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菩人丹对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠VEGF 及其受体 VEGFR2/p - VEGFR2和Angiostatin、Endostatin 的影响
目的：观察菩人丹（PuRenDan）对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠胰腺组织中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR2/ p - VEGFR2）和血管生成抑制素（Angiostatin）、内皮细胞抑制素（Endostatin）的影响，探讨菩人丹修复胰腺微循环障碍的机制。方法通过高脂饲料喂养（12周）与尾静脉快速注射小剂量链脲佐菌素（30 mg/ Kg）的方法建立大鼠模型。在同批次正常大鼠中随机选15只为正常对照组，后将成模大鼠随机分为：模型组、菩人丹组（1.77 g/ Kg）、降糖通脉片组（0.42 g/Kg）和二甲双胍组（0.14 g/ Kg），每组15只。各组大鼠每天灌胃1次，正常对照组和模型组给予等剂量蒸馏水，连续给药4周后，提取各组大鼠胰腺组织总蛋白质，采用 Western blot 法测定各组大鼠胰腺组织中 VEGF 及其受体 VEGFR2的蛋白质表达和磷酸化水平，以及 Angiostatin、Endostatin 的蛋白质表达水平。结果与正常对照组相比，模型组胰腺组织 VEGF 蛋白质表达水平和受体 VEGFR2磷酸化水平明显降低（P ﹤0.01），而 Angiostatin、Endostatin 蛋白质表达水平显著增高（P ﹤0.01）；菩人丹干预后，VEGF 蛋白质表达水平和受体 VEGFR2磷酸化水平均显著上调（P ﹤0.01），而 Angiostatin、Endosta-tin 蛋白质表达则被抑制（P ﹤0.01）。其与阳性对照药降糖通脉片和二甲双胍作用相当。结论菩人丹通过上调血管生成促进因子 VEGF 蛋白质表达及其受体 VEGFR2磷酸化，抑制血管生成抑制因子Angiostatin、Endostatin 的蛋白质表达，促进糖尿病状态下胰腺组织微血管新生，进而改善胰腺微循环障碍，发挥其对胰岛β细胞的保护、修复作用。
关键词： 菩人丹 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体2 血管生成抑制素 内皮细胞抑制素 -
胎儿生长受限胎盘因素的研究进展
胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)系指胎儿体重低于其孕龄平均体重第10百分位数或低于其孕龄平均体重的2个标准差,是围产儿发病和死亡的主要原因之一.FGR围产儿死亡率为正常胎儿的4～6倍,约占我国围产儿死亡总数的40%[1].胎盘介于胎儿与母体之间,是维持胎儿在宫内营养、发育的重要器官.FGR的发病机制国内外已有较多研究,但目前仍不明确,但胎盘因素在其中起重要作用[2].当出现胎盘自身发育异常,以及胎盘肿瘤、感染等都可引起胎盘的有效血流量减少,从而限制了营养物质的摄取和转运.胎盘能产生血管内皮生长因子、胎盘生长因子、血管生成素及血管生成抑制素等许多生长因子,并在局部调节血管形成,胎儿发育过程中各种激素的水平异常可影响胎儿重要器官的生长和发育,从而导致FGR的发生.现对FGR胎盘因素研究的新进展综述如下.
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血管生成抑制素和人血纤维蛋白溶酶原K5环的研究进展
早在20世纪70年代初,Folkman就提出,肿瘤生长是血管依赖性的[1].肿瘤的生长有两个明显的不同阶段,即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增生阶段.血管生成使肿瘤能够获得足够的营养物质,是促成上述转变的关键环节,如果没有血管生成,原发肿瘤的生长不会超过1～2 mm2.同时,肿瘤侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因.血管生成的调节主要依赖血管形成的刺激因子和抑制因子.例如:肿瘤中成纤维细胞生长因子(FGFs),血管内皮生长因子常为过量表达的血管生成的刺激因子.肿瘤组织可表达一种或多种血管生成刺激因子的多肽,它们能协同刺激肿瘤血管生成和促进肿瘤生长.
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从人血浆组分Ⅲ中制备天然血管生成抑制素
目的从人血浆组份Ⅲ中制备天然血管生成抑制素(angiostatin).方法采用Lysine Sepharose-4B亲合层析、SephacrylS200层析,纯化人纤溶酶原,经弹性蛋白酶水解、lysine Sepharose-4B亲合层析制备血管生成抑制素.结果获得相对分子质量43 000和35 000两种蛋白.经鸡胚实验,显示出明显血管生成抑制活性.结论应用该工艺从血浆中提取血管生成抑制素是可行的.
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人血管生成抑制素基因的克隆、表达及纯化
目的构建携带人血管生成抑制素基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的血管生成抑制素.方法用PCR法从人纤溶酶原cDNA中扩增出Kringle 1-3基因,克隆入pET21a(+)载体中,在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经亲和层析纯化.结果所构建的原核表达载体为高效表达系统,所表达的产物经层析纯化后可获得重组人血管生成抑制素.结论可获得大量纯化人血管生成抑制素,为进一步临床应用奠定基础.
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血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞生成的影响
目的:探讨血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响及作用机制.方法:淋巴管内皮细胞取自猪的胸导管.采用划线法和MTT法观察血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响.Hoechst染色检测细胞凋亡.结果:划线法和MTT法均显示血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞的增殖和游走有明显的抑制作用.Hoechst染色证实,经血管生成抑制素和反应停处理后的淋巴管内皮细胞,核周围有凋亡小体.结论:血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞的增殖和游走具有明显的抑制作用,且有剂量依赖性.血管生成抑制素和反应停具有促进细胞凋亡的作用.
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血管生成抑制素和IL-7联合治疗的肿瘤抑制效应
目的探讨采用裸质粒DNA肿瘤内直接注射入方法,以观察血管生成抑制素(Angiostatin),和IL-7联合治疗肿瘤的可行性,及其可能机制.方法将构建的血管生成抑制素、IL-7基因真核表达质粒(每次100 μg/只),分别或联合注射到接种U14肿瘤细胞5天后的荷瘤鼠体内,以后每隔7天注射一次,共三次.观察荷瘤鼠的存活率、肿块生长情况、以及小鼠整体免疫功能,并对肿瘤对照组与联合基因治疗组的肿瘤组织进行病理学及细胞凋亡分析.结果血管生成抑制素、IL-7、以及两者联合治疗均可不同程度地增加荷瘤鼠的存活率、抑制肿瘤生长和转移、调节免疫功能,以联合基因治疗组更显著.病理分析表明联合治疗组肿瘤血管形成显著减少,基底部有大量的淋巴细胞浸润,肿瘤细胞的凋亡率明显升高.结论直接裸质粒DNA注射血管生成抑制素和IL-7基因可能成为一种方便、有效的肿瘤治疗方法.
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血管生成抑制素K1～3环结构体酵母表达及活性检测
目的研究血管生成抑制素K1～3重组体的生物学活性及机理。方法将血管生成抑制素K1～3环结构基因克隆进入甲醇表达质粒pPIC9K中，诱导该酵母表达系统表达了K1～3重组蛋白，经初步纯化后，利用改良MTT法在人脐静脉内皮细胞基质上检测其对血管内皮细胞的生长抑制活性。结果确认血管生成抑制素K1～3重组体能明显抑制人脐静脉内皮细胞的生长。结论血管生成抑制素K1～3重组体抑制能力具有量-效关系，抑制该内皮细胞生长的基本机理是诱导其发生凋亡类似反应。
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人血管生成抑制因子canstatin原核表达载体的构建及表达
目的:构建国人血管生成抑制因子canstatin的原核表达载体并在大肠杆菌BL21中表达canstatin重组蛋白.方法:用Trizol试剂提取人肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增canstatin的cDNA,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析.将canstatin cDNA定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,而后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达.结果:canstatin cDNA克隆入质粒pET30a(+)获得了重组表达载体pET30a(+)/Cans,canstatin的cDNA长度为684 bp,编码227个氨基酸.IPTG诱导原核表达载体pET30a(+)/Cans在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体总蛋白量的35%.结论:原核表达载体pET30a(+)/hCans在大肠杆菌BL21中高效表达canstatin重组蛋白.
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血管生成抑制素基因对裸鼠人肝癌移植瘤的治疗作用
肿瘤血管的快速生成是原发性肝癌生长和转移的前提,肿瘤血管一直作为抗肿瘤的研究对象而倍受关注[1].本研究旨在观察血管生成抑制素(As)基因对人原发性肝癌裸小鼠皮下移植瘤的治疗作用.
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血管生成抑制因子的研究进展
血管生成与肿瘤的生长、侵袭和转移密切相关,目前,以抑制血管生成为靶点治疗肿瘤有望成为抗肿瘤新疗法之一.近年来,研究发现了多种内源性血管生成抑制因子,其中一些已进入了临床试验阶段.本文对内源性血管生成抑制因子的结构、功能、作用机制及其在肿瘤治疗中的应用进行综述.
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谷胱甘肽S转移酶-血管生成抑制素融合蛋白表达载体的构建
目的构建谷胱甘肽S转移酶-血管生成抑制素(GST-Angiostatin)融合蛋白表达载体.方法把血管生成抑制素(Angiostatin)基因插入融合基因表达载体pGEX-2T的多克隆位点上,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒DNA,限制性内切酶消化DNA,琼脂糖凝胶电泳.结果经限制性内切酶EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ、Pst Ⅰ酶切质粒DNA,电泳结果证明Angiostatin基因已插入到pGEX-2T中.结论成功构建GST-Angiostatin融合蛋白表达载体,为获得较大量的基因工程Angiostatin产品,为肿瘤治疗研究作必要准备.
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血管生成抑制素治疗血管瘤的研究
目的：观察血管生成抑制素治疗血管瘤的效果。方法发酵毕赤酵母工程菌组成型表达重组血管生成抑制素，用SP-Sepharose Fast Flow (阳离子交换剂)柱进行蛋白纯化；通过抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成试验和诱发血管内皮细胞凋亡试验，分析重组血管生成抑制素的生物学活性，在血管瘤模型(公鸡肉垂)中注射血管生成抑制素，分析血管生成抑制素对血管瘤的药效。结果血管生成抑制素在毕赤酵母中高效表达，经过纯化，收获达98%的重组血管生成抑制素；重组血管生成抑制素具有抑制CAM血管生成和诱发血管内皮细胞凋亡的活性；重组血管生成抑制素与血管瘤模型作用14 d后，瘤体血管生长抑制率为51%(P<0.01)，血管瘤增殖抑制率为39%(P<0.05)。结论成功制备重组血管生成抑制素药物，血管生成抑制素对于血管瘤模型具有显著的药效。
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131 I-AG对内皮细胞生长抑制作用的研究
目的:评价血管生成抑制素(AG)、131I和131 碘标记的血管生成抑制素(131I-AG)对人脐静脉内皮细胞(HECV)生长的抑制作用.方法:体外原代培养新生儿ECV,采用MTT法观察131I-AG、AG、131I对其增殖的影响.结果:①与对照组比较,在(2～32)μg*ml-1时,AG对HECV生长抑制率为(7.4±5.4)%～(17.6±2.7)%(P＜0.01);在放射性浓度＜2.96 GBq*L-1时,131I对HECV的生长未见抑制作用,在浓度=3.70 GBq*L-1时,有抑制作用,其抑制率为11.51±2.7%(P＜0.01);②用131I标记AG后,不同浓度的131I-AG对HECV生长抑制率分别为14.8%、17.3%、22.5%和31.4%,较131I与AG组明显提高(P＜0.01).结论:①AG和131I对体外培养的HECV的生长均有抑制作用;②131I与AG偶联后,131I-AG对HECV生长的抑制有明显的协同作用,提示131I-AG在实体瘤治疗中有潜在的临床应用价值.
关键词： 血管生成抑制素 131I/碘放射性同位素 原代培养 -
血管生成抑制因子的抗癌作用研究进展
血管生成抑制因子是一种有效抑制血管新生和抗癌作用的蛋白质,近年来应用发展十分迅速;血管生成与癌细胞的生长和蔓延有着密切关系,针对血管生成抑制因子为治疗方向的手段在临床实验上已经取得了巨大突破,有望成为未来主要的抗癌疗法之一.本文针对内源性血管生成抑制因子的功能、作用、结构在抗癌作用中的具体应用进行综合研究.
