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菩人丹对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠VEGF 及其受体 VEGFR2/p - VEGFR2和Angiostatin、Endostatin 的影响
目的：观察菩人丹（PuRenDan）对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠胰腺组织中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR2/ p - VEGFR2）和血管生成抑制素（Angiostatin）、内皮细胞抑制素（Endostatin）的影响，探讨菩人丹修复胰腺微循环障碍的机制。方法通过高脂饲料喂养（12周）与尾静脉快速注射小剂量链脲佐菌素（30 mg/ Kg）的方法建立大鼠模型。在同批次正常大鼠中随机选15只为正常对照组，后将成模大鼠随机分为：模型组、菩人丹组（1.77 g/ Kg）、降糖通脉片组（0.42 g/Kg）和二甲双胍组（0.14 g/ Kg），每组15只。各组大鼠每天灌胃1次，正常对照组和模型组给予等剂量蒸馏水，连续给药4周后，提取各组大鼠胰腺组织总蛋白质，采用 Western blot 法测定各组大鼠胰腺组织中 VEGF 及其受体 VEGFR2的蛋白质表达和磷酸化水平，以及 Angiostatin、Endostatin 的蛋白质表达水平。结果与正常对照组相比，模型组胰腺组织 VEGF 蛋白质表达水平和受体 VEGFR2磷酸化水平明显降低（P ﹤0.01），而 Angiostatin、Endostatin 蛋白质表达水平显著增高（P ﹤0.01）；菩人丹干预后，VEGF 蛋白质表达水平和受体 VEGFR2磷酸化水平均显著上调（P ﹤0.01），而 Angiostatin、Endosta-tin 蛋白质表达则被抑制（P ﹤0.01）。其与阳性对照药降糖通脉片和二甲双胍作用相当。结论菩人丹通过上调血管生成促进因子 VEGF 蛋白质表达及其受体 VEGFR2磷酸化，抑制血管生成抑制因子Angiostatin、Endostatin 的蛋白质表达，促进糖尿病状态下胰腺组织微血管新生，进而改善胰腺微循环障碍，发挥其对胰岛β细胞的保护、修复作用。
关键词： 菩人丹 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体2 血管生成抑制素 内皮细胞抑制素 -
菩人丹对高糖诱导的INS-1细胞凋亡、BAD和FOXO1蛋白表达的影响
目的:观察菩人丹(Puren Dan,PRD)对高糖诱导的INS-1细胞凋亡、Bal-xl/Bcl-2相关死亡促进因子(BAD)和叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)蛋白表达的影响,探讨PRD恢复INS-1细胞分泌功能的相关分子机制.方法:采用血清药理学方法制备菩人丹含药血清,建立高浓度葡萄糖(33.3 mmol·L-1)诱导INS-1细胞损伤模型,以菩人丹药物血清干预24 h;实验分为5组,即正常对照组(control组)、高糖模型组(HG组)、菩人丹药物血清高剂量组(H-PRD组)、菩人丹药物血清低剂量组(L-PRD组)和二甲双胍药物血清对照组(MF组);采用CCK8试剂盒检测细胞活力,流式Annexin V-FITC/PI双染法考察细胞凋亡水平,Western blotting assay检测BAD和FOXO1蛋白表达水平及其磷酸化水平.结果:与正常组比较高糖能够显著降低INS-1细胞活力、诱导细胞凋亡、降低INS-1细胞BAD,FOXO1丝氨酸磷酸化水平;与模型组比较菩人丹含药血清(终体积分数10％)则能抑制INS-1细胞凋亡,增加细胞活力,下调FOXO1表达,促进BAD和FOXO1丝氨酸磷酸化.结论:菩人丹药物血清能够减少高糖诱导的INS-1细胞凋亡,这种作用与上调BAD和FOXO1蛋白丝氨酸磷酸化水平直接相关.
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菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜碱性成纤维细胞因子表达的影响
目的:探讨菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜碱性成纤维细胞因子(bFGF)表达的影响.方法:48只Wistar大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组(模型组)、菩人丹超微粉治疗组(菩人丹组)和导升明组,每组12只.糖尿病模型组、菩人丹超微粉治疗组和导升明组大鼠均采用链脲佐菌素(STZ)连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型.模型成功建立后,菩人丹超微粉治疗组大鼠给予菩人丹超微粉灌胃,导升明组大鼠给予导升明灌胃,时间均为3个月.采用SP免疫组织化学染色法、Western blot法检测视网膜bFGF蛋白的表达；逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)检测视网膜bFGF mRNA的表达.结果:糖尿病模型组与正常对照组比较,大鼠视网膜bFGF蛋白及mRNA表达均明显升高(P＜0.01),菩人丹超微粉治疗组、导升明组与糖尿病模型组比较,大鼠视网膜bFGF蛋白及mRNA表达均明显降低(P＜0.01)；且菩人丹超微粉治疗组与导升明组比较无明显差别.结论:菩人丹超微粉可通过下调bFGF表达,抑制病理性新生血管生成,发挥对糖尿病视网膜损伤的保护作用.
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菩人丹对糖尿病大鼠降糖作用的研究
目的:探讨菩人丹的降糖作用.方法:用链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,观察菩人丹对其血糖、血清胰岛素水平的影响;以小鼠为对象,做菩人丹的急性毒性实验.结果:菩人丹可降低大鼠血糖,并存在时效关系;菩人丹各剂量组、二甲双胍组的空腹血糖较模型组均下降(P<0.01),且菩人丹中剂量组与二甲双胍组比较有显著性差异(P<0.05).菩人丹中剂量组能够升高血清胰岛素水平,与模型组比较有显著差异(P<0.05).小鼠急性毒性实验表明,菩人丹无明显毒副作用.结论:菩人丹可以降低实验性高血糖,提高糖尿病大鼠血清胰岛素水平,且无明显毒性作用.
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菩人丹对T2DM大鼠胰岛β细胞分泌功能及胰岛素敏感性的影响
目的:考察菩人丹对2型糖尿病大鼠胰岛素敏感性和胰岛β细胞功能的影响.方法:采用脂肪乳灌胃结合小剂量链脲佐菌素尾静脉快速注射法复制T2DM大鼠模型,菩人丹干预治疗4周后进行口服糖耐量试验,应用HOMA-IR和ISI评价胰岛素敏感性,HOMA-β、△I30/△G30、AUCI评价胰岛β细胞分泌功能,DI评价葡萄糖利用率.结果:菩人丹干预后HOMA-IR明显降低,ISI、HOMA-β、△I30/△G30及DI均显著升高.结论:菩人丹可以有效减轻T2DM大鼠的胰岛素抵抗,提高胰岛素降糖水平,改善胰岛素的早时相分泌.
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菩人丹改善高糖波动状态下INS-1细胞胰岛素分泌功能的分子机制
目的:考察菩人丹改善高糖波动状态下INS-1细胞胰岛素分泌功能的分子机制.方法:将INS-1细胞置于含33.3 mmol·L-1和11.1 mmol·L-1葡萄糖RPMI1640培养液内12h交替培养,持续培养5d构建高糖波动细胞模型.分别以5％、10％菩人丹含药血清对高糖波动状态下INS-1细胞干预24 h,并以二甲双胍含药血清作为阳性对照.正常对照组细胞以含11.1 mmol· L-1葡萄糖的RPMI1640培养液进行培养.采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,大鼠胰岛素ELISA试剂盒测定胰岛素分泌量,Western blot 分析IRS2、Akt、mTOR、P70s6k和PTP1B的蛋白质表达水平及磷酸化水平.结果:与正常组比较,高糖波动能够显著降低INS-1细胞活力及胰岛素分泌量,下调INS-1细胞的IRS2蛋白质表达水平,提高IRS2磷酸化水平,降低INS-1细胞Akt、mTOR和P70s6k的磷酸化水平,上调PTPlB蛋白质表达水平.与模型组比较,菩人丹含药血清能增加INS-1细胞活力及胰岛素分泌量,上调IRS2蛋白质表达,抑制IRS2磷酸化,促进Akt、mTOR和P70s6k的磷酸化,下调PTPlB蛋白表达水平.结论:菩人丹调控高糖波动诱导的INS-1细胞IRS2、Akt、mTOR、P70s6k和PTPlB的蛋白质表达水平及磷酸化水平,改善高糖波动状态下胰岛B细胞胰岛素分泌功能.
关键词： INS-1细胞 高糖波动 胰岛素分泌 菩人丹 IRS2-PI3K/Akt -
菩人丹调控ob/ob小鼠胰腺组织信号传导机制探索
目的:应用信号通路磷酸化广谱筛选抗体芯片技术探索菩人丹调控ob/ob小鼠糖尿病前期病变,减缓T2DM进程的可能信号通路及具体调变位点.方法:以肥胖、胰岛素抵抗为特征的ob/ob小鼠为糖尿病前期模型,利用信号通路磷酸化广谱筛选抗体芯片分析筛选空白组、模型组及菩人丹干预组胰腺组织的磷酸化修饰差异蛋白.结果:菩人丹干预组与模型组比较共筛选发现61个同空白组趋势一致的磷酸化修饰差异蛋白,PANTHER软件对其进行生物学功能分类,发现多参与机体的细胞过程、代谢过程、应激反应、生物调控、发育过程及免疫系统过程,DAVID软件进行Pathway通路富集,导入Cytoscape 3.2.1软件进行通路间关系网络互作分析,确认了ob/ob小鼠糖尿病前期的部分磷酸化修饰差异蛋白所涉及的关键通路.结论:菩人丹干预糖尿病前期病变,延缓T2DM病程发展,主要与胰岛素信号、mTOR信号通路、MAPK信号通路、凋亡、自噬通路及Ca2+通路等密切相关.
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菩人丹对糖尿病大鼠视网膜bFGF蛋白表达及组织形态学影响的研究
目的:利用糖尿病大鼠动物模型,通过观察大鼠视网膜中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)蛋白表达、局部组织形态差异、晶状体等情况,探讨菩人丹在早期糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)治疗中的作用.方法:采用链脲佐菌素(strep tozocin,STZ)注入大鼠腹腔制造糖尿病大鼠动物模型.将实验大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,在5个月时处死动物取其视网膜,观察bFGF蛋白的表达情况、视网膜组织形态的改变情况、晶状体混浊程度以及血糖的变化情况,探讨菩人丹对糖尿病大鼠视网膜中bFGF蛋白表达的影响,以及视网膜组织形态学的改变情况.结果:在上述4个观察指标中,正常组大鼠均为阴性改变,模型组呈强阳性改变,治疗组大鼠呈弱阳性改变,差异有统计学意义(P<0.01).结论:中药菩人丹在治疗早期糖尿病大鼠视网膜病变中可以有效抑制bFGF的表达,改善糖尿病大鼠视网膜血管的瘀血情况,轻度降低血糖,从而起到治疗DR的作用.
关键词： 菩人丹 糖尿病视网膜病变 碱性成纤维细胞生长因子 -
眼底激光联合中药菩人丹治疗糖尿病视网膜病变的临床观察
[目的]评价氪黄激光视网膜光凝术联合中药菩人丹对重度非增殖性糖尿病性视网膜病变(NPDR)治疗的临床疗效.[方法]选取NPDR患者70例,随机分为两组,每组35例(70只眼),治疗组给予视网膜光凝联合中药菩人丹口服;对照组给予视网膜光凝联合羟苯磺酸钙分散片口服.均连续服药3个月,观察治疗前后视力、荧光素眼底血管造影、血液流变学、中医证候疗效等检查结果,并进行组间对比,以评价其疗效.[结果]1)对于视力改善,两组视力治疗前后均有明显改善,有统计学意义(P<0.05);治疗后两组间对比,治疗组优于对照组,两组差异有统计学意义(P<0.05).2)对于眼底照相、荧光素眼底血管造影,两组治疗前后微血管瘤、出血、棉绒斑等均有明显改善,前后对比有统计学意义(P<0.05),治疗后两组间对比差异无统计学意义(P>0.05).3)对于血液流变学的检测,治疗组及对照组均有改善,用药前后全血黏度、血沉、全血还原黏度均降低,前后有统计学意义(P<0.05),用药前后的红细胞变形指数升高(F=14.1,P=0.006),治疗组与对照组用药前后血液流变学各项指标差异有统计学意义(P<0.05).4)中医证候疗效,治疗后两组间进行比较,治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]视网膜光凝联合中药菩人丹治疗重度NPDR临床疗效确切.
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菩人丹对ob/ob小鼠糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响
[目的]考察菩人丹对肥胖小鼠糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响,为中药复方菩人丹调节糖脂代谢的临床应用提供实验依据.[方法]将ob/ob小鼠随机分为模型组和菩人丹组,后者给予菩人丹干预15周,以C57BL/6J为空白组.测定小鼠空腹体质量、内脏脂肪指数、空腹血糖(FPG)、空腹血清胰岛素(FINS)及血脂水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI),评价胰岛素抵抗与分泌水平,口服葡萄糖耐量试验(OGTT)考察ob/ob小鼠对葡萄糖的耐受性;苏木精-伊红(HE)染色观察睾周脂肪细胞形态.[结果]模型组ob/ob小鼠的空腹体质量、内脏脂肪指数、OGTT曲线下面积、血脂水平与HOMA-IR均显著升高,ISI显著下降;菩人丹对ob/ob小鼠空腹体质量、内脏脂肪指数及糖耐量的影响无统计学意义;菩人丹能够降低ob/ob小鼠血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)及HOMA-IR,升高ISI,同时使ob/ob小鼠睾周脂肪细胞排列相对规则有序.[结论]经15周观测,模型组ob/ob小鼠已形成肥胖、血脂紊乱、糖耐量损伤以及胰岛素抵抗,糖尿病前期模型复制成功;菩人丹有效改善了ob/ob小鼠糖脂代谢紊乱,增强了胰岛素敏感性,降低了胰岛素抵抗程度,表明菩人丹对糖尿病前期向2型糖尿病发展有确切的干预效果.
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菩人丹对糖尿病大鼠视网膜HO-1表达的作用
目的:探讨菩人丹(PRD)对糖尿病大鼠视网膜血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响.方法:36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和PRD治疗组,每组12只.糖尿病模型组、PRD治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射的方法建立2型糖尿病大鼠模型,模型成功建立后,PRD治疗组大鼠给予PRD(1.8g/kg/d)灌胃3个月.分别采用Westem blot法和RT-PCR法检测大鼠视网膜HO-1蛋白和mRNA的表达.结果:模型组大鼠视网膜HO-1蛋白和mRNA的表达明显高于正常对照组大鼠(P＜0.01),PRD治疗组大鼠视网膜HO-1蛋白和mRNA的表达明显高于模型组大鼠(P＜0.01).结论:PRD可通过上调HO-1的表达减轻糖尿病时视网膜氧化应激损伤,发挥对糖尿病视网膜病变的保护作用.
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菩人丹对ob/ob肥胖小鼠血清内脂素及脂肪细胞形态的影响
目的 考察菩人丹对ob/ob小鼠糖脂代谢、脂肪细胞形态及血清中脂肪细胞因子内脂素(visfatin)水平的影响,为中药菩人丹调节脂代谢、增加胰岛素敏感性、预防2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的临床应用提供实验证据.方法 将ob/ob小鼠随机分为模型组、菩人丹组和二甲双胍组,饲以高脂饲料,后两者给予菩人丹和二甲双胍干预12周,以C57BL/6J小鼠为正常组,饲以低脂饲料.测定小鼠体质量、内脏脂肪指数、血脂四项(TG、TC、LDL、HDL);口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)考察葡萄糖耐受量;ELISA试剂盒测定血清中脂肪细胞因子内脂素的水平;HE染色观察脂肪细胞形态.结果 菩人丹对ob/ob小鼠体质量及内脏脂肪指数的影响无统计学意义;菩人丹能够降低ob/ob小鼠血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)的水平并升高脂肪细胞因子内脂素的水平;同时使ob/ob小鼠睾周脂肪细胞排列相对规则有序;菩人丹增加ob/ob小鼠糖耐量,但差异无统计学意义.结论 菩人丹可以改善ob/ob小鼠脂代谢紊乱,并改善脂肪细胞排列形态,其作用机制之一可能与升高血清中脂肪细胞因子内脂素的水平有关.
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菩人丹对T2DM胰腺微循环损伤大鼠Ang-1、Ang-2/Tie-2的影响
目的 观察菩人丹(PuRenDan,PRD)对2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)胰腺微循环损伤大鼠胰腺组织中血管生成素-1、2(Angiopoietin-1,-2,Ang-1,-2)及可溶性酪氨酸激酶受体-2(Tyrosine Kinase Receptors-2,TIE-2)的影响,探讨PRD改善胰腺微循环,修复胰岛微血管损伤的分子机制.方法 采用脂肪乳结合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)尾静脉快速推注的方法建立T2DM微循环损伤大鼠模型.成模大鼠随机分为T2DM模型组、菩人丹组(1.77 g·kg-1)和降糖通脉片组(0.42 g·kg-1),另随机选取10只正常大鼠作为正常对照组.各组动物每日灌胃给药1次,正常对照组和T2DM模型组给予等剂量蒸馏水,连续给药4周后,提取各组大鼠胰腺组织总蛋白,采用Westernblot法测定各组大鼠胰腺组织中Ang-1、Ang-2的蛋白质表达,及TIE-2蛋白磷酸化水平.结果 与正常对照组比较,T2DM胰腺微循环损伤大鼠胰腺组织Ang-1蛋白质表达水平和TIE2磷酸化水平明显降低(P＜0.01),而Ang-2蛋白质表达水平显著增高(P＜0.01)；菩人丹治疗后,Ang-1蛋白质表达水平和TIE2磷酸化水平均显著上调(P＜0.01),而Ang-2蛋白质表达被抑制(P＜0.01),其作用与阳性对照药降糖通脉片相当.结论 菩人丹通过调控Ang-1、Ang-2/TIE-2蛋白表达及磷酸化,促进糖尿病状态下胰腺组织微血管生成,进而改善胰腺微循环,发挥其对胰岛β细胞损伤的修复作用.
关键词： 菩人丹 胰腺微循环障碍 血管生成素-1 血管生成素-2 可溶性酪氨酸激酶受体-2
