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2014～2015年河南地区PRRSV的分子检测及NSP2、ORF5基因变异分析
为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子特征及变异情况,本研究对2014～2015年河南各地118个养殖场的250份PRRS疑似病料进行RT-PCR检测,并对PRRSV阳性样品的NSP2和ORF5基因进行测序及变异分析.结果显示,PRRSV阳性样品共58份,阳性率为23.2％;扩增得到29个NSP2基因序列和31个ORF5基因序列;遗传进化分析表明,河南地区PRRSV流行毒株主要为美洲型毒株,其中14株与高致病性PRRSV(HP-PRRSV)高度同源,其余15株与美洲毒株NADC30高度同源,且该类毒株的nsp2蛋白存在131个氨基酸的不连续缺失,与国内及韩国报道的新变异毒株具有相似的缺失特征.与2012～2013年河南地区PRRSV分子流行病学调查结果相比,2014～2015年河南地区PRRSV流行株主要以HP-PRRSV和NADC30-Like毒株为主,尤其是后者在流行毒株中所占比例急剧上升,并且PRRSV流行毒株的NSP2和ORF5基因均发生很大变异,提示有必要对PRRSV的流行和变异进行持续监测,并对其致病性等进行深入研究,从而为新型疫苗及抗病毒药物的研发提供科学的参考依据.
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 ORF5基因 NADC30株 变异分析 -
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白实验性核酸疫苗的构建及其免疫原性的初步研究
扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)长春分离株ORF5基因,并将其克隆至真核表达载体pVAX1、pVIR-IL-18的CMV启动子下游,构建成真核表达质粒.通过Western blot以及IFA检测方法确认,所构建的2个重组DNA疫苗质粒在真核细胞能进行有效的转录,并表达了目的蛋白(GP5).同时辅以不同佐剂进行了BALB/c小鼠免疫试验,检测了免疫后的ELISA抗体水平和脾T淋巴细胞亚群数量.结果表明:共表达猪IL-18基因的核酸疫苗pVIR-IL-18-ORF5免疫后的ELISA抗体水平和脾T淋巴细胞亚群数量均优于pVAX1-ORF5,而且加佐剂实验组优于未加佐剂的实验组.
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我国两个不同地区猪繁殖和呼吸综合征病毒分离株ORF5基因序列比例
猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)为动脉炎病毒科成员之一,可引起感染母猪流产、死胎及断奶仔猪呼吸困难和死亡.该病毒呈球形,有囊膜,大小45nm～83nm,基因组为单股RNA,大小约15kb,有8个阅读框(ORF),分别编码2种非结构蛋白和6种结构蛋白,其中ORF5编码病毒糖基化膜蛋白(GP5)[1,2].GP5蛋白为该病毒主要结构蛋白之一,含有病毒线性中和抗原表位.该蛋白可诱导感染细胞发生细胞凋亡[3,4].目前,PRRSV有欧洲型和美州型两个血清型,其结构蛋白基因同源性为54%～70%[5,6].不同美洲型PRRSV野毒株基因也有一定差异.由ORF5基因推导的氨基酸序列有4个相对保守区,但其N端和C端氨基酸残基可变性较大.由该基因构建的重组质粒具有良好免疫原性[7,8].尽管一些欧美国家已普遍使用Resp PRRS弱毒疫苗,但该病仍时有发生[9,10].我国于1996年亦已证实存在该病,并有不断蔓延趋势,已造成我国养猪业严重经济损失.
关键词： 猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因 基因序列 J1毒株 S1毒株 -
2015年广西地区PRRSV流行株ORF5和Nsp2基因分子流行病学调查
目的 对广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) Nsp2和ORF5基因进行分子流行病学调查. 方法 采集广西地区猪病料样品45份,PCR扩增PRRSV毒株Nsp2和ORF5基因并进行遗传进化分析. 结果 RT-PCR检测PRRSV 7份猪病料阳性.7株病毒与VR 2332和LV株的同源性分别为83.5％～88.7％和62.1％～64.8％.遗传进化分析显示,7株病毒分属于两个亚群,3株属于亚群Ⅳ,4株属于亚群Ⅵ.Nsp2序列分析显示,6株病毒有高致病性PRRSV 1+29aa氨基酸的缺失特征,其中GXBB11-2015在此基础上出现了新的20个氨基酸缺失,缺失碱基数为150个碱基. 结论 高致病性PRRSV已成为广西地区优势毒株,病毒Nsp2基因新的碱基缺失是PRRSV变异的又一证据,这为研究该部位基因缺失对PRRSV的影响打下了基础
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒对猪体免疫作用研究
目的:为了增强猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗免疫效力,以pVAX1为真核表达载体,以PRRSV ORF5基因为目的基因,构建了含有CpG和PRRSV ORF5的真核表达质粒CpG-pVAX1-ORF5,并在猪体进行了免疫试验.方法:检测猪PRRSV的特异性抗体滴度、IL-2水平以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平,并做了攻毒保护试验.结果:试验结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫(显著的淋巴细胞增殖反应水平).攻毒结果表明CpG-pVAX1-ORF5组能够有效地抵抗经鼻攻毒,可以保护猪轻微病毒血症,比对照组减少80%,也不表现临床症状,对肺的损害能提供部分保护.结论:CpG的加入可使免疫猪的病变减轻或消失.从而表明含有CpG-ODN能作为PRRSV DNA疫苗的有效佐剂.
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 CpG DNA免疫 -
两株PRRSV分离株ORF5与Nsp2基因部分序列分析
目的 分析沈阳和甘肃发病猪场的2株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因和Nsp2基因变异情况.方法 采用RT-PCR方法,对ORF5基因序列和Nsp2基因部分序列进行扩增、克隆并测序.并用DNAStar软件将测序结果与国内外发表的10株参考毒株进行比对分析.结果 2株分离株ORF5基因与国内外其它美洲型分离株核苷酸的同源性为88.6%～98.7%,推导的氨基酸的同源性为86.6%～98.0%;Nsp2基因的核苷酸同源性为73.4%～99.8%,推导的氨基酸的同源性为68.6%～99.5%,且该基因与国内其他变异株有完全一致的缺失特征.结论 这两株分离株均属于PRRSV美洲型变异株,为该病的防治及疫苗的设计奠定理论基础.
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 NSP2基因 遗传变异
