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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+的构建及其生物学特性初步探讨
以伪狂犬病毒基因缺失标志疫苗株TK/gG-/LacZ+为亲本株,通过同源重组,构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要免疫原性蛋白GP5的重组伪狂犬病毒TK/gG-/GP5+.经PCR、Southern杂交、Western blot证实构建正确,并能表达GP5.同时,对重组病毒在PK-15细胞中的增殖特性进行了检测,结果与亲本株相比,增殖滴度无显著性差异.将重组病毒免疫BALB/c小鼠,2次免疫后4周,50%(3/6)小鼠产生了低水平的GP5特异性ELISA抗体,但中和抗体均小于1:4.
关键词： 伪狂犬病毒 猪繁殖与呼吸综合征 重组病毒 TK-/gG-/GP5+ -
2015年广西地区PRRSV流行株ORF5和Nsp2基因分子流行病学调查
目的 对广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) Nsp2和ORF5基因进行分子流行病学调查. 方法 采集广西地区猪病料样品45份,PCR扩增PRRSV毒株Nsp2和ORF5基因并进行遗传进化分析. 结果 RT-PCR检测PRRSV 7份猪病料阳性.7株病毒与VR 2332和LV株的同源性分别为83.5％～88.7％和62.1％～64.8％.遗传进化分析显示,7株病毒分属于两个亚群,3株属于亚群Ⅳ,4株属于亚群Ⅵ.Nsp2序列分析显示,6株病毒有高致病性PRRSV 1+29aa氨基酸的缺失特征,其中GXBB11-2015在此基础上出现了新的20个氨基酸缺失,缺失碱基数为150个碱基. 结论 高致病性PRRSV已成为广西地区优势毒株,病毒Nsp2基因新的碱基缺失是PRRSV变异的又一证据,这为研究该部位基因缺失对PRRSV的影响打下了基础
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共表达PRRSVORF5和ORF6基因重组核酸疫苗对断奶仔猪的免疫效果研究
目的 评价猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6对断奶仔猪的免疫效果. 方法 分别以pVAX-ORF5-2A-ORF6+ QuilA、pVAX-ORF5-2A-ORF6、pVAX空质粒和PRRSV弱毒疫苗对断奶仔猪进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平、T淋巴细胞增殖程度和CTL杀伤活性,评价其免疫效果. 结果 重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6能够刺激猪体产生PRRSV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性;免疫仔猪血清IL-2和IFN-γ水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),加入免疫佐剂Quil A的实验组IFN-γ水平显著高于未加佐剂的实验组(P＜0.05). 结论 重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6可诱导免疫仔猪产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答,有望成为抗PRRSV感染的新型候选疫苗.
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安徽PRSS发病猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其耐药性分析
83.3%.结论 安徽省不同地区PRRS感染猪群中均存在程度不同的HPS感染,各地区HPS分离株表现出形态上的变化特征和一致的生化特性,且有对临床常用抗菌药物耐药性增强的趋势.
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猪圆环病毒病和繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗的安全性及免疫保护力
目的 观察猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗的安全性及免疫保护力.方法 分别用超剂量疫苗免疫妊娠母猪和3～4周龄断奶仔猪,以观察疫苗的安全性及对妊娠母猪产仔的影响;并用3批疫苗分别免疫3～4周龄断奶仔猪,检测血清中ELJSA和中和抗体效价;免疫后28 d,分别用PRRSV CC株和PCV2 NM株攻毒,观察临床反应,并进行病理组织学检查,计算疫苗保护率.结果 超剂量疫苗免疫对妊娠母猪和断奶仔猪均安全,无任何不良临床反应.免疫断奶仔猪后7 d可检测到血清抗体,PCV2及PRRSV攻毒后的保护率均不低于80%.结论 PCVD和PRRS二联灭活疫苗安全、有效,可用于PCVD和PRRS的预防.
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利用RNA干扰机制抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的增殖
本文探讨依靠RNAi技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV) 增殖的干扰作用.筛选到针对编码PRRS病毒核衣壳蛋白的N基因的两处靶序列作为候选片段,在MARC-145细胞上进行基因干扰实验研究.成功观测到由载体表达的小干扰RNA (siRNA)在MARC-145细胞中对PRRS病毒增殖的抑制现象.通过选取不同时间段对病毒进行TCID50检测,以及对CPE出现时间进行观察和免疫荧光技术,得到RNA干扰对PRRS病毒增殖抑制作用的动态数据.证实在真核细胞水平上,RNA干扰机制可以抑制PRRS病毒的增殖.实验结果表明,依靠载体表达的RNA干扰技术将会对今后针对PRRS病毒的新型疫苗开发提供一个新思路.
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应用RT-PCR检测流产胎儿组织中猪繁殖与呼吸综合征病毒
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型膜蛋白和核衣壳蛋白基因序列,设计了一对含有EcoR I和BamH I酶切位点的引物,用RT-PCR对四个流产猪场的病料进行了检测,扩增出约918 bp的基因片段.通过病毒分离、酶切鉴定和序列分析证实为PRRSV感染.结果说明应用所设计的引物进行RT-PCR快速检测PRRS是可行的,为我国快速特异诊断PRRS和PRRSV强毒株的深入研究奠定了基础.
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猪繁殖与呼吸综合征与伪狂犬病混合感染的分子生物学快速诊断
猪繁殖与呼吸综合征自1987年发现至今,已在世界大多数养猪国家和地区普遍存在[1,2].而伪狂犬病作为仅次于口蹄疫、猪瘟的危害养猪业的重要疫病，一直引起人们的高度重视[3,4].
