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麦芪降糖丸对2型糖尿病ob/ob小鼠糖脂水平的影响
目的 研究麦芪降糖丸对2型糖尿病ob/ob小鼠糖脂水平的影响.方法 将ob/ob小鼠按随机数字表法分为模型组及麦芪降糖丸高、中、低剂量组,另设C57BL/6J小鼠为正常对照组,每组13只.麦芪降糖丸组高、中、低剂量组灌胃麦芪降糖丸溶液8、4、2 g/kg,正常对照组和模型组小鼠灌胃等体积0.5％羧甲基纤维素钠,1次/d,连续10周.每周监测小鼠体重;测定各组小鼠空腹血糖;采用生化法测定小鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平和肝脏TG、TC水平;计算肝脏指数.结果 各组小鼠体重无明显差异.与模型组比较,麦芪降糖丸中、低剂量组小鼠空腹血糖[(7.43±1.71)mmol/L、(7.84±1.09)mmol/L比(8.95±0.96)mmol/L]降低(P<0.05),高剂量组小鼠血清TG[(0.93±0.16)mmol/L比(1.18±0.26)mmol/L]、LDL-C[(2.10±0.51)mmol/L比(2.56±0.44)mmol/L]水平降低(P<0.05),肝脏重量[(3.52±0.26)g比(3.98±0.35)g]与肝脏指数[(0.063±0.004)比(0.071±0.006)]降低(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C/LDL-C比值[(2.40±0.39)比(1.96±0.24)]增高(P<0.01);麦芪降糖丸低剂量组肝脏TG[(0.63±0.25)mmol/g比(1.05±0.67)mmol/g]水平降低,血清HDL-C/LDL-C比值[(2.30±0.44)比(1.96±0.24)]升高(P<0.05).结论 麦芪降糖丸可降低2型糖尿病ob/ob小鼠糖脂水平.
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肝细胞脂肪性病变对胰高血糖素样肽1受体表达的影响
目的：观察胰高血糖素样肽1受体（GLP-1R）在ob/ob小鼠肝脏组织中的表达情况以及棕榈酸处理对肝癌细胞株 HepG2细胞 GLP-1R 的影响。方法（1）选择10周龄的雄性 ob/ob 小鼠（C57BL/6J-Lepob/J）与其同窝野生对照型小鼠各5只，取其肝脏组织，RT-PCR方法检测肝脏组织中GLP-1R基因的表达，Western blot法检测GLP-1R蛋白的表达水平，免疫组织化学染色法对肝脏组织进行染色观察。（2）不同浓度棕榈酸对待HepG2细胞24 h后，Western blot 法检测GLP-1R蛋白表达情况，RT-PCR法检测对细胞GLP-1R mRNA的影响。结果 GLP-1R在ob/ob小鼠肝脏中表达明显下降，蛋白表达水平分别为：0.7897±0.1458 vs.0.1361±0.0290，mRNA表达水分别为：0.8038±0.1222 vs.0.4234±0.1777，与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.005）。随着棕榈酸浓度的升高，HepG2细胞GLP-1R水平在mRNA水平与蛋白水平均逐渐下降，且在200μmol/L时出现统计学差异。结论肝脏存在GLP-1R表达，脂肪的过度沉积可显著降低肝脏GLP-1R表达水平，从而影响肝脏对GLP-1的敏感性。
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金银花提取物对小鼠肝脏和人肝细胞PGC-1α表达及胰岛素抵抗的影响
目的:检测金银花提取物对小鼠肝脏和L02细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPART)共激活因子-1αPGC-1α表达及对胰岛素抵抗(IR)的影响.方法:分别将ob/ob小鼠、C57/B6J小鼠和L02细胞随机分为对照组和实验组,实验组给予金银花提取物,对照组给予生理盐水.给药后检测小鼠肝脏和L02细胞PGC-1α表达.结果:与对照组相比,实验组ob/ob小鼠给予金银花提取物后肝脏PGC-1α mRNA和蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);而实验组C57/B6J小鼠给药后肝脏PGC-1α mRNA表达与对照组比较无统计学差异.给药5d后实验组ob/ob小鼠FPG降低,但实验组与对照组组间胰岛素水平无统计学差异,实验组FPG/FIns比值显著降低.胰岛素耐量实验显示金银花提取物改善了ob/ob小鼠的IR.脂肪酸培养L02细胞,给予金银花提取物后PGC-1α mRNA表达下调(P<0.05),而正常培养L02细胞PGC-1αmRNA表达无变化.结论:金银花提取物可以下调PGC-1α在肝脏中的病理性高表达,降低血糖,改善IR.
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虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及机制研究
探讨虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及保护机制.将12周龄的雄性B6.V-Lepob/Lepob小鼠,按照血糖和体重分层后随机分为5组,并以C57BL/6J小鼠为对照组.每周监测一次体重和摄食,在给药2周和4周时,眼眶静脉取血测定血清中的各项生化指标,在给药5周时,进行胰岛素耐量实验,在给药7周后取肝脏组织对甘油三酯、胆固醇及炎症因子含量进行检测,并进行苏木精-伊红染色和油红O染色;提取肝组织的总RNA,采用实时定量PCR技术分析与脂质合成和炎症相关基因的表达.结果显示,虫草素可以有效降低ob/ob小鼠血脂水平,改善肝功能,明显降低肝脏组织脂质含量和炎症因子水平,而对胰岛素抵抗未见改善作用.实时定量PCR结果表明,虫草素可显著降低ob/ob小鼠肝脏组织中与脂质合成及炎症相关mRNA的表达.结果提示,虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝具有改善作用,其作用机制可能与下调脂质合成和炎症相关基因表达有关.
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菩人丹对ob/ob小鼠糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响
[目的]考察菩人丹对肥胖小鼠糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响,为中药复方菩人丹调节糖脂代谢的临床应用提供实验依据.[方法]将ob/ob小鼠随机分为模型组和菩人丹组,后者给予菩人丹干预15周,以C57BL/6J为空白组.测定小鼠空腹体质量、内脏脂肪指数、空腹血糖(FPG)、空腹血清胰岛素(FINS)及血脂水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI),评价胰岛素抵抗与分泌水平,口服葡萄糖耐量试验(OGTT)考察ob/ob小鼠对葡萄糖的耐受性;苏木精-伊红(HE)染色观察睾周脂肪细胞形态.[结果]模型组ob/ob小鼠的空腹体质量、内脏脂肪指数、OGTT曲线下面积、血脂水平与HOMA-IR均显著升高,ISI显著下降;菩人丹对ob/ob小鼠空腹体质量、内脏脂肪指数及糖耐量的影响无统计学意义;菩人丹能够降低ob/ob小鼠血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)及HOMA-IR,升高ISI,同时使ob/ob小鼠睾周脂肪细胞排列相对规则有序.[结论]经15周观测,模型组ob/ob小鼠已形成肥胖、血脂紊乱、糖耐量损伤以及胰岛素抵抗,糖尿病前期模型复制成功;菩人丹有效改善了ob/ob小鼠糖脂代谢紊乱,增强了胰岛素敏感性,降低了胰岛素抵抗程度,表明菩人丹对糖尿病前期向2型糖尿病发展有确切的干预效果.
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脂多糖干预ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
背景:肥胖是牙周炎及机体其他疾病的易感因素,因肥胖与瘦素密切相关,目前尚无通过瘦素基因突变小鼠骨髓间充质干细胞的分化情况探索相关机制的研究.目的:通过研究ob/ob遗传性肥胖小鼠骨髓间充质干细胞在脂多糖刺激下的成骨能力及成骨相关分子的表达,从分子及细胞水平探讨肥胖与成骨能力的相关机制.方法:选用8周龄雄性肥胖ob/ob小鼠、8周龄雄性C57小鼠(由中国医学科学院实验动物研究所提供)各8只,取两组小鼠双侧股骨,采用全骨髓法分离培养纯化得到ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞及C57小鼠骨髓间充质干细胞,加入含有100 μg/L脂多糖的成骨诱导液进行成骨诱导分化,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测观察比较两组小鼠骨髓间充质干细胞成骨能力.采用RT-PCR检测两组小鼠骨髓间充质干细胞中Alp、Runx2、Ocn、Nf-Kb mRNA表达水平.结果与结论:①成骨诱导1周后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶染色减弱,碱性磷酸酶活性显著降低(P＜0.01);成骨诱导液中添加脂多糖后,碱性磷酸酶活性较未添加脂多糖组显著下降(P＜ 0.01),ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性亦较C57小鼠骨髓间充质干细胞显著降低(P＜0.05);②成骨诱导2周后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞茜素红染成橘红色的矿化结节减少,而成骨诱导液中添加脂多糖后,两组骨髓间充质干细胞均未见矿化结节形成;③成骨诱导后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞中Alp、Runx2、Ocn mRNA表达降低(P＜ 0.05);诱导液中加入脂多糖后,Alp、Runx2、Ocn表达较未添加脂多糖组均显著减少(P＜0.05),且在ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞中Ocn、Runx2表达较C57小鼠骨髓间充质干细胞明显降低(P＜0.05);④结果表明,瘦素缺乏的肥胖小鼠骨髓间充质干细胞成骨向分化发生障碍.在低浓度脂多糖刺激下,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化能力较C57小鼠骨髓间充质干细胞下降更明显.
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重组人成纤维细胞生长因子21降糖作用研究
目的 利用肝细胞、肌肉细胞,前脂肪细胞及ob/ob小鼠进行rhFGF21体内外降糖作用研究.方法 培养人正常肝细胞(HL-7702),大鼠肌肉细胞(L-6),小鼠前脂肪细胞(3T3-L1),用GOD-POD试剂盒测定细胞葡萄糖吸收量;FGF-21按照每天0.6 μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射7 d,分别在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测空腹血糖,以生理盐水做对比;rhFGF-21按照每天0.6 μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射9 d,末次给药后1 h开始口服糖耐量实验,灌胃给予2 mg·g-1的葡萄糖溶液,分别于给予葡萄糖溶液后30、60、120 min检测血糖;rhFGF-21按照每天2.5 μg·g-1的剂量颈部皮下注射连续7 d,在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测餐后血糖.结果 在3.9 mg·L-1~100 mg·L-1间rhFGF21促进HL-7702细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);在0.3 mg·L-1~250 mg·L-1间rhFGF21促进L6肌细胞对葡萄糖的吸收,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);在12.6 mg·L-1~100 mg·L-1间rhFGF21促进分化的3T3-L1细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);ob/ob小鼠血糖测试证明,rhFGF-21具有降血糖和改善葡萄糖耐受量的作用.结论 rhFGF21体外可促进肝细胞、肌肉细胞及脂肪细胞葡萄糖的吸收;rhFGF-21可降低ob/ob小鼠空腹血糖及餐后血糖,具有改善其葡萄糖耐受量的作用.
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ob/ob肥胖小鼠肝脏炎症及能量代谢相关转录因子表达特征
目的:以ob/ob基因敲除肥胖小鼠为研究模型,探讨肥胖对小鼠肝脏炎症的影响以及ob/ob小鼠肝脏中与能量代谢相关转录因子:过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator activated receptorγ coactivator-1α,PGC-1 α)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor α,PPARα)、核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)的基因表达特征.方法:选取以C57BL/6J为背景的雄性ob/ob肥胖小鼠(以下简称ob/ob小鼠)作为肥胖模型,同龄正常C57BL/6J雄性小鼠作为对照,2组小鼠各8只,于SPF级动物房饲养至5月龄,处死后取肝组织,石蜡包埋切片,HE染色观察组织形态;抗原F4/80免疫组化染色观察巨噬细胞浸润情况;RT-PCR检测各转录因子mRNA表达水平.结果:5月龄ob/ob小鼠体质量和肝脏质量高于对照组(t=9.66,P=0.000; t=9.98,P=0.000);石蜡切片HE染色结果显示ob/ob小鼠肝细胞胞浆内出现空泡状脂肪滴;F4/80免疫组化结果显示ob/ob小鼠肝脏组织巨噬细胞浸润明显;RT-PCR结果显示ob/ob小鼠肝脏组织转录因子PGC-1α、PPARα、NRF1的mRNA表达水平较对照组明显上调(t=3.02,P=0.009;t=5.64,P=0.000;t=2.93,P=0.011).结论:ob/ob小鼠表现出显著的肥胖特征,肝细胞出现明显脂质沉积,肝组织炎性细胞浸润;上述改变可能与肝脏能量代谢相关转录因子PGC-1α,PPARα和NRF1的表达增加有关.
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二氢杨梅素改善ob/ob小鼠心脏功能及其相关作用机制研究
目的 探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对瘦素(leptin)突变型ob/ob肥胖小鼠心脏功能的保护作用及其相关分子机制.方法 36只雄性ob/ob小鼠采用随机数字表法分为ob/ob组、DHM 50 mg/kg干预组(ob/ob+ DHM 50 mg/kg)、DHM 100 mg/kg干预组(ob/ob+ DHM 100 mg/kg),每组12只,干预16周;10只C57 BL/6J野生型小鼠作为正常对照组(WT).检测葡萄糖耐量和胰岛素耐量,超声心动图检测心脏功能;HE和Masson染色检测心肌的组织形态和胶原沉积;Western blot检测心肌组织中过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α (peroxisome proliferator activator receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1 α)和蛋白水解酶剪切Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5(fibrone-ctin type Ⅲ domain-containing protein 5,FNDC5)表达;免疫组织化学法检测心肌组织中FNDC5的表达.结果 与WT组相比,ob/ob组葡萄糖耐量、胰岛素耐量明显受损(P＜0.05);ob/ob组舒张期左室内径(diastolic left ventricular diameter,LVIDd)、收缩期左室内径(systolic left ventricular diameter,LVIDs)、舒张早期峰值血流速度(E峰)与舒张晚期峰值血流速度(A峰)的比值(E/A)等指标无明显变化(P＞0.05),但短轴缩短分数(fraction of shortening,FS)和射血分数(ejection fraction,EF)明显降低(P＜0.05),HE染色和Masson染色未发现明显的心肌细胞肥大及胶原沉积;心肌组织PGC-1α和FNDC5蛋白表达显著降低(P＜0.05).DHM干预16周后,显著改善葡萄糖耐量和胰岛素耐量受损、FS和EF的降低、PGC-1α和FNDC5蛋白表达的降低(P＜0.05).结论 DHM改善ob/ob小鼠心脏功能与PGC-1 α/FNDC5通路相关.
