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甲状腺激素应答蛋白Thrsp在脂质合成中的调节作用
甲状腺激素应答点14蛋白(thyroid hormone responsive SPOT 14 homolog,Thrsp),也可简称为点14 (Spot 14)或S14,仅表达于肝脏、脂肪和哺乳期乳腺等脂质合成活跃的组织,可被甲状腺激素和高糖饮食等刺激脂质合成的因子迅速上调.体外实验中敲低Thrsp可导致细胞的脂质合成降低;而在Thrsp敲除小鼠,乳腺的脂质合成下降、乳汁甘油三酯含量减少而肝脏的脂质合成反而增多.这是由于Thrsp的同源基因--S14R (S14 related)在除乳腺外全身组织广泛表达,但在乳腺不表达.Thrsp表达和脂质合成还影响正常乳腺上皮细胞的增殖,并与乳腺癌的恶性度和复发率高度相关.S14R在表达调节及促脂质合成两方面均与Thrsp存在重叠.S14R通过与脂肪酸合成的限速酶乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)结合,使之发生聚合,而显著提高酶活性,进而引起肝脏脂肪酸合成增多和甘油三酯堆积.Thrsp则通过与S14R形成异源二聚体,降低ACC的聚合与活性.显然这只能解释Thrsp敲除小鼠中肝脏的脂质合成为何增多,而Thrsp促进脂质合成的机制还有待于继续深入研究.总之,Thrsp与S14R是脂质合成的重要调节基因,在泌乳、乳腺癌生长与浸润、脂肪肝发生发展、胰岛素抵抗等生理和病理生理过程中起着重要作用.
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mTORC1信号通路亮氨酸感受器--Sestrin2
亮氨酸是重要的蛋白质合成原料，同时也可作为信号分子参与调节包括饱感、胰岛素分泌、骨骼肌合成代谢等多种生理活动。mTOR 复合物1（mTOR complex 1，mTORC1）蛋白激酶是调节亮氨酸功能的关键调控分子，通过控制蛋白质、脂质合成、自噬等过程调控细胞发育。然而，mTORC1上游的亮氨酸相关信号通路尚不清楚。
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二甲双胍可通过抑制肝脏脂质合成预防肝癌的发生
很多因素可增加肝细胞肝癌(HCC)的发生风险.近期研究表明,2型糖尿病可增加H-CC的发病风险,意味着2型糖尿病患者可作为预防癌症的目标人群.二甲双胍作为2型糖尿病的一线用药,主要在肝脏发挥作用.多项研究提示,二甲双胍与可降低HCC的发生风险.虽然许多临床前期研究表明,二甲双胍可在众多组织中发挥抗癌性能,但是目前尚无研究直接证实二甲双胍在防止肝脏癌变中的作用.
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虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及机制研究
探讨虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及保护机制.将12周龄的雄性B6.V-Lepob/Lepob小鼠,按照血糖和体重分层后随机分为5组,并以C57BL/6J小鼠为对照组.每周监测一次体重和摄食,在给药2周和4周时,眼眶静脉取血测定血清中的各项生化指标,在给药5周时,进行胰岛素耐量实验,在给药7周后取肝脏组织对甘油三酯、胆固醇及炎症因子含量进行检测,并进行苏木精-伊红染色和油红O染色;提取肝组织的总RNA,采用实时定量PCR技术分析与脂质合成和炎症相关基因的表达.结果显示,虫草素可以有效降低ob/ob小鼠血脂水平,改善肝功能,明显降低肝脏组织脂质含量和炎症因子水平,而对胰岛素抵抗未见改善作用.实时定量PCR结果表明,虫草素可显著降低ob/ob小鼠肝脏组织中与脂质合成及炎症相关mRNA的表达.结果提示,虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝具有改善作用,其作用机制可能与下调脂质合成和炎症相关基因表达有关.
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丹皮酚对高脂血症小鼠的脂代谢调节保护作用及其机制
目的 研究丹皮酚对饮食诱导的高脂血症小鼠模型的脂代谢的影响及其机制.方法 根据不同性质的饮食随机将雄性C57小鼠分为4组,每组10只:正常组、模型组、小大2个剂量实验组(250,500 mg·kg-1丹皮酚),共干预12周.12周后,测定小鼠的体重、内脏脂肪率、血脂及脂代谢关键酶.以比色法检测小鼠的肝脂酶(HL)、脂蛋白脂酶(LPL)与HMG-CoA还原酶水平.以Real-time PCR检测固醇调节元件结合蛋白1 c(SREBP-1c)、脂肪酸合酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)的基因表达水平.结果 经12周的高脂饮食,模型组的总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)分别为(3.87±0.24),(0.87±0.10),(2.23 ±0.11) mmol·L-1,较正常组差异均有统计学意义(均P ＜0.05).丹皮酚干预后,低高2个剂量实验组的TC、LDL-C、HDL-C分别为(3.13±0.22),(2.64±0.21) mmol·L-1;(0.62±0.08),(0.59±0.07)mmol· L-1;(1.92±0.09),(1.71±0.07) mmol·L-1.与模型组比较差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).模型组的HL与LPL活性分别为(4.31±0.52),(8.49±1.11)U·mL-1,较正常组明显降低,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).在丹皮酚干预下,低高2个剂量实验组的HL与LPL活性分别为(6.92±1.01),(8.23±1.14)U·mL-1;(11.87±1.19),(15.42±1.75)U·mL-1,与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).高脂饮食诱导了HMG-CoA还原酶活性的增强,与正常组比较,模型组差异有统计学意义(P＜0.01);但是这一增强作用被丹皮酚所抑制,与模型组比较差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).高脂饮食诱导SREBP-1c mRNA、FAS mRNA、ACCα mRNA、HMGCR mRNA及SCD-1 mRNA,模型组均较正常组分别上调了370％,420％,410％,400％,260％,差异均有统计学意义(均P＜0.01).低高2个剂量实验组降低了模型组的SREBP-1c mRNA、FAS mRNA表达,分别为27.7％,26.9％;57.4％,55.8％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 丹皮酚能防治肥胖及高脂血脂,该作用可能与调节脂酶活性、抑制脂质合成相关.
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高脂血症怎样合理用药?
目前市场销售的调脂药物的品种很多,按其药理可分为影响脂质合成、代谢和廓清的药物,其中又包括烟酸类、贝特类、羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HNG-C0A)还原酶抑制药,影响胆固醇及胆酸吸收的药物,多烯脂肪酸类药物等.按调脂药物的主要作用,则可分为降胆固醇药、降甘油三酯药、降胆固醇和甘油三酯药.
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非酒精性脂肪性肝病发病机制进展
非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种遗传-环境-代谢应激相关性疾病,代谢紊乱、氧化应激及细胞因子等多种因素共同作用导致肝脏的脂质合成与排泄失衡,肝细胞内脂肪蓄积,进而发展为非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)和肝硬化.
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肝脏脂质合成的转录调控研究进展
肝脏中脂质的合成对于形成极低密度脂蛋白和向其他组织输送能量非常重要,而这一过程受到严格调控.脂质合成基因的转录受到一系列转录因子如上游刺激因子、固醇反应元件结合蛋白、碳水化合物反应元件结合蛋白、肝脏X受体等的调控.而这些转录因子及其共调节因子的功能、稳定性和细胞内定位又受到翻译后修饰状态如磷酸化、乙酰化、糖基化等的影响.肝脏脂质合成调节紊乱能导致肝脏脂肪病变并与肥胖和胰岛素抵抗密切相关.本文就调控脂质合成的重要转录因子及其翻译后修饰做一综述.
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RNA特异腺苷脱氨酶1(p150亚型)抑制肝细胞脂质合成
目的:在油酸诱导的肝细胞脂肪变模型中,检测RNA特异腺苷脱氨酶1 p150亚型(ADAR1-p150)高表达细胞系中脂肪合成的变化.方法:利用本课题组前期摸索的油酸刺激人胚胎肝细胞L-02细胞系脂肪变的条件,qRT-PCR和Western-Blot检测油酸刺激组和对照组ADAR1-p150表达变化;将构建成功的ADAR1-p150过表达慢病毒载体GV 166-ADAR1-p150及空载体病毒GV 166-control感染L-02细胞,检测感染细胞中ADAR1-pl50的mRNA和蛋白表达水平;通过油红O染色和BODIPY染色观察L-02 ADAR1-p 150和L-02 control细胞中脂滴形成,并进一步利用高内涵系统检测其荧光强度,对脂滴合成作定量分析.结果:L-02细胞在油酸刺激后ADAR1-p150的mRNA和蛋白水平降低;成功构建ADAR1-p 150过表达慢病毒载体GV166-ADAR1-p150及空载体病毒GV166-control,qRT-PCR及Western-Blot检测显示病毒转染GV166-ADAR1-p150后ADAR1-p150在细胞中的表达水平显著升高;油红O染色和BODIPY染色发现L-02 ADAR1-p150较L-02 control细胞胞质中脂滴数量减少.高内涵筛选系统检测提示L-02 ADAR 1-p 150组中脂滴的荧光强度明显较L-02 control组低.结论:成功构建ADAR 1-p 150过表达稳定转染L-02细胞系,并证实高表达ADAR1-p150能够抑制脂肪合成.
关键词： ADAR1-p150 脂质合成 高内涵筛选系统 -
磷酸腺苷激活的蛋白激酶与肝脏能量代谢
肝脏作为机体储存能量和调节代谢的重要器官,维持机体合成代谢和分解代谢的平衡.机体能量缺乏时,肝脏糖异生及糖原分解增强,脂肪酸氧化增加,为肝外器官提供充足能量;机体能量过剩时,肝脏增加糖原及脂质合成来储备能量.
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氧化型染发剂主要成分对皮肤细胞DNA、脂质和蛋白质合成能力的影响
目的:探讨氧化型染发剂主要成分对皮肤角朊细胞DNA和脂质合成能力及对真皮成纤维细胞蛋白质合成能力的影响.方法:用氧化型染发剂的2种主要成分双氧水(H2O2)和对苯二胺(PPD)及两者的混合物对大鼠角朊细胞和真皮成纤维细胞进行染毒,然后进行放射性核素标记产物的掺入,在Beckman LS 5000TD液体闪烁仪上测定cpm值.结果:经12 h染毒后,受试样品对大鼠皮肤细胞的DNA、脂质和蛋白质合成均有不同程度的抑制作用,随着染毒剂量的升高,细胞毒性逐渐增强,染毒剂量与cpm值之间呈剂量反应关系.结论:氧化型染发剂对皮肤细胞DNA、脂质和蛋白质合成能力有抑制作用,可能会破坏皮肤的结构和功能.
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IL-6上调SCD1表达对HepG2细胞脂质合成功能的影响
目的 探讨IL-6对HepG2细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)基因的影响及其SCD1基因表达的改变对细胞脂质合成的影响.方法 应用rIL-6刺激HepG2细胞,检测细胞内脂质合成以及细胞SCD1基因水平变化.分别构建人SCD1真核表达质粒和小干扰(small interfering)RNA,转染HepG2细胞,观察改变SCD1水平后HepG2细胞脂代谢相关基因表达的变化以及细胞内脂质合成的变化.结果 rIL-6刺激HepG2细胞甘油三酯水平显著高于对照组(P<0.05);与空质粒组比,转染真核表达质粒细胞SCD1蛋白表达增加,细胞脂质合成相关基因SREBP1c和FASN相对水平增加1.35倍和1.27倍,脂质氧化代谢相关基因PPARα和ASCL3水平降低12.3％和13.5％;细胞甘油三酯水平显著升高(P<0.01),而转染small interfering RNA,再用rIL-6刺激HepG2细胞SCD1蛋白表达显著降低,细胞甘油三酯水平也显著降低(P<0.05),脂质合成相关基因SREBP1c和FASN水平显著下降了32.3％和51.9％,脂质分解相关基因PPARα相对水平也下降了80％(P<0.05),而ASCL3水平无显著变化(P=0.832).结论 rIL-6通过上调HepG2细胞SCD1基因表达,引起细胞内脂质合成增加,导致甘油三酯含量增多.
关键词： HepG2细胞 硬脂酰辅酶A去饱和酶1 脂质合成 -
Garcinol对非酒精性脂肪肝细胞内脂质合成的作用及机制
目的 非酒精性脂肪肝发病率日益增高,但治疗手段有限,本研究拟探讨从植物中提取的garcinol对非酒精性脂肪肝细胞内脂质合成作用及可能机制.方法 通过油红染色及甘油三酯检测试剂盒检测油酸钠HepG2细胞内脂质沉积及甘油三酯含量;实时定量PCR及western blot检测细胞内脂肪酸合酶的表达;染色质免疫沉淀及实时定量PCR测定脂肪酸合酶转录起始点组蛋白乙酰化程度.结果 Garcinol不仅能显著抑制油酸钠诱导的肝细胞内脂质沉积及甘油三脂合成(P＜0.05),亦能下调脂肪酸合酶的表达(P＜0.05),同时亦能阻断脂肪酸合酶转录起始点组蛋白H3和H4乙酰化(P＜0.05).结论 Garcinol通过阻断脂肪酸合酶基因转录起始点组蛋白乙酰化,下调该基因表达,从而抑制非酒精性脂肪肝细胞内脂质合成.
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脂质代谢中的重要靶点:法尼酯X受体(FXR)
法尼酯X受体(FXR)是一种可以被胆汁酸激活的核受体,通过调控CYP7 A1等靶基因的表达,影响脂质在肝脏、小肠等重要器官的各种代谢过程.本文拟就近几年来探究FXR在脂质合成、氧化、吸收及转运环节中的作用机制作一综述,进而FXR有望成为治疗脂肪肝、高甘油三酯血症等疾病的药物靶点,为预防和治疗临床上疾病的发生提供科学依据.
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APCDD1对骨髓基质干细胞成脂分化及脂质合成的影响
目的 探讨结肠腺瘤样息肉下调蛋白1(APCDD1)对骨髓基质干细胞(BMSC)成脂分化及脂质合成的影响.方法 将培养好的BMSC系ST2细胞随机分为空白对照组、实验组与对照组.采用无缝克隆法构建APCDD1过表达质粒.实验组、对照组分别转染APCDD1过表达质粒、pcDNA3.1质粒,空白对照组常规培养.采用传统鸡尾酒法诱导ST2细胞向脂肪细胞分化成熟.用qRT-PCR法检测在ST2细胞成脂分化过程中APCDD1 mRNA表达.用油红O染色法检测细胞内脂滴生成情况,测定OD520值;分别用qRT-PCR及Western blotting技术检测ST2细胞内相关基因、蛋白表达.结果 成脂诱导1～5 d,APCDD1 mRNA相对表达量升高,均高于0 d(P均<0.05),成脂诱导2 d时APCDD1 mRNA相对表达量高(P均<0.05).转染后,实验组APCDD1 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05);ST2细胞形成的脂滴数量增多,实验组OD520值高于对照组(P<0.05).与对照组比较,实验组成脂分化特异性因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ、CCAAT增强子结合蛋白α、脂肪酸结合蛋白4 mRNA及蛋白相对表达量高(P均<0.05),脂肪合成代谢关键因子脂肪酸合酶、脂滴包被蛋白、乙酰辅酶A羧化酶1 mRNA及蛋白相对表达量高(P均<0.05).结论 APCDD1可促进BMSC的成脂分化和脂质合成.
关键词： 结肠腺瘤样息肉下调蛋白1 骨髓基质干细胞 成脂分化 脂质合成 -
核受体FXR硫氢化修饰后缓解非酒精性脂肪肝
目的：随着饮食习惯和生活方式改变，非酒精性脂肪肝发病率近十年来明显增高。 FXR在胆汁酸代谢及糖脂代谢中起重要作用， FXR硫氢化修饰后对糖脂代谢影响机制尚不清楚。方法：本研究主要用modified biotin switch assay 检测FXR硫氢化修饰。分别用CSE腺病毒和siRNA过表达和敲低H2 S观察FXR变化。 Real－time PCR和Weastern blot等方法检测FXR及下游信号通路关键分子mRNA和蛋白水平变化。用高脂喂养小鼠给予H2 S供体，观察肝脏形态学变化。结果：内源性和外源性H2 S都可使FXR发生硫氢化修饰，并增强其转录活性，抑制糖脂代谢关键分子SREBP1－C表达，其下游FAS、ACC、PEPCK、G6Pase等脂肪酸从头合成基因和糖异生基因受到抑制，动物实验部分高脂饮食小鼠给予H2 S供体腹腔注射后，肝脏HE染色和油红O染色均表明脂滴变小，脂肪肝减轻。结论：研究提示FXR硫氢化修饰后抑制脂质合成，减轻脂肪肝。
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CD38缺失通过Sirt1／PPARγ信号通路抑制脂肪细胞分化
目的：我们的前期结果表明，CD38缺失可显著抵抗高脂饮食诱导的小鼠肥胖，本文旨在探讨CD38在脂肪细胞分化中的作用及其机制。方法：制备野生型及CD38基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞（ MEF），诱导MEF向脂肪细胞分化，油红O染色检测脂肪细胞分化过程中脂质堆积的情况，同时采用real－time PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ PPARγ）和脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（ aP2） mRNA水平表达，Western blot检测PPARγ、Sirt1以及脂质合成相关蛋白SREBP1、FASN的表达水平。结果：3T3－L1、野生型MEF及C3H10T1／2细胞分化过程中CD38的表达随分化显著升高。 CD38缺失的MEF细胞分化后脂滴明显少于WT，PPARγ及aP2表达显著下调，脂质相关蛋白SREBP1和FASN的表达也显著下调，而Sirt1表达升高。在对野生型及CD38缺失小鼠的MEF诱导分化脂肪细胞时给予Sirt1抑制剂尼克酰胺，与野生型相比CD38缺失鼠MEF细胞PPARγ及aP2的表达明显抑制。高脂饮食喂养发现，CD38缺失小鼠脂肪含量明显少于野生型小鼠，同时分化相关基因的表达也显著下调。经Sirt1抑制剂尼克酰胺处理8 d后，3T3－L1前脂肪细胞中PPARγ、aP2和FASN的mRNA水平均上调，Sirt1激动剂白藜芦醇则可下调以上基因的表达。结论：CD38缺失主要通过Sirt1／PPARγ信号通路抑制脂肪细胞分化。
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牛樟芝对酒精性脂肪肝的抑制作用及机制
目的：研究牛樟芝提取物对小鼠酒精性脂肪肝的抑制作用及机制。方法：将15只雄性6周龄C57BL／6野生型小鼠随机均分为对照组、模型组及牛樟芝组。3组动物每日灌胃1次，模型组按10 mL／kg体重给予30％乙醇；牛樟芝组在造模同时给予500 mg／kg牛樟芝提取物；对照组给予等体积生理盐水。4周后取材，对小鼠肝指数、血清门冬氨酸氨基转移酶（ AST）和丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、肝脏病理形态学及脂质合成相关基因mRNA水平表达进行检测。结果：造模组小鼠肝指数、ALT、AST水平较对照组显著升高；牛樟芝组与之相比显著降低以上指标（ P＜0．05）。肝脏HE和油红O染色结果表明，造模组肝细胞形态紊乱、出现脂肪变性、有明显的脂质沉积；牛樟芝组较之，肝脏细胞形态良好、脂质沉积明显减少。肝脏PCR结果表明，牛樟芝组可显著降低由酒精引起的脂质合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1 c、脂肪酸合成酶及乙酰辅酶A羧化酶mR－NA水平的增高（ P＜0．05）。结论：牛樟芝对酒精性肝损伤及肝脏脂质沉积具有抑制作用，机制与抑制肝脏脂质合成相关基因有关。
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OGG1的功能及其在线粒体DNA损伤中的作用
线粒体是真核细胞内重要的细胞器,在能量产生、氨基酸代谢、脂质合成、Fe2+/Ca2+平衡以及细胞凋亡中起着关键作用.人体近90％的能量是由线粒体通过电子传递链(ETC)的氧化磷酸化作用产生的.线粒体是产生活性氧(ROS)主要的场所,约有1％～5％的氧在线粒体ETC中转变成ROS[1].哺乳动物线粒体中含有共价闭环线粒体DNA (mtDNA),包含37个基因,编码13种蛋白质,22个tRNA和2个rRNA[2].
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微RNA与非酒精性脂肪性肝病
非酒精性脂肪性肝病(non-alcohol fatty liver disease,NAFLD)包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)、进展性肝纤维化和肝硬化等一系列疾病谱[1].近年来,研究者逐渐认识到NAFLD是代谢综合征在肝脏的表现,且与心血管发病密切相关,因而NAFLD成为全球医学研究的热点[2].
