性.方法:采用细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法、MTT法对样品的细胞毒作用、抗病毒活性进行测定.结果:地不客粗提物能明显抑制CVB3对Hela细胞的致病变作用,使细胞存活率升高,其中S1(舍千金藤素)的EDso为1637.16μg/mL,S2(不舍千金藤素)的ED50为2964.86μg/mL.结论:地不容多糖能显著抑制CVB3病毒所致的细胞病变,具有成为一种有效抗病毒药物的开发潜力.
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汉坦病毒激发人胃上皮细胞病变和凋亡
目的证实人胃粘膜上皮细胞是否为汉坦病毒属(HV)汉滩病毒型(HTN)和汉城病毒型(SEO)病毒的靶细胞,病毒对其是否有致细胞病变效应(CPE)和促凋亡作用.方法建立人胃上皮细胞(HGEC)离体培养;用HV N8、76-118、Z37、Seoul 8039株感染HGEC,观察细胞CPE,用直接免疫荧光法(IFA)检测病毒感染细胞和感染灶;用Annexin V-FITC kit观察HV的致HGEC凋亡和坏死作用.结果 HTNV和SEOV可以感染离体培养的HGEC,形成感染灶并出现CPE;与模拟感染细胞相比,N8、76-118、Z37、Seoul 8039株感染的HGEC凋亡和坏死细胞比例明显增高,HTNV较SEOV促凋亡和坏死作用更强.结论 HGEC可作为HTNV和SEOV感染的靶细胞,致CPE并促进细胞凋亡和坏死,在急性肾综合征出血热病人胃粘膜损害机制中起重要作用.
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上海地区水痘带状疱疹病毒基因型研究
目的:了解上海地区水痘-带状疱疹病毒基因型.方法:用Vero和Vero-E6细胞分离培养临床诊断水痘病人的咽拭子标本,观察病毒的致细胞病变效应(CPE),对病变细胞培养液提取DNA,进行聚合酶链反应(PCR),对PCR产物测序,将测序结果与Genbank中公布的水痘病毒序列比对判定水痘带状疱疹病毒和病毒的基因型.结果:PCR产物进行电泳,在550 bp处可见目的片段.测序结果证实为水痘带状疱疹病毒,基因型为J型.结论:从2006年5月华山医院临床诊断水痘患者咽拭子标本分离到的水痘带状疱疹病毒基因型为J型,ORF22读码框与水痘带状疱疹减毒活疫苗VOka株基因同源.
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利用RNA干扰机制抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的增殖
本文探讨依靠RNAi技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV) 增殖的干扰作用.筛选到针对编码PRRS病毒核衣壳蛋白的N基因的两处靶序列作为候选片段,在MARC-145细胞上进行基因干扰实验研究.成功观测到由载体表达的小干扰RNA (siRNA)在MARC-145细胞中对PRRS病毒增殖的抑制现象.通过选取不同时间段对病毒进行TCID50检测,以及对CPE出现时间进行观察和免疫荧光技术,得到RNA干扰对PRRS病毒增殖抑制作用的动态数据.证实在真核细胞水平上,RNA干扰机制可以抑制PRRS病毒的增殖.实验结果表明,依靠载体表达的RNA干扰技术将会对今后针对PRRS病毒的新型疫苗开发提供一个新思路.
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广藿香三种有效部位体外抗柯萨奇病毒B3作用的初步研究
目的:研究广藿香三种有效部位体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)作用,从而明确广藿香的抗病毒性能,为其进一步开发利用奠定基础.方法:通过CPE法和MTT法检测药物对Hela细胞的毒性及对CVB3引起的细胞病变抑制作用,判断药物毒性及药物抗病毒效应.结果:广藿香的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物、水提取物对HeLa细胞的半数中毒浓度(TC50)分别为765.59、1140.56、2700.30 μg/mL.广藿香的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物具有较好的抗CVB3作用,IC50分别为26.92、13.84 μg/mL,而其水提取物无抗CVB3的作用.结论:广藿香的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物体外具有抗CVB3作用,但其具体的作用机理仍需进一步研究.
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IPS-1基因缺失突变体对IFN-β诱生作用及抗HSV-1病毒作用的影响
目的:初步研究缺失300-444位氨基酸突变体△IPS-1对IFN-β诱生作用及抗HSV-1病毒作用的影响,进而确定该部位对IPS-1发挥正常功能的作用.方法:通过重叠延伸PCR法获得缺失300～444位氨基酸的△IPS-1,构建突变重组质粒pEF-BOS-FLAG-△IPS-1,并经酶切及测序鉴定.采用磷酸钙体外转染HEK293T真核细胞.经Western blot检测蛋白的表达;ELISA检测细胞上清中IFN-β分泌量;HSV-1病毒感染分别转染了pEF-BOS-FLAG/IPS-1、pEF-BOS-FLAG/△IPS-1质粒的HEK293T细胞,空斑检测各转染细胞组不同时间段细胞上清的病毒滴度.结果:成功构建了缺失300～444位氨基酸的IPS-1基因重组真核表达载体pEF-BOS-FLAG/△IPS-1;与转染pEF-BOS-FLAG/IPS-1质粒组相比转染了pEF-BOS-FLAG/△IPS-1的细胞在不同时间段其上清中IFN-β分泌量有一定量的减少;空斑测定结果表明转染了pEF-BOS-FLAG/△IPS-1质粒组细胞中病毒滴度明显高于pEF-BOS-FLAG/IPS-1质粒组.结论:△IPS-1与IPS-1相比能使HEK293T细胞IFN-β分泌量明显减少,△IPS-1不能完全抑制HSV-1感染细胞产生的细胞病变效应,该突变体抗HSV-1病毒作用有一定程度的减弱.
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滨蒿总黄酮体内外抗甲型流感病毒作用的研究
目的 研究滨蒿总黄酮在体内外抗甲型流感病毒的作用.方法 将昆明小鼠随机分为7组,即滨蒿总黄酮0.10,0.20和0.40 g·kg -1组、利巴韦林组、复方一枝蒿颗粒组、病毒对照组和对照组,采用甲型流感病毒PR/8/H1N1滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,连续灌胃给药7 d.计算肺指数并测定肺匀浆中IL-6和IL-8的水平;体外Cytopathic effect(CPE)法观察滨蒿总黄酮抗甲型流感病毒A/京防/262/95(H1N1)的作用.结果 滨蒿总黄酮0.10,0.20和0.40 g·kg -1给药后能明显降低甲型流感病毒PR/8/H1N1感染小鼠的肺指数,明显降低肺匀浆中的IL-6水平(P<0.01);滨蒿总黄酮0.40 g·kg -1剂量组可明显降低肺匀浆中IL-8的水平(P<0.05);滨蒿总黄酮在体外对A/京防/262/95(H1N1)的IC50值为6.9 μg·mL -1,治疗指数(SI)为55.1.结论 滨蒿总黄酮对甲型流感病毒感染小鼠有明显的治疗作用,对甲型流感病毒所致细胞病变有明显的抑制作用,表明其有良好的抗甲型流感病毒作用.
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WLAN基站在“无线城市”建设中应用测试及设备优化建议
基于“无线城市”建设背景,对WLAN基站进行了几种典型场景的试点和测试工作,验证了WLAN基站在各类场景中的覆盖效果;根据测试结果,分析得出了WLAN基站的适应场景:同时,针对当前WLAN基站和CPE设备的不足之处,给出了研究方向和设备优化建议.
